子宫内膜基质金属蛋白酶-2、-9 mRNA表达与奶牛子宫内膜炎关系的研究

为探讨基质金属蛋白酶(MMPs)-2、MMP-9在奶牛子宫内膜炎中的作用机制,选用产后6～10d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的中国荷斯坦奶牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA检测PGF2a、孕酮浓度;免疫组化检测子宫内膜Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达;SYBR Green I荧光定量PCR检测子宫内膜MMP-2和MMP-9mRNA表达。结果表明:试验组PGF2a浓度极显著低于对照组(P<0.01),孕酮含量显著高于对照组(P<0.05),PGF2a与孕酮浓度呈显著负相关(r=0.893);试验组子宫内膜中Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原的表达量均高于对照组,差异极显著(P<0.01);MMP-2和MMP-9mRNA水平则显著低于对照组(P<0.01)。结果提示:产后子宫内膜炎病牛子宫内膜MMP-2、MMP-9低表达,导致Ⅰ型和Ⅳ型胶原降解受阻,使细胞外基质为子宫内膜细胞提供的刺激信号不足,子宫分泌PGF2a量少,黄体消退障碍,血清孕酮含量高;说明子宫内膜MMP-2、MMP-9mRNA表达对产后子宫内膜炎的发生和发展起促进作用。     

产后子宫内膜炎患牛子宫内膜肥大细胞的研究

本研究旨在探讨子宫内膜肥大细胞在牛子宫内膜炎中的作用.选用产后6～10 d健康及患急性化脓性子宫内膜炎的西门塔尔牛各10头,分别为对照组和试验组,通过ELISA法检测子宫内膜中SP、VIP、组胺浓度,透射电镜观察子宫内膜MC颗粒状态及荧先定量PCR法检测组胺受体H1和H2 mRNA表达情况.结果表明,试验组子宫内膜组织申组胺、SP、VIP含量分别为(80.305±4.002)μg/L、(1 258.06±128.88)ng/L、(615.73±70.50)ng/L,而对照组分别为(39.204±4.278)μg/L、(308.12±9.72)ng/L,(1 667.34±153.4)ng/L,试验组与对照组相比差异均极显著(P＜0.01);试验组子宫内膜固有层MC颗粒数量战少、分布和浓度不均、有空泡形成,对照组子宫内膜固有层MC颗粒较多、分布均匀;试验组中组胺受体H1 mRNA水平显著低于正常组(P＜0.05),组胺受体H2mRNA水平高于正常组,且差异板显著(P＜0.01).结果显示子宫内膜炎时,在神经肽和炎症刺激下使子宫内膜固有层MC脱颗粒大量释放组胺,同时子宫内膜组胺受体H1和H2 mRNA表达失衡,使子宫局部淤血和迟缓,导致子宫免疫力下降,利于病原微生物的繁殖,促进子宫内膜炎的发生发展.     

产后奶牛子宫内膜炎神经肽（SP、VIP）对子宫免疫调节的研究

本试验研究了急性产后子宫内膜炎神经肽（SP、VIP）变化,以探讨子宫内膜炎神经肽对子宫局部免疫的影响。对10头产后急性化脓性子宫内膜炎患牛进行子宫内膜及血清SP、VIP含量的检测,并选择10头产）06-8d健康的奶牛为对照组。结果表明,产后急性子宫内膜炎患牛子宫内膜及血清中SP含量显著升高,试验组与对照组差异极显著（P〈0．01）,而VIP含量显著降低,试验组与对照组差异极显著（P〈0．01）。急性产后子宫内膜炎属于局部炎症,其发生与神经肽（SP、VIP）浓度密切相关,sP含量的升高和VIP含量的降低对机体的免疫起调节作用。     

脂多糖对体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞子宫容受性因子表达的影响

试验旨在通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导奶牛子宫内膜上皮细胞构建子宫内膜炎体外感染模型,研究子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子大分子转膜黏蛋白-糖蛋白1(MUC-1)、高度保守的分泌型WNT家族亚型糖蛋白(Wnt-7a)、β受体1(IFNAR1)、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白相对表达量的影响,进而阐明子宫内膜炎引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的机制。采用组织块法分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞,免疫荧光方法鉴定细胞纯度,不同浓度LPS刺激子宫内膜上皮细胞,在不同时间点用CCK8测定细胞存活率,ELISA检测炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8的分泌变化,实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测子宫内膜感染模型中子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白的表达变化。结果显示,通过组织块法纯化获得的奶牛子宫上皮细胞数量较多,经免疫荧光角蛋白染色证实纯度较高。采用CCK8测定细胞存活率发现,与对照组相比,浓度为0、5、10、50μg/mL的LPS作用6、12、24、48 h后,细胞活力无显著变化(P0.05);浓度为100μg/mL的LPS作用24 h时,细胞存活率显著低于对照组(P0.05),细胞培养上清中的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显著高于对照组及低浓度组(P0.05),引起细胞的炎症反应。与对照组相比,模型组MUC-1 mRNA及蛋白的相对表达量均极显著增加(P0.01);Wnt-7a mRNA及蛋白的相对表达量均极显著下降(P0.01);Integrinαvβ3、IFNAR1和IFNAR2 mRNA相对表达量均极显著下降(P0.01),蛋白相对表达量均显著下降(P0.05)。结果表明,浓度为100μg/mL的LPS作用24 h可成功构建子宫内膜炎体外感染模型,子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrinαvβ3 mRNA及蛋白表达的影响可能是引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的重要原因。     

脂多糖对体外培养奶牛子宫内膜上皮细胞子宫容受性因子表达的影响

试验旨在通过脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导奶牛子宫内膜上皮细胞构建子宫内膜炎体外感染模型,研究子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子大分子转膜黏蛋白-糖蛋白1（MUC-1）、高度保守的分泌型WNT家族亚型糖蛋白（Wnt-7a）、β受体1（IFNAR1）、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白相对表达量的影响,进而阐明子宫内膜炎引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的机制。采用组织块法分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞,免疫荧光方法鉴定细胞纯度,不同浓度LPS刺激子宫内膜上皮细胞,在不同时间点用CCK8测定细胞存活率,ELISA检测炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-6、IL-8的分泌变化,实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测子宫内膜感染模型中子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白的表达变化。结果显示,通过组织块法纯化获得的奶牛子宫上皮细胞数量较多,经免疫荧光角蛋白染色证实纯度较高。采用CCK8测定细胞存活率发现,与对照组相比,浓度为0、5、10、50μg/mL的LPS作用6、12、24、48 h后,细胞活力无显著变化（P>0.05）;浓度为100μg/mL的LPS作用24 h时,细胞存活率显著低于对照组（P<0.05）,细胞培养上清中的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显著高于对照组及低浓度组（P<0.05）,引起细胞的炎症反应。与对照组相比,模型组MUC-1 mRNA及蛋白的相对表达量均极显著增加（P<0.01）;Wnt-7a mRNA及蛋白的相对表达量均极显著下降（P<0.01）;Integrin αvβ3、IFNAR1和IFNAR2 mRNA相对表达量均极显著下降（P<0.01）,蛋白相对表达量均显著下降（P<0.05）。结果表明,浓度为100μg/mL的LPS作用24 h可成功构建子宫内膜炎体外感染模型,子宫内膜炎对奶牛子宫容受性因子MUC-1、Wnt-7a、IFNAR1、IFNAR2、Integrin αvβ3 mRNA及蛋白表达的影响可能是引起奶牛屡配不孕和繁殖率低下的重要原因。     

雌二醇和孕酮对卵巢摘除大鼠子宫内肥大细胞数量分布的影响

本研究旨在研究雌激素和孕酮对卵巢摘除大鼠子宫内肥大细胞数量的影响，探讨雌激素和孕酮与子宫内肥大细胞之间的相关关系。35只雌性成年大鼠随机分成7组：假手术组（SHAM）、卵巢摘除组（OVX）、卵巢摘除＋雌二醇E2（OVX＋E 20 μg、OVX＋E 100 μg、OVX＋E 500 μg）、卵巢摘除＋孕酮P4（OVX＋P 2 mg、OVX＋P 10 mg）。动物处理7 d后，应用放射免疫分析法检测各组大鼠血清雌二醇和孕酮的含量，用甲苯胺蓝染色显示大鼠子宫内肥大细胞。结果显示：①OVX组大鼠血清雌二醇浓度最低，雌二醇处理后， OVX＋E 20 μg组雌二醇浓度比OVX组升高97.13%、OVX＋E 100 μg组比OVX组升高204.84%、OVX＋E 500 μg组比OVX组升高936.45%；孕酮处理后，孕酮浓度OVX＋P 2 mg组比OVX组升高77.25%、OVX＋P 10 mg组比OVX组升高235.25%，各组差异均显著（P〈0.05）。②雌二醇处理后大鼠子宫内肥大细胞数量减少, 与OVX组比较，OVX＋E20 μg组减少32.65%、OVX＋E 100 μg组减少64.50%、OVX＋E 500 μg组减少74.49%；孕酮处理后，OVX＋P 2 mg组比OVX组增加66.73%、OVX＋P 10 mg组比OVX组减少70.67%。除OVX＋E 20 μg组外，各组与OVX组比较差异均显著（P〈0.05）。随着血清中雌、孕激素含量的升高，大鼠子宫内肥大细胞的数量呈递减趋势，提示雌激素和孕酮对大鼠子宫内肥大细胞的数量有直接的影响。     

雌二醇对大鼠子宫内嗜酸性粒细胞数量分布的影响

采用放射免疫法检测了15只处于发情周期不同时期（发情前期、发情期、间情期）的Wistar雌性大鼠和25只不同处理组（假手术组、卵巢摘除组、卵巢摘除＋20μg／kg雌二醇组、卵巢摘除＋100μg／kg雌二醇组、卵巢摘除＋500μg／kg雌二醇组）的大鼠血清中雌二醇浓度，并采用瑞氏一姬姆萨染色方法计数子宫内嗜酸性粒细胞（EOS）的数量。结果显示，大鼠血清雌二醇浓度在发情期最高，间情期最低。子宫内EOS数量在发情期最高，间情期最低。卵巢摘除后，血清中雌二醇浓度降低；补充雌二醇后，血清雌二醇浓度明显升高（P〈0．05）。卵巢摘除后子宫内EOS数量也明显降低；补充雌二醇后，EOS数量显著增加（P〈0.05）。提示，随着血清雌二醇浓度的升高，子宫内EOS数量呈递增趋势，也就是说，外源性雌二醇对子宫内EOS数量有直接的影响。     

家兔子宫内膜炎治疗试验

通过子宫灌注致病性混合菌液,复制獭兔子宫内膜炎病理模型。分别于第1、3、5d按0．01g／kg体重（按有效碘计算）子宫投放有机碘栓进行治疗,观察其用药前后的临床症状和病理变化,并测定血清SOD,MDA,GSH—Px等。投药后第4d阴门肿胀及阴道充血逐渐消退,子宫分泌物逐渐减少,上皮细胞结构基本恢复正常。治疗组在第4d血清SOD和GSH—Px活力均显著增高（P〈0．05）;第6d血清MDA含量极显著降低（P〈0．01）,而血清GSH—Px活力极显著增高（P〈0．01）。表明有机碘栓可有效治疗獭兔子宫内膜炎。     

肉牛子宫内膜炎相关基因表达差异研究

为了比较分析与肉牛子宫内膜炎相关基因的表达,试验分别提取正常和患子宫内膜炎水牛、奶牛及肉牛子宫内膜组织总RNA,并以水牛及奶牛为对照,采用RT-PCR方法检测肉牛Collagen、PGR及BLT2基因在正常和病理状态下的表达水平。结果表明:患子宫内膜炎肉牛子宫内膜组织中PGR基因表达丰度明显高于正常肉牛,也明显高于对照组奶牛、水牛;BLT2基因在正常奶牛和患子宫内膜炎肉牛子宫内膜组织中高表达;Collagen基因在正常奶牛子宫内膜组织中表达丰度高,而正常水牛子宫内膜组织中Collagen基因表达丰度较低。说明患子宫内膜炎肉牛、水牛及奶牛Collagen、BLT2、PGR基因表达存在明显差异。     

枫泾猪发情周期子宫性腺激素受体含量的变化

以长白猪为对照 ,测定了枫泾猪发情周期血浆中雌二醇和孕酮及其子宫受体含量。发情期血浆雌二醇的峰值 ,枫泾猪为 ( 57.0 4± 3 .60 ) ng/ L,长白猪为 ( 55.85± 3 .0 4 ) ng/ L,两者无显著差异 ( P >0 .0 5)。孕酮最高水平和间情期平均水平 ,均为枫泾猪高 ( P <0 .0 1 )。孕酮最高水平 ,枫泾猪为 ( 2 4 .1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 6.67± 0 .2 1 ) μg/ L;孕酮间情期平均水平 ,枫泾猪为 ( 1 8.1 1± 1 .2 4 ) μg/ L,长白猪为 ( 1 1 .0 7± 0 .61 )μg/ L。枫泾猪发情期和间情期的细胞质雌二醇受体 ( CER)分别为每毫克 DNA( 3 87± 2 1 .2 )、( 3 52± 1 8.2 )fmol,其离解常数 ( kd)值分别为 ( 4.8± 0 .4 )、( 3 .8± 1 .0 ) nmol;细胞核雌二醇受体 ( NER)分别为每毫克DNA( 1 2 69.58± 1 56.4 2 )、( 578± 2 1 .4 ) fmol,其 kd值分别为 ( 5.8± 1 .4 )、( 3 .4 8± 1 .0 ) nmol;细胞质孕酮受体 ( CPR)分别为每毫克 DNA( 3 4 3 .0± 51 .4 )、( 1 48± 4 1 .0 ) fmol;细胞核孕酮受体 ( NPR)分别为 ( 3 2 4± 6.9)、( 1 1 5± 2 .4 ) fmol。发情期和间情期子宫 NER含量较长白猪高 ( P <0 .0 5) ,说明此时枫泾猪子宫对雌二醇具有较高的敏感性     

孕酮处理对蛋鸡蛋壳钙化过程中CaBP-d28k基因表达的影响

实验旨在研究孕酮对蛋鸡CaBP-d28k基因表达的影响。对产蛋高峰期蛋鸡进行孕酮和孕酮受体拮抗剂(RU-486)处理,利用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),测定在蛋壳形成过程中输卵管子宫部钙结合蛋白(CaBP-d28k)、孕酮受体(PGR)的表达量;同时对血液中钙离子和孕酮浓度变化进行测定。结果表明:孕酮处理后,血液中钙离子浓度显著降低(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量也显著降低(P<0.05);孕酮受体拮抗剂处理后,血液中钙离子浓度显著升高(P<0.05),输卵管子宫部CaBP-d28k表达量极显著升高(P<0.01)。结果提示,在蛋壳钙化过程中,孕酮对CaBP-d28k表达和钙离子转运起负调控作用。     

冷应激对猪脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织中PPARγ2 mRNA及蛋白表达的影响

为了研究冷应激对机体的影响及过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）在冷应激中的作用,本试验选用30头军牧一号猪,并随机分成5组,包括常温对照组和4个冷应激组。常温组在（21±2）℃饲养,冷应激组的温度设置分别为：（-10±2）、（-5±2）、（0±2）、（5±2）℃。冷应激2h屠宰后分别采集猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏与肾脏组织样品提取总RNA与总蛋白。通过荧光定量PCR技术检测了PPARγ2mR-NA的表达量;通过Western blot检测PPARγ2蛋白表达量。结果显示,各温度组猪腹腔脂肪、颈部皮下脂肪、胸部皮下脂肪、肝脏、心脏PPARγ2mRNA及蛋白表达量总体上差异显著（P〈0.01）,肾脏PPARγ2mRNA表达量总体显著升高,但其蛋白表达量总体呈下降趋势。结果表明,PPARγ2对冷刺激非常敏感,它除了可以调节冷应激时的脂肪代谢平衡,还对心脏有较好的保护作用,但是对肾脏的作用有限。本试验显示了冷应激中PPARγ2在脂肪代谢与能量代谢中作用,为研究冷应激对机体的影响及畜禽品质的提高奠定了基础。     

Expression of oestrogen receptor,androgen receptor and progesterone nuclear receptor in sheep uterus during the oestrous cycle

Oestrogen, androgen and progesterone are involved in the regulation of uterine physiological functions, with the participation of the following proteins: oestrogen receptor (ER), androgen receptor (AR) and progesterone nuclear receptor (PGR). In this study, we used immunohistochemistry to detect the localization of ERα, ERβ, AR and PGR in sheep uterus. Additionally, we used real‐time polymerase chain reaction (RT‐qPCR) and Western blot technique to analyse their expression profiles at different stages of sheep oestrous cycle in the endometrium and myometrium. Immunohistochemical analysis showed that ERα, ERβ, AR and PGR were present in sheep uterus in oestrus, mainly in the uterine luminal epithelium, stroma, gland and myometrium. Real‐time polymerase chain reaction results showed that in the endometrium, ERα expression level was highest in oestrus. ERβ and PGR, instead, were highly expressed in pro‐oestrus. In the myometrium, ERα was highly expressed in both oestrus and pro‐oestrus, and ERβ was highly expressed in oestrus and dioestrus. Progesterone nuclear receptor expression was highest in oestrus, followed by metoestrus. In the endometrium, both receptors ERα and ERβ were abundant in pro‐oestrus, while the maximum AR protein content was found in oestrus. At this stage of the oestrous cycle, PGR protein concentration in the myometrium was significantly lower than those observed in other stages. These results suggest that these receptors are important for sheep reproductive function, as their expression at mRNA and protein levels exhibits particular time‐ and tissue‐specific profiles along the oestrous cycle.     

日粮中添加抗氧化应激添加剂对羊肉品质的影响

为了分析日粮中添加抗氧化应激产品-爱克多对羊肉品质的影响,选择年龄相同的健康绵羊24只,分为试验组（12只）和对照组（12只）,测定血液抗氧化指标。结果表明,试验组血样谷胱甘肽过氧化物酶含量较对照组多6.19μ/mL,明显高于对照组（P〈0.05）;血浆蛋白质和血浆羧基含量分别较对照组少2.9μ/mL、0.18μ/mL,明显低于对照组（P〈0.05）;丙二醛含量为1.29μ/mL,也显著低于对照组（P〈0.05）。表明在绵羊日粮中添加500g/1 000kg爱克多可有效提高机体抗氧化水平,提高羊肉品质,延长新鲜羊肉保存时间。     

葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫发育的影响

目的：观察葛根素对去卵巢小鼠乳腺及子宫的影响,研究其雌激素样作用。方法：将21日龄昆明系雌性小白鼠50只随机分成5组,每组10只。①正常对照组,正常＋蒸馏水;②阴性对照组,去势＋蒸馏水;③阳性对照组Ⅰ,去势＋己烯雌酚;④阳性对照组Ⅱ,去势＋己烯雌酚＋黄体酮;⑤试验组,去势＋葛根素。做乳腺标本和乳腺及子宫的常规切片,光镜观察。结果：摘除卵巢后的小鼠乳腺及子宫发育停止,乳腺导管和腺泡数（P〈0.01）、子宫系数（P〈0.01）、子宫壁腺体数（P〈0.05）与正常对照组比较差异显著或极显著。试验组的各项指标与阴性对照组比较差异不显著（P〉0.05）,但高于阴性对照组。结论：葛根素有微弱的雌激素样作用,对去卵巢小鼠乳腺和子宫发育有显著的影响。     

重组脂联素对皖南花猪脂肪细胞脂联素及其受体mRNA表达的影响

脂联素（Adp）是主要由脂肪组织分泌的细胞因子,有重要的生理作用。本试验旨在研究重组脂联素（rAdp）对皖南花猪脂肪细胞脂联素及其受体2,AMP激活蛋白激酶（AMPK）、过氧化物增殖剂活化受体α（PPARα）mR-NA表达的影响。选择10d皖南花猪皮下脂肪组织分离前体脂肪细胞,增殖培养至80%融合后换分化培养基培养,细胞分化后用0、2和10mg/L rAdp分别处理12和48h。油红O染色法鉴定脂肪细胞,MTT方法检测细胞活力;酶法测定培养液中甘油释放量,荧光定量RT-PCR方法检测脂肪细胞脂联素（Adp）、脂联素受体1（AdpR1）、脂联素受体2（AdpR2）、PPARα和AMPK mRNA表达。结果显示,rAdp处理后,脂肪细胞活力总体有降低趋势,10mg/L处理48h达到显著水平（P〈0.05）;rAdp处理对甘油释放的抑制作用未达到差异水平。rAdp处理12h后,脂肪细胞AdpR1和AdpR2mRNA表达显著升高（P〈0.01）,但无剂量依赖性;rAdp处理48h后,脂肪细胞AdpmRNA表达显著下降（P〈0.05）。rAdp处理12h后,脂肪细胞PPARαmRNA表达显著升高（P〈0.01）,且有剂量效应性;而AMP AMPK mRNA表达均无显著性变化。结果提示,重组脂联素处理猪原代脂肪细胞有降低细胞活力和抑制脂肪细胞甘油释放量的趋势,能显著上调AdpR1、AdpR2和PPARα基因的表达,从而刺激脂肪酸氧化和甘油三酯的水解作用。     

精液对母兔子宫免疫及孕向发育的影响

在结扎子宫颈的情况下,在同一子宫的两侧子宫角分别注入生理盐水（对照组）和精液（试验组）以研究精液对子宫免疫和孕向发育的影响。试验共用母兔8只。子宫注入后48 h处死试验用兔,取子宫进行测量,并制片染色,用图像采集分析系统进行研究。结果显示：1）与对照组相比,兔子宫注入精液后可以显著（P〈0.05）增加子宫的长度、直径和子宫角指数;可明显增加子宫壁（P〈0.05）、黏膜上皮层（P〈0.01）和黏膜层（P〈0.05）的厚度;可显著增加黏膜中腺管（P〈0.05）和血管（P〈0.05）数量,可明显增加腺上皮的厚度（P〈0.05）。2）子宫注入精液后,子宫冲洗液中的细胞数（53.3±4.03×109/L）较对照组极显著增加（P〈0.01）;单位面积子宫黏膜中肥大细胞的数量（2.85±0.05个/mm2）较对照组（3.72±0.04个/mm2）显著减少（P〈0.05）。子宫冲洗液涂片染色检查发现,子宫冲洗液中的细胞主要为嗜中性粒细胞。本研究表明,兔精液确实能够促进母兔子宫的孕向发育,能够改变子宫的免疫状态。     

孕酮对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14和MD2的影响

先分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经差速贴壁法纯化后,随机分为6组：空白对照组、0.5mg/L脂多糖（LPS）组、10-6 mol/L孕酮（P4）组、LPS＋10-5 mol/L P4组、LPS＋10-6 mol/L P4组、LPS＋10-7 mol/L P4组。各组在处理12、24h分别提取上清液,ELISA法测TNF-α和IL-1β的含量;各组在处理24h分别提取细胞总RNA,用RT-PCR法测TLR4、CD14、MD2mRNA的表达。结果显示,处理12、24h,0.5mg/L LPS组TNF-α和IL-1β的含量均极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4组与对照组差异不显著（P〉0.05）;LPS＋10-5 mol/L P4组极显著低于对照组（P〈0.01）;LPS＋10-6 mol/L P4组显著低于对照组（P〈0.05）;而LPS＋10-7 mol/L P4组TNF-α的表达差异不显著（P〉0.05）,IL-1β的表达差异显著（P〈0.05）。说明P4可降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,且呈剂量依赖关系。LPS单独处理,TLR4和CD14mRNA的表达极显著高于对照组（P〈0.01）;10-6 mol/L P4单独处理与对照组无显著差异（P〉0.05）;分别添加1-5、10-6、10-7 mol/L P4组均极显著降低LPS诱导TLR4和CD14mRNA的表达（P〈0.01）,而MD2mRNA的表达差异不显著（P〉0.05）。说明P4可极显著降低LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞TLR4和CD14mRNA表达,但对MD2mRNA表达影响不显著。结果显示,P4能抑制LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-1β的分泌,此过程与细胞TLR4和CD14表达下降相关,而与MD2的表达无关。