重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果评估

2017年7月,农业部决定对全国家禽开展H7亚型流感免疫。为评价重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对家禽的安全性及免疫效果,2017年10—12月以田间试验方式,常规养殖肉鸡(江村黄鸡)、樱桃谷白鸭、黑棕鹅各120只。按程序免疫:肉鸡9日龄首免(剂量0.3 mL),30日龄二免(剂量0.5 mL);樱桃谷白鸭15日龄首免(剂量1 mL);黑棕鹅15日龄首免(剂量1 mL)、50日龄二免(剂量1.5 mL)。定期采集血清测定抗体效价直至出栏,并每日观察禽群临床表现。试验结果显示:鸡首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为4.2 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为7.5 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于8 log2,抗体合格率均大于70%。鸭首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为5.1 log2,抗体合格率均大于70%,H7亚型HI抗体效价为5.6 log2,抗体合格率均大于70%,出栏前(47日龄)H5和H7亚型HI抗体效价均大于6 log2,抗体合格率均大于70%。鹅首免后21 d,H5亚型HI抗体效价为3.9 log2,抗体合格率均小于70%,H7亚型HI抗体效价为5.2 log2,抗体合格率均大于70%;二免后H5和H7亚型HI抗体效价均大于7 log2,抗体合格率均大于70%。通过临床观察,未发现该疫苗有严重免疫副反应。试验结果表明,该二价灭活疫苗安全有效,但对于生长周期超过70 d天的家禽,应免疫两次。     

猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果

为了解口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果,对试验仔猪在28³5日龄进行了第1次免疫注射,在5835日龄进行了第1次免疫注射,在58⁶5日龄进行了第2次免疫注射,并在二免后10、30、60和90 d采血,通过ELISA检测抗体水平的变化。结果显示:在二免后10 d的平均免疫抗体效价达到6.26 log2,免疫抗体合格率为91.25%;二免后30 d的平均免疫抗体效价达到6.8 log2,免疫抗体合格率为100%;二免后60 d的平均免疫抗体效价达到6.6 log2,免疫抗体合格率为99.17%;二免后90 d的平均免疫抗体效价达到6.27 log2,免疫抗体合格率为92.72%,说明猪口蹄疫O型灭活疫苗能快速诱导产生高水平的抗体,并且能够维持较长的时间。在对仔猪进行疫苗的2次免疫注射时,观察并记录了仔猪的应激反应,结果显示仔猪并没有出现较大的应激反应,说明疫苗的免疫副作用小。在全区进行全覆盖推广应用时,随机共采样1 456份血清样品进行了免疫抗体监测,其中规模养殖场监测了56户,采样数1 378头,平均免疫抗体效价6.42 log2,免疫合格率为95.23%;散养户监测了43户,采样数78头,平均免疫抗体效价6.31 log2,免疫合格率为93.1%。口蹄疫O型灭活疫苗(O/MYA98/BY/2010株)的免疫效果较好,值得在全区推广应用。     

H5Rel与H5N28两种禽流感疫苗对肉番鸭免疫效果的对比试验

用H5Rel与H5N28两种疫苗在肉番鸭体内的免疫效果对比研究。首免后35d，两组抗体效价没有明显差异。二免后19d，H5Rel组抗体效价提高0．9log2，至免后25d效价达到最高峰值8．4log2，比H5N28组效价高2．9log2。以后相对稳定，至二免后60d抗体效价H5Rel组平均维持在7.3log2，H5N28组平均为5log2。     

鸡新城疫卵黄抗体效价动态变化情况研究

选取150日龄健康产蛋母鸡40羽,肌肉注射鸡新城疫Lasota疫苗2倍剂量/羽,10 d后再注射鸡新城疫油乳剂灭活苗4倍剂量/羽,自由采食和饮水。分别收集免疫前、免疫后10、20、30、40和50 d,母鸡所产鸡蛋提取卵黄抗体,测定不同时间卵黄抗体效价。结果发现免疫前卵黄抗体效价较低,鸡新城疫Lasota疫苗免疫后卵黄抗体效价开始缓慢升高,鸡新城疫油乳剂灭活苗加强免疫后卵黄抗体效价大幅度提高,并在二免后20 d卵黄抗体效价达到高峰,维持一段时间后卵黄抗体效价开始逐步下降。表明收集鸡新城疫疫苗二免后20 d左右的鸡蛋提取卵黄抗体效价高。     

H5N1和H7N9亚型双价灭活流感疫苗对鹌鹑及鸽子的免疫原性

为评价重组流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对鹌鹑和鸽子的安全性及免疫效果,2017年12月—2018年6月,采用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的重组流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗,对鹌鹑和肉鸽,在25日龄首免,46日龄二免(鹌鹑和肉鸽的剂量分别为0.3 mL和1 mL),观察禽群临床表现,定期采集血清测定抗体效价。结果显示:鹌鹑首免后21 d,H5和H7亚型HI抗体效价均达到高峰,分别为(7.7±1.3)log2和(8.5±1.3)log2,抗体合格率大于70%的持续期约为35 d;二免后7d,H5和H7亚型抗体效价均达到高峰,效价分别为(9.7±0.9)log2和(10.3±0.9)log2,H5和H7亚型抗体合格率大于70%的持续期分别约为147 d和175 d。鸽子首免后21 d,H5和H7抗体效价也均到达高峰,分别为(9.8±0.8)log2和(10.4±1.1)log2,两种亚型抗体合格率大于70%的持续期均超过181 d;加强免疫后7 d,H5和H7抗体效价也均达到高峰,效价分别为(10.2±1.0)log2和(10.7±0.9)log2,189 d后效价分别为(5.4±1.3)log2和(6.1±1.5)log2,合格率分别为96.7%和100%。临床观察,未发现该疫苗有严重免疫不良反应。结果表明,(H5+H7)二价灭活疫苗对鹌鹑和鸽子安全有效。生产中推荐:鹌鹑25日龄首免,46日龄和6月龄各加强免疫1次,剂量为0.3 m L;鸽子25日龄首免,以后每隔6个月加强免1次,剂量为1 m L。     

鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序及检测方法的筛选

为了获得高效价鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体,试验通过设计免疫程序免疫试验蛋鸡和筛选的卵黄抗体效价检测方法对氯仿法提取的卵黄抗体液进行鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价检测并比较,筛选鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,并作无菌与保存条件的探讨。结果表明:血凝及血凝抑制试验可作为鸡抗犬瘟热卵黄抗体效价的检测方法;按照基础免疫、加强免疫、强化免疫均间隔9 d,免疫剂量分别为1 m L/次、2 m L/次、3 m L/次的免疫程序能获得1∶512的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体血凝抑制效价,为此次探讨的鸡抗犬瘟热病毒高免卵黄抗体最佳免疫程序,-20℃保存温度适合长期保存氯仿法粗提的鸡抗犬瘟热病毒卵黄抗体液。     

抗鸡新城疫卵黄抗体IgY的研制

产蛋母鸡经新城疫灭活抗原重复免疫后，所产生的高免卵黄中，特异性抗体的HI效价可达到12log2以上。从高免卵黄中分离提纯的特异性新城疫抗体，病毒中和试验结果表明，具有明显的中和病毒的作用，特异性病毒中和指数可达到630957以上。使用纯化后的高免卵黄抗体(IgY)安全、高效、无任何不良反应。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉免疫效果的研究

为评估重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉的免疫保护效果,选取30日龄的雉,按照免疫程序首免后21 d,加强免疫1次,分别于接种前和接种后定期采血,分离血清,检测H5、H7亚型HI抗体滴度。结果显示,免疫前,雉血清中H5、H7亚型HI抗体滴度均为0;免疫后14 d,H5和H7亚型抗体平均滴度分别达到7.0log2和7.07log2,49 d后平均滴度达到峰值,分别为8.04log2和9.20log2;H5亚型免疫有效期可达105 d以上,H7亚型可达189 d以上。结果表明,重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对雉具有良好的免疫保护效果且安全性良好,但疫苗免疫49 d后,H5、H7抗体效价逐渐下降,133 d后明显下降,群体免疫合格率低于70%,因此生产中推荐,30日龄首免后,51日龄和5月龄各加强免疫1次。本研究为珍稀禽的禽流感免疫疫苗选择和程序制定提供了参考。     

鸭坦布苏病毒冻干高免卵黄抗体的研制

本研究用鸭坦布苏病毒病灭活苗三次免疫SPF蛋鸡,收取高免鸡蛋,制备成冻干高免卵黄抗体;用鸡胚中和试验和间接ELISA方法进行效价检测。试验结果显示,第3次免疫后2周,卵黄抗体中和效价为1∶103.5,4、5周达到最高值1∶104.5;间接ELISA方法检测冻干前后的抗体效价结果均为阳性;对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100%,可为鸭坦布苏病毒的防控提供一种有效的冻干高免卵黄抗体制剂。     

重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗的鹅免疫试验

为探究重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗对鹅的免疫特性,将100只27日龄四季鹅,随机分成3组:一免组40只,接种剂量0.5 mL/只;二免组40只,二次接种剂量分别为0.5 mL/只、1.5 mL/只;对照组20只,不免疫。结果显示:一免后21 d H5(Re-8株)免疫抗体平均滴度为5.85 log2,抗体合格率为85%,28 d为7 log2,抗体合格率为100%,但60 d后平均滴度降为5.95 log2;二免后7 d为7.15 log2,39 d为7.95 log2,抗体合格率均保持100%。一免后21 d H7N9免疫抗体平均滴度为5.2 log2,抗体合格率为85%,28 d为6.6 log2,抗体合格率达到100%,60 d后降为3.15 log2;二免后7 d为6.8 log2,39 d为7.05 log2,抗体合格率均保持在100%。结果表明:该疫苗能够有效刺激鹅产生免疫保护抗体,适用于鹅的禽流感免疫;为增强免疫保护效果,建议进行二次免疫。     

H5Rel与H5N28两种禽流感疫苗对肉番鸭免疫效果对此试验

用H5Rel与H5N28两种疫苗在肉番鸭体内的免疫效果对比研究.首免后35d,两组抗体效价没有明显差异.二免后19d,H5Rel组抗体效价提高0.9 log2,至免后25d效价达到最高峰值8.4 log2,比H5N28组效价高2.9 log2.以后相对稳定,至二免后60d抗体效价H5Rel组平均维持在7.3 log2,H5N28组平均为5 log2.     

H5Rel与H5N28两种禽流感疫苗对肉番鸭免疫效果对比试验

用H5Rel与H5N28两种疫苗在肉番鸭体内的免疫效果对比研究。首免后35d,两组抗体效价没有明显差异。二免后19d,H5Rel组抗体效价提高0.9log2,至免后25d效价达到最高峰值8.4log2,比H5N28组效价高2.9log2。以后相对稳定,至二免后60d抗体效价H5Rel组平均维持在7.3log2,H5N28组平均为5log2。     

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清；收集鸡蛋，分离蛋黄，并分别用16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理后，检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明：接种疫苗前的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7，4．4，4．1和4.2 log2；第一次接种疫苗后的血清和16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．4、6．7、7．1、6．9log2；第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10．4、9．6、10．1、9．710g2，第2次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．9、7.1、7．6和7．4log2。8％柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高，与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性，用卵黄可以代替血清进行HI试验。     

兔自家大肠杆菌高免卵黄抗体的研制与应用

采用灭活菌苗进行基础免疫、加强免疫,灭活油乳剂疫苗进行超强化免疫和维持免疫程序。通过微量凝集试验方法,研究了鸡抗兔大肠杆菌高免卵黄抗体的消长规律及临床应用。结果表明,超强化免疫5周后,抗体效价达到高峰,9周后抗体效价逐渐下降。同一剂量卵黄抗体效价达26时,肌注2 mL/kg体重,连用3 d对兔大肠杆菌感染的治愈率达90%。成品卵黄抗体的效价应达到26、安全性检验、无菌检验阴性方可用于临床治疗。卵黄抗体在血清中维持高浓度可持续1周,然后逐渐下降。在冷冻环境下可保存1年,其抗体效价保持在有效水平。与头孢噻肟进行的对比田间治疗试验,卵黄抗体的治愈率显著高于头孢噻肟。     

鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株的血清交叉血凝抑制试验

本试验用系统血凝抑制(HI)交叉试验,对鸡传染性支气管炎病毒M41株和Conn株进行抗体区分。结果表明,M41株和Conn株标准抗原与M41阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后28 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2;免疫后35 d分别为8 log2、5 log2,相差3 log2。M41株和Conn株标准抗原与Conn阳性血清HI抗体效价在免疫后21 d分别为4 log2、8 log2,相差4;免疫后28 d分别为4 log2、8 log2,相差4 log2;免疫后35 d分别为4 log2、9 log2,相差5 log2。因此,用血清HI交叉试验能够将抗M41株和Conn株抗体区分开来。     

不同首免时间对禽流感疫苗HI抗体消长影响的研究

通过HI试验,对雏鸭不同首免时间的禽流感灭活疫苗免疫效果进行监测,为更科学制定鸭免疫程序奠定基础。结果表明:(1)对照组鸭(E组)AI-H5母源抗体1d最高,达5.1log2,次日逐渐下降,于10d降至较低水平。AI-H5母源抗体于19d降至为2log2以下。(2)试验各组于免疫后10～12d抗体水平开始上升,于免疫后15～20d抗体水平达到高峰,并维持18～24d,之后呈缓慢下降趋势,于49d仍能检测到较高的抗体,由此说明,禽流感油乳剂灭活疫苗能诱导机体产生良好的免疫应答。(3)从不同首免时间进行禽流感疫苗免疫接种后的HI抗体效价比较来看,C组(15d首免组)HI抗体效价最佳,D组(20d首免组)HI抗体效价其次,B组(10d首免组)HI抗体效价第三,A组(5d首免组)HI抗体效价较差,因此,应根据雏鸭母源抗体水平选择适宜时间进行禽流感疫苗的首次免疫接种。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄低母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法代囊病病毒(IBDV)BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5(分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体),用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9 d观察法氏囊病变,免疫后28 d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9 d,复合物疫苗1~3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28 d,复合物疫苗1~5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3(分别含8、4单位IBDV中和抗体)免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。     

一种免疫增强剂对新-流二联灭活苗抗体消长规律的影响

免疫增强剂是一种能增加疫苗免疫效果的生物活性物质。试验A组为添加了免疫增强剂的新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+HP株),试验B组为未添加免疫增强剂的新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(La Sota株+HP株),分别比较A组与B组的抗体水平。试验结果表明:7日龄SPF鸡A组抗体与B组抗体无差异;在28日龄SPF鸡上:免后10、15、21、28、35 d,ND部分A组抗体比B组分别高0.2log2、0.6log2、1.5log2、0.9log2、0.5log2,AI部分抗体高出0.1log2、0.3log2、1.2log2、1.0log2、0.6log2;在7日龄商品蛋鸡上A组抗体比B组抗体在免后15、21、28、35 d,ND部分抗体高出1.6log2、2.0log2、1.9log2、3.7log2,AI部分分别高1.3log2、2.7log2、1.8log2、2.0log2。     

鸡新城疫高免血清的制备

采用鸡新城疫Lasota株病毒（NDV）和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但是NDV两次免疫后只能使抗体水平增长到10log2,而再以灭活疫苗免疫可使抗体水平达到14log2。     

最新4种猪口蹄疫O型灭活疫苗及O型-A型二价灭活疫苗免疫效果评估

试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70%,二免后抗体效价可达8log2～9log2,抗体合格率高达100%,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗体保护力度。政府招标购买的疫苗均能产生较好的免疫效果,O型灭活苗免疫效果优于O型-A型二价灭活苗;建议口蹄疫免疫实行二次免疫,间隔28～30 d,必要时进行三免。