渤海海域唐山贝类养殖区腹泻性和麻痹性贝类毒素的监测与风险评估

为监测渤海海域唐山贝类养殖区贝类毒素的污染情况,防止食用贝类中毒事件发生,于2019年10月—2020年9月间,每月持续在渤海海域唐山贝类养殖区采集四角蛤(Mactra veneriformis)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)、脉红螺(Rapana venosa)、牡蛎(Crassostrea gigas)、青蛤(Cyclina sinensis)、文蛤(Meretrix meretrix)和硬壳蛤(Mercenaria mercenaria) 7种经济贝类样品,采用高效液相色谱–串联质谱(HPLC-MS/MS)法测试了5种腹泻性贝类毒素(diarrhetic shellfish poisoning, DSP)和14种麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning, PSP)。结果显示,在7种经济贝类样品中均未检出DSP。检出的PSP成分包括石房蛤毒素(Saxitoxin, STX)、膝沟藻毒素1 (Gonyautoxin 1, GTX 1)、膝沟藻毒素2 (Gonyautoxin 2, GTX 2)和脱氨甲酰基膝沟藻毒素3 (Ddecarbamoy l gonyautoxin 3, dcGTX 3),其中,GTX 1含量最高且最高值为537.95 μg/kg。不同季节贝类毒素蓄积含量有一定差异,PSP主要集中在4月检出。菲律宾蛤仔、牡蛎、文蛤和硬壳蛤中PSP的检出率分别为11.76%、47.06%、5.90%和8.82%,其他贝类均未检出。PSP总量均低于欧盟及中国的食用安全限量标准800 μg STXeq/kg。应用风险熵值法和点评估法进行食用安全风险评估,显示风险熵值和暴露风险指数均在安全范围内,结果表明,渤海海域唐山贝类养殖区7种经济贝类不存在食用安全风险。     

珠江口及邻近海域贝类麻痹性毒素调查

于1990－1999年对珠江口、大鹏湾和大亚湾3个海域14种主要经济贝类进行麻痹性毒素（PSP）的毒性水平检测并比较其季节性变化和种间差异,采用麻痹性毒素小白鼠生物测定法测定PSP毒性水平,并以联合国粮农组织推荐的贝类安全食用标准进行分析评价。结果表明,珠江口海域的僧牡蛎轻微染毒（PSP）,大鹏湾海域的华贵栉孔扇贝和翡翠贻贝不同程度染毒,大亚湾海域的华贵栉孔扇贝,翡翠贻贝,马氏珠母贝棕带仙女蛤具潜在染毒危险。     

联苯菊酯对菲律宾蛤仔肝胰腺细胞DNA损伤的初探

为了评价联苯菊酯的遗传毒性,研究了不同浓度联苯菊酯对菲律宾蛤仔肝胰腺细胞DNA的损伤作用。研究分别在0.05、0.10、0.15、0.20 mg/L联苯菊酯暴露25 d后,取菲律宾蛤仔肝胰腺细胞并用单细胞凝胶电泳(彗星实验)进行分析,以彗尾DNA相对含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、Olive尾矩(OTM)和拖尾率(TR)作为DNA损伤的指标,实验结果表明:与空白对照组相比,各处理组菲律宾蛤仔肝胰腺细胞DNA均有不同程度的损伤且各检测指标值均显著增加(P0.05);随着联苯菊酯浓度的增加,各检测指标均呈规律性的增长趋势,具有高度的相关性(r0.99),表现出良好的剂量效应关系。评价彗星实验较好的检测指标为彗尾DNA相对含量和Olive矩,实验获得的多元回归方程具有显著的统计学意义(P0.01),可以有效地推断联苯菊酯对菲律宾蛤仔的染毒毒性浓度。     

天津市售主要经济贝类中麻痹性贝类毒素污染现状及特征分析

使用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)检测9种天津市售主要经济贝类中13种麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)的含量,分析PSP的污染现状和成分特征。结果显示,共计6个品种(紫贻贝、虾夷扇贝、牡蛎、毛蚶、脉红螺、菲律宾蛤仔)检出PSP。其中虾夷扇贝、紫贻贝、毛蚶3个品种的检出率较高且含量较高,检出率分别为66.7%、58.3%、58.3%。PSP中检出率较高的毒素包括N-磺酰胺甲酰基类毒素C1、C2和膝沟藻毒素GTX1、GTX2、GTX3,毒力占比主要以膝沟藻毒素GTX1-4为主,毛蚶蓄积STX毒素的能力强于其他贝类。全年的PSP含量季节变化为夏季最高,冬季最低。PSP主要存在于贝类的消化腺内,全年不同月份的PSP含量均在安全食用范围内。     

广西北部湾近江牡蛎脂溶性藻毒素污染状况与安全风险评价

分别于2017年4月(春季)、7月(夏季)、10月(秋季)和2018年1月(冬季)采集广西北部湾养殖场近江牡蛎(Crassostrea rivularis)样品,通过高效液相色谱-质谱联用方法分析脂溶性藻毒素的组成与含量。结果表明,牡蛎样品普遍沾染脂溶性藻毒素,包括虾夷扇贝毒素(homo-Yessotoxin, homo-YTX)、环亚胺毒素(Gymnodimines, GYM; Spirolide1, SPX1)、氮杂螺环酸毒素(Azaspiracid2, AZA2)和蛤毒素(Pectenotoxin2, PTX2),不同季节种类和含量有一定差异。其中GYM含量最高且最高值(13.15μg·kg~(-1))出现在冬季,其他类型毒素介于0.03～1.40μg·kg~(-1)。应用风险熵值法和点评估法进行安全风险评价,显示风险熵值和暴露风险指数均低于限定标准,不存在食用安全风险。     

菲律宾蛤仔养殖对底质AVS影响的模拟实验

采用模拟实验方法，研究了菲律宾蛤仔养殖对底质酸挥发硫的影响，分析了酸挥发硫与其他底质环境因子的关系。结果表明，菲律宾蛤仔养殖会增加底质中酸挥发硫的含量，而且酸挥发硫含量随养殖密度增加而升高；与酸挥发硫密切相关的环境因素有底质温度、氧化还原电位（Eh）值、有机物（OM）含量、Fe^3＋／Fe^2＋比值、硫酸盐还原菌（SRB）数量；菲律宾蛤仔的养殖导致沉积物中SEM和AVS的比值小于1，束缚了重金属的生物活性或生物毒性。     

福建沿海部分地区织纹螺毒性消长及毒素成分分析

为了解福建沿海织纹螺毒性的动态变化,于2006年3月至9月,对福建省涵江、同安和霞浦三地的织纹螺毒性消长情况进行了跟踪监测,并对高毒性织纹螺样品中的毒素成分进行了分析.期间每周采样一次,采集的织纹螺经鉴定后,通过小鼠生物测试法分析其毒性,并选择毒性较高的织纹螺样品,应用高效液相色谱(HPLC)和高效液相色谱一质谱联用(LC-MS)技术分别对样品中的麻痹性贝毒(paralytic shellfish poison,PSP)和河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)进行了分析.研究结果表明,三个采样点的织纹螺主要为半褶织纹螺,且均有阳性样品检出,涵江、同安和霞浦的织纹螺样品中阳性检出率分别为14%,43%和20%.采自福建三地的织纹螺样品总体毒性较低,毒性最高的样品为7月12日采自霞浦的半褶织纹螺,毒性为16.2 MU·g-1组织(湿重).对高毒性织纹螺样品的毒素分析结果表明,样品中不含麻痹性贝毒毒素,但是在样品中检测到了河豚毒素及其同系物三脱氧河豚毒素(trideoxy TTX).样品中河豚毒素含量为4.38μg·g-1组织(湿重),依据样品中河豚毒素含量计算得到的毒性与小鼠法测试结果基本相当,说明河豚毒素及其同系物是导致织纹螺毒性的主要毒素成分.涵江的阳性样品集中出现在3月份,而同安和霞浦的阳性样品则出现了3月份和6,7月份两个高峰时段,说明织纹螺的毒性变化具有一定的季节和地域特征.因此,建议福建地区在这两个时段加强对织纹螺毒性的监测.     

波纹巴非蛤斧足颜色与总类胡萝卜素含量的相关分析

波纹巴非蛤(Paphia undulata)是经济价值较高的海产贝类之一,斧足是其重要的食用部位。本研究分别检测了91个波纹巴非蛤斧足的总类胡萝卜素含量(TCC)和3个颜色指标L*(明暗度)、a*(红绿值)、b*(黄蓝值),结果显示波纹巴非蛤斧足总类胡萝卜素含量和颜色指标在不同的个体中存在较大的差异,不同个体斧足总类胡萝卜素含量范围为1.78~15.72μg/g,颜色指标L*、a*、b*的波动范围分别为48.21~56.31、-0.32~10.46、16.56~30.29。统计分析表明,波纹巴非蛤斧足的总类胡萝卜素含量和颜色指标L*、a*、b*之间相关极显著(P0.01),相关系数分别为-0.733、0.685、0.775。研究结果将为选育高含量类胡萝卜素的波纹巴非蛤提供重要的参考依据。     

菲律宾蛤仔养殖水体中大肠菌群安全限量的研究

在不同大肠菌群含量的养殖水体中,通过菲律宾蛤仔对大肠菌群的富集研究,发现菲律宾蛤仔对大肠菌群的富集量随着大肠菌群在养殖水体中含量的升高而增大,推导出的富集量公式为y=0.9254x2+17.366x-123.77。参照CAC、91/492/EEC和NSSP的标准,通过相关换算及与国内标准对比,建议菲律宾蛤仔养殖水体中大肠菌群的安全限量定为≤70cfu/100ml,生食菲律宾蛤仔养殖水体中大肠菌群的安全限量定为≤14cfu/100ml。     

黄海胶州湾海水中蛤毒素特征及变化规律

采用固相萃取的方法提取海水中的蛤毒素(Pectenotoxins,PTXs).从2006年7月28日～8月29日,将含有吸附剂的吸附盘片置于黄海胶州湾取样点(36°12.428'N,120°17.826'E)水面以下3 m处,每次放置4d后取出.吸附盘片中的蛤毒素用甲醇洗脱,洗脱液蒸发浓缩近干,用1 ml80％甲醇溶解,然后以液相色谱-串联质谱分析.串联质谱采用电喷雾离子原(ElectroSpray Ionization,ESI)阳离子模式.样品分析所用分离柱为Waters XTerra C18柱(50×2.1mm,3.5 μm),预柱为C18(10×2.1 mm,3.5 μm).流动相A为2 mmol/L甲酸铵、50mmol/L甲酸溶于95％的乙腈;流动相B为2 mmol/L甲酸铵、50mmol/L甲酸溶于纯水.流速为0.4 ml/min,淋洗梯度为0～11min,35％A～100 ％A;在11～16.5min,100％A;在16.5～17.0 min,100％A～35％A.分别给出海水中蛤毒素PTX-2、PTX-2 SA、7-epi-PTX-2 SA、PTX-11、PTX-12a和PTX-12b的质谱图.结果发现,这一海域海水中存在蛤毒素PTX-2、PTX-2 SA和7-epi-PTX-2 SA,不存在蛤毒素PTX-11、PTX-12a和PTX-12b.海水中蛤毒素PTX-2、PTX-2 SA与7-epi-PTX-2 SA之和的最大峰值出现在8月1日.然后,蛤毒素浓度逐渐降低.     

The first detection of okadaic acid and its derivatives in Korean bivalves by liquid chromatography-mass spectrometry

ABSTRACT:   Lipophilic toxin profiles associated with diarrhetic shellfish poisoning in Korean bivalves were investigated by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). Okadaic acid (OA), dinophysistoxins (DTX), pectenotoxins (PTX) and yessotoxin (YTX) in bivalves were quantified by LC-MS. Thirty-eight bivalve samples were collected from five different areas on the south coast of Korea during January to June 2006. Dinophysistoxin-1 (DTX1) and OA were found in some samples of both mussel Mytilus edulis and oyster Crassostrea gigas . The levels of DTX1 and OA found in the hepatopancreas of the samples were 0.04–0.23 µg/g and 0.03–0.08 µg/g, respectively. Dinophysistoxin-3 was found in the hepatopancreas of the short-necked clam Ruditapes philippinarum at a concentration of 0.06 µg/g. PTX and YTX were not detected from all of the samples examined. This is the first report of the unambiguous identification of OA and its derivatives, by LC-MS, in Korean bivalves.     

饵料藻类对贝类育苗的影响

藻类是贝类育苗的关键因素之一。作为贝类育苗的饵料藻类有多种，不同的藻类对贝类幼虫的食用效果不一样，单独投喂藻类和混合投喂也会产生不同的生长状态。饵料藻类从多方面影响着贝类幼虫的生长、成活、附着变态。     

High prevalence of betanodavirus barfin flounder nervous necrosis virus as well as red‐spotted grouper nervous necrosis virus genotype in shellfish

Using two serially executed PCRs, the discriminative multiplex two‐step RT‐PCR (DMT‐2 RT‐PCR) following the detection seminested two‐step RT‐PCR (DSN‐2 RT‐PCR), we found a high frequency presence of BFNNV genotype as well as RGNNV in various domestic and imported shellfish. This was definitely different from the previous reports of outbreaks and asymptomatic infection only by the RGNNV genotype in cultured finfish in Korea. Cultivation of NNV entrapped in shellfish was performed successfully by a blind passage. Thus, in an attempt to elucidate the epidemiology of betanodavirus, experiments conducted on 969 shellfish samples concluded that (i) distribution of NNV genotype, especially BFNNV, in shellfish is clearly different from that found in finfish of the world; (ii) unlike RGNNV, which showed a high rate in summer, BFNNV showed no seasonal variation and this result suggests BFNNVs in the marine environment remain fairly constant throughout the year; and (iii) the entrapped virus in shellfish was alive and culturable in vitro. These results are the first report of high level prevalence of in vitro culturable NNV in shellfish, for both BFNNV and RGNNV, which may present a potential risk in transmitting nodaviruses to host species in a marine environment.     

海洋主要污染物对贝类及其环境的影响

为给海水贝类健康养殖提供依据,本文总结了近年国内外的报道,从氮、磷、重金属、石油类、有机氯农药等海洋污染物对贝类及其环境影响进行了归纳综述,发现由于特殊的取食方式,贝类体内的污染物含量较其它生物高,此外,同种污染物在不同种类贝类体内的积累也存在显著差异。因此,贝类养殖区的选择要比其他养殖区的选择更加谨慎,另外,也可以针对不同养殖海域的具体情况因地制宜地选择不同的养殖种类。     

我国淡水贝类种质资源现状与保护利用

我国淡水贝类资源丰富、种类繁多,有记录的淡水贝类目前已经超过470种,广泛分布于我国各地的湖泊、河流和山间湿地等生态系统中。其中我国特有种贝类在各主要分布水系的比例均高于50%,特有种质资源十分丰富。淡水贝类不仅在生态系统中扮演着重要的角色,而且具有巨大的经济价值。淡水珍珠蚌中三角帆蚌和褶纹冠蚌,以及一些食用贝类如中华圆田螺、螺蛳、河蚬等的资源开发比较充分,但是由于淡水贝类分布范围广、栖息环境多样,相对于其他一些淡水贝类,目前研究还仅限于资源调查和物种鉴定层面。整体上,国内淡水贝类的种质资源评估不够系统,保护和开发利用未得到足够重视。本文就我国淡水贝类物种多样性与区域分布、淡水贝类种质资源可持续开发与利用情况、引进淡水贝类种质资源与利用现状及淡水贝类种质资源现行保护措施进行概述,并提出有关淡水贝类种质资源保护和可持续利用的建议,以期促进我国淡水贝类资源保护和开发利用协同发展。     

海洋贝类活性肽研究进展

海洋贝类含有丰富的、结构多样的生物活性肽。研究发现这些生物活性肽具有多种生理调节功能,已经发现的有抗氧化、抗肿瘤、抗高血压、抑菌和抗凝血等生物活性。酶解法制备海洋贝类活性肽已成为当前国内外研究的热点。本文综述了在制备、分离和纯化海洋贝类活性肽过程中的相关技术,概述了海洋贝类活性肽的活性及其结构鉴定方法,并就有关海洋贝类活性肽研究开发过程中存在的一些问题做了简要讨论。     

养殖环境及贝源溶藻弧菌MLST分型及其毒力基因、耐药性分析

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是近年来贝类病害中最常见的细菌性病原之一,对贝类养殖产业的健康发展构成严重威胁。本研究旨在分析不同养殖环境水体和贝类组织中,溶藻弧菌的基因变异、毒力基因、耐药性及其分布规律。对12株溶藻弧菌分离株开展多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、毒力因子以及菌株耐药性分析,结果显示,12株溶藻弧菌的序列型(sequence typing, ST)分型互不相同,7株为PubMLST数据库已经收录的ST型,5株因管家基因的等位基因位点变化而形成新的ST型,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有较高的遗传多样性。12株溶藻弧菌都携带tlh、fur和collagenase三种毒力基因,但均未检测到tdh、trh、toxR和tcpA毒力基因。溶藻弧菌携带毒力因子的种类和数量受地区分布等因素的影响。不同来源的溶藻弧菌均具有多重耐药特征,对青霉素和氨苄西林产生抗性。本研究表明,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有种群复杂、遗传多样性高的特点;不同来源菌株在毒力基因携带和耐药性方面存在较大差异。本研究通过探究不同区域内不同来源的溶藻弧菌遗传变异及耐药性差异,对贝源溶藻弧菌的有效防控提供一定理论参考。     

Assessing the end-point temperature of heated fish and shellfish meats

ABSTRACT: Attempts have been made to assess the end-point temperature (EPT) of heated fish and shellfish meats by using the coagulation method together with sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis and enzyme activity determination. Unfrozen and frozen fish and shellfish meats were heat-treated at different selected temperatures with 0, 15 or 30 min holding times. Proteins were extracted with NaCl solution. The coagulation method was able to determine EPT of heated fish and shellfish meats between 60 and 67°C. SDS-PAGE patterns of the filtrates from heated meats were closely related to the results of the coagulation method and enzyme activity determination. Two proteins responsible for producing coagulum of fish meat extracts seem to be lactate dehydrogenase (LDH) and glyceraldehyde phosphate dehydrogenase (GAPDH). End-point temperatures determined by these methods were not significantly different between unfrozen and frozen samples. On the contrary, a highly thermostable protein with a molecular mass of 35 kDa was detected in heated shellfish meats up to 108°C. In scallop adductor muscle, this highly thermostable protein was found to be the tropomyosin subunit from its amino acid composition and their partial sequences. Tropomyosin could be used as an EPT indicator up to 108°C for heated shellfish meats.     

围塘养殖沉积物中重金属的分布及环境效应

对东海隘顽湾海域贝类、青蟹、对虾、弹涂养殖区水体表层沉积物中重金属Cu、Cr、Pb的含量分析结果表明,在不同水产品围塘养殖水体沉积物中,各种重金属含量差异显著。其中,铜含量在贝类养殖区中最高,铬含量在弹涂养殖区中最高,而铅含量无显著性差异。     

液相色谱-串联质谱法测定贝类毒素软骨藻酸的残留

建立了液相色谱-串联质谱测定贝类毒素软骨藻酸残留的检测方法。样品经50%甲醇提取，LC-SAX柱净化，然后选用电喷雾离子源（ESI），在正离子、多反应监测方式（MRM）模式下进行定性，以外标法进行定量。方法的定量限为0.10μg/g，工作曲线的线性范围为0.10μg/g～8.00μg/g。在添加浓度为0.10μg/g～4.00μg/g的范围内，软骨藻酸的平均回收率范围为79.8%~92.2%，RSD范围为4.90%~9.46%。