荷斯坦奶牛耐热性状的RAPD标记研究

为了筛选出耐热荷斯坦奶牛的分子遗传标记，并应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。从高产奶牛群中筛选出耐热性状差异显著的10头高产荷斯坦牛作为实验材料，采用RAPD作为分子标记筛选方法。优化奶牛RAPD反应最佳体系，并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。通过RAPD结果，并结合红细胞钾测定结果和生产性能进行分析，确定3个分子标记与奶牛耐热性状相关，并对其进行了测序与分析。     

荷斯坦奶牛耐热分子遗传标记的研究

选取10头高产荷斯坦牛为实验材料,优化奶牛RAPD反应最佳体系,并在154条随机引物中筛选出稳定性好、带型清晰的引物64条。结合红细胞钾测定结果和生产性能测定,通过RAPD分析并筛选出3个与奶牛耐热性状相关的分子标记,以期应用这些分子标记进行高产耐热荷斯坦奶牛的选育。     

用RAPD技术筛选中国荷斯坦牛产奶量性状遗传标记

选用320条10碱基随机引物在由36头高产（305d产奶量〉8500kg）和32头低产（305d产奶量〈5600kg）中国荷斯坦牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩增，从中筛选出稳定性好、带型清晰且在2个DNA池间有明显差异的RAPD引物24条。用筛选到的24条引物对所有个体进行PCR检测，得到了5个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记，并对其中4个进行了克隆测序和SCAR标记转化以及生物信息学分析。结果表明：SCAR标记yield—s139与产奶量密切相关，应用电子克隆方法已将该标记由921bp延伸到2141bp，经同源性比较发现，此标记对应于奶牛基因组中LINEs家族中的一个重复元件，推测该元件附近可能存在与产奶量性状相关的QTLs或主效基因。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析。结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW_001024067.1|BtUn_WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01)。研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记。     

荷斯坦奶牛抗热应激SCAR标记的研究与应用

为能利用抗热应激SCAR标记应用于奶牛抗热应激新品种的选育,随机选取52头高产耐热荷斯坦奶牛和41头高产不耐热荷斯坦奶牛,利用RAPD技术对筛选出的耐热分子标记进行序列分析和SCAR转化,并以S441 SCAR标记对种公牛和核心群的母牛进行检测和分析.结果表明,随机引物S441和S463在高产耐热组中分别扩增了581 bp和680 bp的特异性片段,序列比较显示,前者与KCNN2基因的同源性达90%,后者与NW-001024067.1|BtUn-WGA9442_2同源性达99%;S441 SCAR标记在种牛的检出率为:母牛12.7%[27/213],公牛32.6%[15/46];数据统计分析表明:有无S441 SCAR标记的母牛产奶量差异不显著(P>0.05),但在热应激条件下产奶量下降率差异极显著(P<0.01).研究初步确定S441标记作为荷斯坦奶牛抗热应激分子标记.     

娟姗牛产奶量性状RAPD标记的研究与生物学分析

为了筛选出高产娟姗牛的分子遗传标记,并应用这些分子标记进行高产娟姗牛的选育,笔者选用250条10碱基随机引物在由20头高产(305 d产奶量4000 kg)和20头低产(305 d产奶量3200 kg)娟姗牛所组成的2个DNA池间进行RAPD-PCR扩分子标记筛选。用筛选到的200条引物对所有个体进行PCR检测,得到了3个与奶牛产奶量性状相关的RAPD标记,并对它们进行了克隆测序以及生物信息学分析。试验结果表明,S11、S1110和S120 3个DNA片段与产奶量有关,其中S11与产奶量性状正相关关系,S1110和S120与产奶量性状呈负相关关系。     

中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛的性别鉴定

根据中国黑白花奶牛的ZFX、ZFY基因序列设计引物ZFY1、ZFX2、ZFY3，对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛ZFX、ZFY基因片段进行PCR体外扩增和性别鉴定。结果显示：ZFY1、ZFX2引物对ZFX、ZFY都能扩增出一条652bp片段；ZFY基因特异性引物ZFX2、ZFY3只能对雄性扩增出一条359bp的片段；特异性引物ZFX2、ZFY3能对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛进行性别鉴定。     

中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛的性别鉴定

根据中国黑白花奶牛的ZFX、ZFY基因序列设计引物ZFY1、ZFX2、ZFY3,对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛ZFX、ZFY基因片段进行PCR体外扩增和性别鉴定.结果显示ZFY1、ZFX2引物对ZFX、ZFY都能扩增出一条652bp片段;ZFY基因特异性引物ZFX2、ZFY3只能对雄性扩增出一条359bp的片段;特异性引物ZFX2、ZFY3能对中国麦洼牦牛、美国荷斯坦奶牛进行性别鉴定.     

紫花苜蓿品种鉴定的RAPD分子标记技术研究

试验分别以中苜一号(Medicago sativa L. cv.Zhongmu No.1)、肇东(M.sattva L. cv.Zhodong)、甘农三号(M.sativa L. cv.Gannong No.3)、公农一号(M.satzva L. cv.Gongnong No.1)紫花苜蓿品种的混合DNA(由各品种60个单株的DNA等量混合)为模板筛选RAPD特异性引物,分析比较品种鉴定的特异性谱带.结果表明:从120条随机引物中筛选出S1、S78、S89和S¨5共4条随机引物,可以通过特异性分子标记位点反映品种间的差异;另外,筛选出的RAPD标记引物对各品种60个单株DNA的测试显示品种内部存在特异性标记的单株比例较高;通过RAPD分子标记引物的筛选、标记程序的完善,确定品种特异性标记谱带,可以进行紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的鉴定.     

采用四引物ARMS-PCR方法检测奶牛乳腺组织DGAT1基因单核苷酸多态性

试验旨在快速有效地检测泌乳奶牛的二酰甘油转酰基酶1（diacylgycerol acyltransferase 1,DGAT1）乳脂量性状的优势等位基因K232A单核苷酸多态性,确定DGAT1基因型进而确定泌乳性状,为中国荷斯坦奶牛分子标记辅助选择提供技术支持。选取6头泌乳初期（3头为高乳产量牛,3头为低乳产量牛）中国北方荷斯坦奶牛为研究对象,提取乳腺组织基因组DNA,分别设计1对外引物和1对内引物,建立一种四引物ARMS-PCR体系快速检测奶牛乳腺组织DGAT1基因单核苷酸多态性。结果发现,外引物扩增片段长度为512 bp,为PCR反应的阳性对照,基因型为232K扩增片段长度为369 bp,基因型为232A扩增片段长度为181 bp。PCR结果显示,6头牛的乳腺组织样本均由外部引物扩增出长度为512 bp的片段,泌乳期高乳产量奶牛和泌乳期低乳产量奶牛乳腺组织的特异性扩增片段长度均为181 bp。表明本研究选取的6头奶牛样本DGAT1基因K232A多态性均为232A型。提示该PCR鉴定方法能够快速有效地鉴定奶牛DGAT1基因型,可用于中国荷斯坦奶牛分子标记辅助选择。     

新疆褐牛和中国荷斯坦牛POU1F1基因第六外显子多态性与产奶量的关联分析

以新疆褐牛和中国荷斯坦牛为研究对象.应用PCR-RFLP方法对POU1F1基因第6外显子的多态性及其与产奶量的相关性进行了分析.结果表明,新疆褐牛和中国荷斯坦牛的群体在该位点分别有2种等位基因(A/B),频率分别为0.43/0.57和0.33/0.67.B等位基因是优势等位基因.在新疆褐牛群体中,BB型个体的产奶量显著高于AA型(P<0.05).     

欧洲不同良种肉牛杂交利用青海黄牛后代生长发育试验研究

为了研究青海省肉牛杂交改良效果,筛选适应高寒地区肉牛最佳杂交组合,从而为今后开展肉牛杂交工作提供有力的依据,通过6年的试验研究,测定分析了蓝本、皮本、利本、夏本、德本F1牛和青海黄牛的初生,3月龄,6月龄,12月龄,18月龄体重及体尺指标及杂交后代对青海高原高寒气候的适应性观察。结果显示:五个杂交组合F1代不同年龄的生长速度和体尺指标均明显优于青海黄牛(P<0.01)说明良种肉牛改良效果显著,在不同杂交组合后代的比较中,蓝本F1牛生长发育最快,各阶段体重及体尺指标显著高于青海黄牛,比皮本、利本、夏本、德本F1牛也有明显提高。     

颗粒饲料对不同品种生长期牛育肥效果的比较研究

本文主要研究和比较不同品种育肥牛使用颗粒饲料其消化率和饲料报酬的不同。试验选择3个品种处在生长期的育肥牛,利用颗粒料进行饲喂,比较其消化率及饲料效率。试验结果表明,使用颗粒饲料,生长期西门塔尔牛、黑白花奶牛和蒙古草原黄牛在钙、磷消化率方面的差异显著(P<0.05),以黑白花牛最高。但粗纤维、粗蛋白、有机物的消化率以及料肉比等指标间的差异不显著(P>0.05)。总之,在试验期内,使用颗粒饲料,不同品种生长期育肥牛其部分养分的消化率有所不同,但不同品种其饲料报酬的差异并不显著。     

初配月龄对澳系荷斯坦牛头胎泌乳性能的影响

本试验采用海丰奶牛场有限公司2 480头澳系荷斯坦牛初配月龄及其第一胎泌乳性能数据,分析不同初配月龄对第一胎泌乳天数、全泌乳期实际产奶量、305天校正奶量、305天脂肪产量和305天蛋白产量的影响。结果表明,22月龄初配奶牛305天校正奶量最高(8 934±1 667kg),其次为14月龄,24月龄305天校正奶量最低。14月龄初配奶牛全泌乳期产奶量最高(9 369±1 375kg),并且14~16、19~22月龄初配奶牛全泌乳期产奶量显著高于其他月龄奶牛(P<0.05)。22月龄初配奶牛305天脂肪产量和蛋白产量均达到最高。综上,该场澳系进口荷斯坦牛初配月龄为14月龄时最佳。     

奶牛性别鉴定的研究与应用

选取牛雄性性别决定基因SRY (sex region of Y chromosome),根据基因序列设计特异引物,应用PCR技术对5头荷斯坦奶牛DNA样品进行扩增,鉴定其性别;并对设计的引物灵敏度进行检测;对已有的公、母各20头荷斯坦奶牛DNA样品进行PCR盲检,获取奶牛高灵敏度特异性引物,用于奶牛性别鉴定。结果表明,4头公牛DNA样品可以扩增出目标条带(66 bp),1头母牛DNA样品无法扩增出条带,阴性对照扩增无条带;最佳引物灵敏度为1.6 pg/μL,可以很好地满足性别鉴定需要。40头个体中,20头个体DNA样品可以扩增出条带,其余20头个体DNA样品无法扩增出条带,检测结果与实际性别对比准确率为100%。试验结果表明,设计的引物灵敏度比较好,能够满足奶牛性别鉴定的需要。     

牛MC1R基因——新的SNP

本实验克隆测序了中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛三个品种的MC1R基因。运用Blastn工具对本实验得到的序列及所有发表的牛MC1R基因序列进行比对分析，发现牛MC1R基因编码区725bp处存在一新的单核苷酸多态性（SNP）。基于此SNP我们对现发表的所有牛MC1R基因做了总结。     

8个牛品种的大理石花纹评分相关基因变异的微卫星DNA池分析

本研究以8个牛品种为研究对象,利用与大理石花纹评分基因相关的7个微卫星位点结合DNA池分析技术,探讨微卫星DNA多态性与8个牛品种大理石花纹评分间的关系,并根据性状同质性原理预测品种组合,以加快生产出高端"雪花"牛肉。结果表明:日本和牛与荷斯坦牛、安格斯牛、渤海黑牛的相似性系数均超过0.8,而日本和牛与其他牛品种的的相似性系数均小于0.8。利用MEGA4软件采用邻接法进行聚类,利木赞牛与西门塔尔牛先聚合在一起,再与草原红牛聚合;渤海黑牛与鲁西黄牛2个地方良种聚合在一起,以上5个品种聚为第1大类。荷斯坦牛与日本和牛聚合,再与安格斯牛聚在一起,它们聚为第2大类。根据本研究结果和国外肉牛杂交生产实践,从牛肉大理石花纹性状的同质性出发,建议利用日本和牛、荷斯坦牛为亲本,杂交生产高档"雪花"牛肉,以解决我国的肉牛牛源短缺问题。     

Evaluation of the inheritance of the complex vertebral malformation syndrome by breeding studies

To investigate the congenital complex vertebral malformation syndrome (CVM) in Holstein calves, two breeding studies were performed including 262 and 363 cows, respectively. Cows were selected from the Danish Cattle Database based on pedigree and insemination records. Selected cows were progeny of sires with an established heterozygous CVM genotype and pregnant after insemination with semen from another sire with heterozygous CVM genotype. Following calving the breeders should state, if the calf was normal and was requested to submit dead calves for necropsy. In both studies, significantly fewer CVM affected calves than expected were obtained; a finding probably reflecting extensive intrauterine mortality in CVM affected foetuses. The findings illustrate increased intrauterine mortality as a major potential bias in observational studies of inherited disorders.