鉴别猪伪狂犬病毒强毒检测方法的研究进展

为有效配合猪伪狂犬病病毒(PRV)基因缺失疫苗的大规模免疫应用,准确区分强毒感染猪和疫苗接种猪,及时淘汰强毒感染猪,防止免疫猪被误杀,急需加强猪伪狂犬病强毒鉴别诊断方法的研究与推广应用。本文就近年来针对PRV强毒的PCR、荧光定量PCR、LAMP、核酸探针、ELISA、胶体金免疫技术等分子生物学与血清学诊断方法的研究与应用现状及发展前景进行综述,以期为我国猪伪狂犬病的综合防控及净化提供合理的科学依据。     

山东日照市养猪场(户)伪狂犬病免疫效果监测

应用猪伪狂犬病抗体ELISA试验方法对山东省日照市8家养猪场(户)的280份血清样品进行实验室检测,以期了解日照市养猪场(户)伪狂犬病免疫效果。结果显示,免疫合格244份,合格率87.1%,猪伪狂犬病的抗体水平检测合格率在80%以上,能为猪群提供较好的保护。     

2019 年河南新乡某规模化猪场 猪伪狂犬病抗体水平检测分析

猪伪狂犬病是危害规模化养猪场的主要传染病之一,为了解河南新乡某规模化猪场猪伪狂犬病(PR)的防控情况,对猪场内的健康猪群进行猪伪狂犬病gE基因缺失疫苗免疫,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对免疫猪群体内的猪伪狂犬病gE抗体水平进行检测分析。由试验得出,母猪妊娠初期猪伪狂犬病gE抗体阳性率为90%,妊娠中期和后期达到100%;哺乳期仔猪也达到了100%;5～6周龄保育猪伪狂犬病gE抗体阳性率为70%;7～8周龄保育猪抗体阳性率为50%;9～10周育肥猪抗体阳性率为40%。由试验可知,该猪场母猪妊娠期和哺乳斯感染猪伪狂犬病毒严重,保育期猪只疫情逐渐减少,育肥期疫情得到有效控制。建议长期检测猪伪狂犬病抗体,逐步淘汰阳性母猪,培养阴性后备猪群。对规模化猪场进行猪伪狂犬病抗体水平检测,可以更好地了解猪场的免疫效果,对促进养猪场经济平稳运行有积极作用。     

猪伪狂犬病免疫抗体监测报告

<正>昌平位于北京市西北部,猪的饲养量约10万头左右,为了减少猪群损失,防止猪群发生伪狂犬病,昌平区的部分猪场免疫了伪狂犬病活疫苗。为了摸清疫苗免疫效果,我们进行了此次猪伪狂犬病免疫抗体监测。猪伪狂犬病病毒抗体试验,采用的是猪伪狂犬病病毒抗体酶联免疫吸附试验的方法,对昌平     

浙江省养猪场猪伪狂犬病野毒抗体检测

近年来 ,浙江省许多养猪场发生了以初生仔猪大批急性死亡为主要特征的母猪繁殖障碍症 ,造成很大损失。经多次疫情分析 ,结合兔体接种试验或血清学检测等诊断方法 ,确诊为猪伪狂犬病。为进一步了解我省养猪场猪伪狂犬病传播和流行情况 ,为动物防疫监督机构制定防疫计划提供依据 ,指导养猪场做好猪伪狂犬病的防疫工作 ,我们于 1 999年 1月至 2 0 0 0年 5月应用 ELISA试验方法对全省 32个未经猪伪狂犬病疫苗免疫的养猪场进行了猪伪狂犬病野毒抗体检测。现报告如下 :1　材料与方法1 .1　检测试剂　猪伪狂犬病抗体筛选试剂盒和标准阴阳性血清购…     

实验室检测在规模化猪场伪狂犬病免疫程序调整中的应用

为了对福建宁德某规模化猪场伪狂犬病免疫程序进行调整,应用ELISA法对待配后备母猪、繁殖母猪(怀孕40d母猪、怀孕70d母猪和哺乳母猪)、公猪以及60日龄、90日龄、120日龄和160日龄商品猪血清同时进行猪伪狂犬病gE和gB抗体检测,以掌握不同阶段猪伪狂犬病野毒的感染情况并制定适合本场的猪伪狂犬病免疫程序。免疫程序调整以后的检测结果显示:通过对不同猪群伪狂犬病疫苗程序的调整,商品猪后期和待配后备母猪伪狂犬病野毒感染为阴性,说明目前场内采用实验室检测调整伪狂犬病免疫程序的方法是科学的。     

某猪场猪伪狂犬病免疫程序优化对比试验

为了探究保育猪不同伪狂犬病免疫程序的免疫效果,笔者采取4种不同免疫程序进行试验,即4组猪群于35日龄首免和70日龄二免:A组分别免疫接种伪狂犬病弱毒疫苗和灭活疫苗;B组分别接种伪狂犬病灭活疫苗和弱毒疫苗;C组均接种伪狂犬病灭活疫苗;D组分别接种伪狂犬病弱毒疫苗,接种方式和剂量均按照说明书进行。于试验前(25日龄)和试验后(100日龄)应用ELISA法分别检测不同组别的猪群伪狂犬病毒g E和g B抗体水平水平,确定阳性率差异。结果显示:免疫程序A和B可以均能有效控制猪群伪狂犬病野毒的进一步流行,降低猪群的死亡率,但免疫程序B无法使猪群伪狂犬病得到净化,而免疫程序C和D均无法抑制伪狂犬病毒野毒的流行。因此,选择免疫程序A对于防控与净化伪狂犬病毒的发生与流行效果最好。     

伪狂犬病活疫苗免疫猪血清抗体消长规律的研究

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)与中和试验(SN)方法,对伪狂犬病活疫苗免疫猪血清抗体水平进行监测,并对免疫猪和补充及对照猪进行伪狂犬病野毒抗体检测。结果表明伪狂犬病活疫苗免疫健康敏感猪7 d后抗体水平开始上升,35 d后达到高峰,高水平的免疫抗体维持时间长达2个月以上,之后逐步下降,直至试验结束(365 d)PRV-Ab仍呈阳性;而非实验对照猪血清自始至终PRV-Ab均为阴性;全部猪血清伪狂犬病野毒抗体皆为阴性。说明通过长时间的同栏饲养未发现伪狂犬病野毒感染。     

规模猪场猪伪狂犬病的净化研究

猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的多种动物共患传染病．可引起仔猪大量发病死亡，母猪流产、死胎等繁殖障碍，育肥猪生长发育缓慢，经济损失惨重。为净化规模猪场的猪伪狂犬病，试验采用综合性的净化措施，除淘汰病猪及抗体检测阳性猪、加强饲养管理等技术措施外，采用猪伪狂犬病弱毒疫苗免疫试验，结果母猪一次免疫合格率为90．74％，仔猪二免后的免疫合格率为94．44％。     

云南省某规模化猪场不同日龄猪伪狂犬病病毒抗体的检测

为了评估云南省某猪场猪群的猪伪狂犬病毒野毒感染及免疫状况,试验随机采集该猪场的不同日龄猪的血清80份,采用猪伪狂犬病病毒gE(PRV-gE)抗体检测试剂盒和猪伪狂犬病病毒gB(PRV-gB)抗体检测试剂盒同时进行猪的狂犬病抗体检测,以掌握不同日龄猪伪狂犬病毒野毒的感染情况并制订适合该猪场的猪伪狂犬病免疫程序。结果表明:该场不同日龄猪PRV-gE抗体全部为阴性,无野毒感染; PRV-gB抗体阳性率均为100%,PRV-gB抗体水平相对较稳定。说明该猪场的免疫程序较为合理。     

Comparison of a modified counterimmunoelectrophoresis test and a microimmunodiffusion test for detection of pseudorabies virus antibodies in porcine sera.

The correlation of a modified counterimmunoelectrophoresis (CIE) test and a microimmunodiffusion test for detecting pseudorabies virus antibodies in porcine sera was investigated, using as reference a standard virus neutralization test. The counterimmunoelectrophoresis test exhibited a sensitivity comparable to the microimmunodiffusion test but was not as sensitive as the virus neutralization test. The best feature of the modified counterimmunoelectrophoresis test is that it is a rapid test. It provides an alternative to currently used diagnostic tests for detection of pseudorabies virus antibodies in sera from field reared and experimentally reared swine exposed to pseudorabies virus.     

伪狂犬病分子生物学诊断方法研究进展

伪狂犬病是多种家畜和野生动物的一种重要传染病,猪为病毒的贮存宿主。该病一毒一旦感染动物则终生带毒呈潜伏感染状态,遇到外界应激则重新激活而向外界排毒,引起易感动物发病。为了加强进口检疫和优良种畜的推广,防止该病的传入,各国科技工作者根据常规的抗原抗体检测方法不能检测该病毒的潜伏感染情况,研制出各种检测伪狂犬病病毒核酸的分子生物学方法。本文就核酸探针杂交技术,常规ＰＣＲ、鉴别ＰＣＲ、鉴别与定量ＰＣＲ等     

猪伪狂犬病病毒套式PCR检测方法的建立与应用

对伪狂犬病病毒(PRV)国标PCR方法进行优化,建立一种高灵敏度的套式PCR方法。根据伪狂犬病病毒gD基因序列,设计并合成了2对引物,通过反应体系和条件的优化建立套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料检测对比试验等验证建立方法的适用性。结果表明,建立的方法检测伪狂犬病病毒DNA的极限为2.6×10-7 ng/mL,灵敏度比国家标准方法提高了1 000倍,从疑似PRV感染组织病料中能大幅度提高阳性检出率。本研究成功建立了一种灵敏度高、特异性好的快速检测猪伪狂犬病病毒的套式PCR检测方法。     

Development and evaluation of an indirect enzyme immunoassay for detection of porcine antibodies to pseudorabies virus.

An indirect enzyme immunoassay is described for detection of porcine serum antibody to pseudorabies virus. The analytical sensitivity of the enzyme immunoassay was found to be approximately 4.5 log 4 X 10 (5120 times) greater than the serum neutralization test, based on parallel end point titrations. The diagnostic sensitivity of the enzyme immunoassay was comparable or superior to that of the serum neutralization, based on the earliest detectable antibody after infection of swine with pseudorabies virus by intranasal or intrauterine routes or by contact with infected pigs. The enzyme immunoassay, at a screening dilution of 1:20, gave 100% agreement with ELISA results provided with a U.S. Department of Agriculture-Animal and Plant Health Inspection Service proficiency panel of 40 sera. One serum having demonstrable antibody by the enzyme immunoassay was seronegative by the serum neutralization test.     

猪伪狂犬病高免血清的制作与初步应用

用伪狂犬病抗体阴性健康猪,以不同剂量、间隔一定时间、多次免疫接种伪狂犬病强毒S株,制备伪狂犬病病毒高免血清,试验表明,用本方法制备的伪狂犬病病毒高免血清特异性强、抗体效价高达256倍以上,完全符合诊断用血清标准要求.并将高免血清在中和试验、ELISA、免疫胶体金等进行了对比试验.     

Radial immunodiffusion enzyme assay for detection of antibodies to pseudorabies virus in swine serum

A radial immunodiffusion enzyme assay for the detection and quantitation of antibodies to pseudorabies virus in swine sera was developed and the methods were standardized. The assay combined the principle of radial immunodiffusion with enzyme-linked immunosorbent assay. Quantitation of pseudorabies virus antibody titers was determined by measuring the diameter of a colored circular zone after overnight incubation of antibody with antigen. The specificity and sensitivity of the radial immunodiffusion enzyme assay were compared with that of the standard virus-neutralization test, and the results were determined to be correlated highly (r = 0.694, P less than 0.0001). The assay also appeared to be highly reproducible and simple to perform.     

伪狂犬病病毒野毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据伪狂犬病病毒gE基因的序列,设计和合成了一对特异的可用于检测伪狂犬病病毒野毒的PCR引物和一条Taqman荧光探针,采用Li ght Cycl e 480荧光定量PCR仪,建立了一种可实时定量检测伪狂犬病病毒野毒的荧光定量PCR技术。该方法的线性范围为1.0×102～1.0×1010拷贝,灵敏度可达4拷贝。检测速度快,仪器的运行时间仅为1 h。对13株猪伪狂犬病病毒野毒进行了检测,结果均为阳性;与伪狂犬病gE基因缺失疫苗、猪细小病毒和鸭瘟病毒无非特异性反应。与病毒分离培养比较,该方法具有快速、灵敏、特异、定量、重复性好等优点,可望用于临床上伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的区分,伪狂犬病病毒野毒的检测和病毒分布的研究等。     

猪伪狂犬病毒PCR检测方法的优化

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种疱疹病毒性疾病,在世界大部分地区都是地方性家畜流行病。而且猪伪狂犬病与其他猪传染病不易区分,因此,建立一个特异性强的检测方法对于其诊断具有重要意义。实验是在实验室已经建立伪狂犬病毒单项PCR检测方法的基础上,对扩增条件进行优化后对其特异性进行了验证。结果发现,优化后的方法特异性好,只有猪伪狂犬病毒扩增为阳性,其余DNA病毒:猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)均呈现阴性。因此,本研究方法可以为今后实验室检测猪伪狂犬病毒提供参考。     

猪伪狂犬病病毒gE蛋白在野毒诊断中的应用进展

With mass immunization application of pseudorabies virus （PRV） gE gene deleted attenuated vaccine in China, it played an important role in prevention and control of porcine pseudorabies, meanwhile it also needed to establish a differential diagnosis technology for gE gene deleted vaccine matching to eliminate virus affected swine and reduce immune pigs to be killed, and gradually realized the purification of PRV. With the gradual progress of molecular biology and immunology, molecular biological and serological diagnosis methods based on PRV gE protein continuously developed and improved. In this paper, recent study on various molecular and serological diagnosis methods of gE protein based on the current situation and development prospect were reviewed, in order to provide reasonable scientific basis for diagnosis and prevention of PRV in China.     

A study comparing the immunologic responses of swine to pseudorabies viral antigens based on the ELISA, serum virus neutralization, and latex agglutination tests

A study of pseudorabies virus (PRV)-vaccinated pigs comparing the immune responses detected by the latex agglutination test (LAT) with responses detected by other routine tests for pseudorabies antibodies indicated that LAT was more sensitive than either the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or the serum virus neutralization test (SVNT). The LAT detected antibodies sooner than ELISA and SVNT in unvaccinated pigs after challenge with virulent PRV. The specificities of the 3 tests were found to be near 100%. The LAT is a good alternative to SVNT or ELISA for detection of PRV-specific antibodies.