我国Ⅰ群禽腺病毒主要流行血清型及其防控

对2007~2017年从我国主要养殖区临床病料中分离的86株禽腺病毒(FAd V)血清型鉴定结果表明,我国流行的主要血清型为FAd V-11、FAd V-4、FAd V-8b和FAd V-8a,常与鸡传染性贫血病病毒混合感染。蛋鸡流行的FAd V血清型主要为FAd V-4(88.9%),肉鸡主要为FAd V-11(47.6%),而危害最大的是FAd V-4引起的心包积水-肝炎综合征。在鸡LMH细胞上进行的交叉中和试验结果表明,FAd V-4的高免阳性血清可中和其自身和FAd V-11,但不能中和FAd V-8a、FAd V-8b。提示,有必要研制FAd V-4、FAd V-8a和FAd V-8b三价灭活疫苗和FAd V亚单位通用疫苗。     

副猪嗜血杆菌病的流行病学调查

副猪嗜血杆菌是近年来危害我国养猪业最重要的细菌传染病之一,严重影响着我国养猪业的健康发展,为了解近年来我国副猪嗜血杆菌病的流行情况,我们对山东、河南、黑龙江、江西、辽宁、广东、陕西、四川等地区送检病料进行了副猪嗜血杆菌的分离、鉴定。试验结果表明,从2006~2009年送检的194个患病猪场发病猪的关节液、肺脏、脑组织、心血、鼻腔等病料进行检测,最终分离到47株副猪嗜血杆菌,分离率为24.2%;通过采用KRG(Kieletein-Rapp-Gabriedson)琼脂扩散方法对分离菌株进行血清分型鉴定,结果血清4型13株(占27.7%)、血清5型10株(占21.3%)、血清12型8株(占17%)、血清13型7株(占14.9%),表明我国副猪嗜血杆菌主要血清型是血清4型、血清5型、血清12型和血清13型。     

鸡群中6株FAdV-8a与FAdV-8b型禽腺病毒的分离与鉴定

通过监测鸡群中禽腺病毒的感染情况,为临床养殖提供信息资料。采集河北某鸡场表观健康鸡群泄殖腔拭子45份,在病毒分离的基础上,通过分离株序列比对与遗传进化分析血清型。结果共分离到6株禽腺病毒,其中RPVA0923株和RPVA0924株核苷酸序列与FAd V-8b相似性大于98.68%,与FAd V-8b型K08株、764株有较近的亲缘关系;RPVA0925、RPVA0926、R PVA0927、R PVA09282株核苷酸序列与FAd V-8a型禽腺病毒相似性大于98.81%,与FAd V-8b型TR59株亲缘性最近。本研究分离到4株FAd V-8a和2株FAd V-8b。结果表明临床表现健康鸡群存在携带多血清型禽腺病毒,养殖企业需重视这种现象。     

11株血清4型禽腺病毒的分离鉴定及遗传进化分析

为了阐明Ⅰ群禽腺病毒在我国部分地区鸡群的感染状况,对2015年10月~2016年10月采集自山东、河北等鸡场疑似禽腺病毒感染病鸡的肝脏样品,通过病毒分离、PCR、动物回归试验等进行分离鉴定,最终鉴定出11株血清4型禽腺病毒。根据Gen Bank上发表的Ⅰ群禽腺病毒(FAd VⅠ)Hexon基因序列设计引物,对分离的11个毒株测序,并与其他血清型参考毒株进行比较分析。结果表明:分离的11株FAd V同源性高达99.7%以上,与FAd V-4参考毒株的核苷酸序列的同源性在98.3%~99.7%之间,与FAd V-10血清型序列同源性较近,为97.2%,而与FAd V-5、FAd V-8血清型同源性较低,仅在66.4%~87.2%之间。研究结果为FAd V的防控和新疫苗研发提供了可靠的理论依据。     

禽腺病毒4型抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种快速检测鸡群中禽腺病毒4型(FAd V-4)的血清学方法,本研究利用纯化的FAd V-4中国流行株作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测FAd V-4血清抗体的间接ELISA方法。FAd V-4抗原与抗新城疫病毒、禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒阳性血清均无交叉反应,表明该方法具有较好的特异性;批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.735%和4.373%,显示该方法具有较好的稳定性;利用所建立的ELISA方法对40份来自疑似FAd V-4感染病鸡的血清样品进行检测,检测结果与FAd V-4 PCR检测结果符合率为100%。对我国河南、山东、安徽、山西和江苏等不同地区的676份鸡血清样品进行了FAd V-4流行病学调查,结果显示上述省份均存在不同程度的FAd V-4感染,抗体阳性率在69.3%~89.1%。表明该方法为FAd V-4流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。     

锦州地区副猪嗜血杆菌血清型鉴定

本研究先后从锦州市太和区、凌海、北镇、黑山、义县等地采集以多发性浆膜炎为主要特征的病猪病料13份,在被检的13份病料中分离到6株疑似副猪嗜血杆菌菌株,同时对所分离的菌株进行了形态学检查、分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型鉴定,最终证实6株为副猪嗜血杆菌,血清型分别为:血清4型1株、血清5型2株、血清12型1株、血清13型2株.本研究初步确定了锦州地区副猪嗜血杆菌流行菌株的血清型,为猪场制定副猪嗜血杆菌病的防控措施提供理论依据.     

樱桃谷鸭Ⅰ亚群腺病毒PCR方法的鉴定

为明确山东泰安地区鸭腺病毒的发病情况,本研究选择2对针对Ⅰ亚群禽腺病毒(FAd V)的特异性引物,对养殖户送检的54份病死鸭病料及48份死胚进行PCR检测,对Ⅰ亚群FAd V阳性的样品进行克隆、序列测定。结果显示,病料中Ⅰ亚群FAd V阳性率为9.3%(5/54),未从鸭死胚中检测出Ⅰ亚群FAd V感染。序列比对显示,Ⅰ亚群FAd V的部分核苷酸序列与两株血清4型FAd V参考株(中国,KU569296、KU981115)的同源性最高,为97.7%,本研究显示,该PCR检测方法可用于鉴定Ⅰ亚群FAd V,该结果对Ⅰ亚群FAd V的检测和生产上流行血清型的鉴定具有参考意义。     

2019—2020年山东省中西部地区鸭源禽腺病毒病原学检测及遗传进化分析

禽腺病毒(fowl adenovirus,FAd V)2015年开始在我国鸡群中大规模流行,目前在鸭群中的检出也日益频繁。为了解山东省鸭群中FAd V流行及遗传变异情况,2019—2020年从山东省中西部8个地区21个鸭场,收集病死鸭组织样品237份,通过PCR进行病原学检测,并将阳性病料接种鸡肝癌细胞进行病毒分离,扩增其六邻体(Hexon)基因进行遗传进化和氨基酸位点突变分析;利用蚀斑试验和高通量测序纯化鸭源FAd V(命名为CHSD-2)并分析其全基因组序列。结果显示:237份样品中,有68份检测为FAd V阳性,阳性检出率为28.69%;冬、夏季节FAd V阳性检出率较高。共分离到16株鸭源FAd V,全部为血清4型(FAd V-4);所有分离毒株与鸡源FAd V-4亲缘关系最近,与参考毒株的Hexon蛋白氨基酸同源性为99.1%～99.9%,仅有个别氨基酸发生突变,分离毒株间的Hexon氨基酸同源性为98.6%～100%;纯化后分离毒株CHSD-2基因组全长43724bp,与鸡源FAd V-4参考毒株全基因组核苷酸同源性为100%。结果表明,FAd V在山东省中西部地区鸭群中分布较为广泛,与鸡群中流行的毒株相同,未发生大的变异,因此使用疫苗免疫依然是防控该病的有效措施。     

吉林省犬细小病毒流行毒株的分离及VP2基因序列分析

为了解吉林省宠物医院就诊犬犬细小病毒流行现状及毒株变异情况,从吉林省长春、吉林、辽源、松原、九台地区采集就诊犬肛门拭子73份,采用胶体金快速检测试剂盒检测后,阳性样品15份。选取具有代表性的6份病料使用F81细胞进行病毒的分离,成功分离到6株病毒(暂命名为JL-CC1、JL-CC2、JL-JL、JL-SY、JL-JT、JL-LY),经通用引物鉴定均为犬细小病毒。VP2基因序列分析结果显示,6株CPV分离株之间的核苷酸同源性为99.3%~100%,与近年来国内分离株核苷酸同源性为98.9%~99.9%,与国外分离株核苷酸同源性为98.3%~99.7%。遗传进化树结果表明,6株分离株分属4个分枝:JL-CC1、JL-LY、JL-SY与山东、辽宁分离株同属1个分枝,JL-CC2与黑龙江分离株同属1个分枝,JL-JT与吉林分离株同属1个分枝,JL-JL与2013年吉林、黑龙江分离株同属1个分枝。氨基酸序列比对显示6株分离株JL-CC1、JL-CC2、JL-JT、JL-LY、JL-SY属于New CPV-2a基因亚型,JL-JL株为属于New CPV-2b基因亚型。此外,6株CPV分离株在267、324、377、440位氨基酸发生了变异。结果表明,吉林省CPV以CPV-2a亚型为主,CPV-2b亚型为辅,并存在基因多变现象,可为吉林省CPV的有效防控提供数据支持。     

2株Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及致病性分析

为了解山东省禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)毒株的基因遗传演化情况及致病性,本试验对山东省两家疑似暴发鸡包涵体肝炎和心包积液综合征鸡场采集的病料(肝脏、脾脏)进行PCR鉴定,并将鉴定为FAdV的2份阳性病料提取病毒液,接种鸡肝癌细胞(LMH)进行毒株传代培养和细胞病变(CPE)观察、PCR检测、TCID50测定、鸡胚致病性试验、SPF鸡回归试验、病毒hexon部分基因扩增及序列分析。结果显示,试验成功分离到2株FAdV,2株分离株细胞传第1代即可观察到CPE,PCR均可扩增出大小为500bp的片段,且2株分离株细胞F5代TCID50分别为10-7.75/0.1mL和10-7.60/0.1mL,均对7日龄SPF鸡胚有强致病性;第1分离株和第2分离株对21日龄SPF鸡攻毒死亡率分别为80%和15%。hexon基因核苷酸同源性分析结果显示,第1分离株与FAdV-4株同源性最高(99.57%),第2分离株与FAdV-8b株同源性最高(99.18%)。这2株FAdV分离株均与Ⅰ群禽腺病毒同源,与火鸡出血性肠炎病毒(HEV)所在的血清Ⅱ群及减蛋综合征病毒(EDSV)所在的血清Ⅲ群禽腺病毒位于不同分支。第1分离株基因型为C型,血清型为4型,命名为FAdV-SDC4株;第2分离株基因型为E型,血清型为8b型,命名为FAdV-SDE8b株。综上所述,FAdV-SDC4和FAdV-SDE8b株属于近几年国内流行毒株。本研究结果可为鸡包涵体肝炎、心包积液综合征的防控工作和疫苗株的选择提供科学依据。     

犬副流感病毒D121004株的分离鉴定及其F基因遗传进化分析

为了给犬副流感病毒(CPIV)疫苗研制提供支持,无菌采集有呼吸道症状病死犬的脑和肺脏样品,处理后接种Marc-145细胞,通过RT-PCR、红细胞吸附试验,对盲传3代的细胞培养液进行鉴定,成功分离到1株CPIV。该病毒能使Marc-145细胞出现细胞病变,且具有吸附鸡红细胞的能力,将其命名为CPIV-D121004株。对该毒株的F糖蛋白全基因进行克隆及核苷酸同源性分析并构建遗传进化树,发现分离株的F基因较为保守,未出现大的遗传变异。今后需要对分离株的免疫原性进行研究,以探究其作为候选疫苗株的潜力。     

动物产品来自非封锁区的证明格式探究与有关思考

非封锁区的证明是《动物检疫管理办法》中具有法律意义的文书材料,是官方兽医依法实施动物产品补检的前提条件,也是完善动物检疫监管秩序的重要载体。现阶段,我国动物防疫法律规范中,对动物产品来自非封锁区的证明文件的格式尚无明确规定,执法人员对该证明的规范格式、必备内容以及合法性和有效性等方面存在较大困惑。本文分析了实务中对动物产品来自非封锁区的证明出具中存在的主体不合法、名称不统一、内容不详实等现象,结合动物疫病防控与执法实践需求,建议明确证明的出具主体,规范证明的必备内容,统一证明的标准格式,以期为完善证明的出具和规范动物产品的补检提供参考。     

饲粮维生素K3添加水平对五龙鹅胫骨发育、免疫器官指数及抗氧化性能的影响

本试验旨在研究饲粮维生素K3添加水平对五龙鹅胫骨发育、免疫器官指数及抗氧化性能的影响。试验分为2个阶段,1~4周龄阶段,选用1日龄五龙鹅360只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复10只鹅。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量为1.23mg/kg),Ⅱ~Ⅵ组在基础饲粮中分别添加1、2、4、8和16mg/kg的维生素K3。5~16周龄阶段,选用28日龄五龙鹅288只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复8只鹅。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量为1.18mg/kg),Ⅱ~Ⅵ组在基础饲粮中分别添加2、4、8、16和32mg/kg的维生素K3。试验期16周。结果表明:1)与对照组相比,1~4周龄阶段,饲粮中添加4mg/kg维生素K3显著提高了胫骨粗灰分含量、骨密度、骨强度和骨重(P<0.05),极显著提高了胫骨钙、磷含量(P<0.01);5~16周龄阶段,饲粮中添加8mg/kg维生素K3极显著提高了胫骨粗灰分、钙、磷含量及骨密度、骨强度(P<0.01),骨小梁和成骨细胞发育更好。2)饲粮中添加维生素K3对胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,1~4周龄阶段,饲粮中添加4mg/kg维生素K3显著提高了血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性(P<0.05),显著降低了血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05),极显著提高了血清总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.01);5~16周龄阶段,饲粮中添加8mg/kg维生素K3显著提高了血清T-SOD和过氧化氢酶(CAT)活性(P<0.05),显著降低了血清MDA含量(P<0.05),极显著提高了血清T-AOC(P<0.01)。由此可见,1~4周龄和5~16周龄五龙鹅饲粮中维生素K3添加水平分别为4和8mg/kg时,提高了胫骨粗灰分、钙、磷含量及骨密度、骨强度,改善胫骨发育状况;提高了血清T-SOD活性和T-AOC,降低了血清MDA含量,进而提高了五龙鹅抗氧化性能。     

荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用

荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。     

动物生物安全二级实验室建设探讨

为满足兽用生物制品免疫攻毒试验需求,参照实验动物设施建设相关国家标准及生物安全实验室建筑技术规范,设计和建设了一个双走廊模式、屏障环境、符合生物安全二级要求的动物生物安全二级实验室(ABSL-2),可满足使用清洁级以上的实验动物进行的感染性试验的需求。本文针对ABSL-2的设施设计要点、生物安全控制等相关理念和内容进行了阐述,强调建设过程应高度关注生物安全防护问题,以期为建设相关单位建设实验室提供信息参考。     

兽医现场流行病学基础培训效果评估分析

为了解中国兽医现场流行病学基础培训效果,基于Kirkpatrick培训效果评估理论,从反应层和学习层两个方面,构建了CFETPV项目基础培训效果评估方法。以第五期CFETPV项目基础培训为例,运用SurveyMonkey在线调查工具对学员的反应评价、培训前后7项兽医流行病学知识的掌握情况、项目存在问题及有关建议等方面进行调查。采用Excel和SPSS 25.0软件对数据进行描述性统计分析。结果显示,反应层评估方面,学员对培训项目的综合满意度为81%(比较满意);学习层评估方面,配对样本t检验结果显示,培训后学员对7项兽医流行病学知识的掌握度均显著提升(P<0.01)。基础培训经过多年发展,为培养具有流行病学技能的兽医人才搭建了权威平台,培训效果显著。建议项目组织方继续总结经验,跟踪评估,查找不足,促进培训项目的科学化、规范化和持续化发展。     

犬的病料中检测到猪圆环病毒3型

为进一步弄清我国犬是否感染猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3),本试验对山东省青岛市某宠物医院采集发病犬的48份样品进行PCV3荧光PCR检测,发现7份病料呈现明显阳性,对这7株阳性样品继续用普通PCR扩增,有3份可以扩增出228 bp的特异性条带。这些条带测序后与圆环病毒的其他参考序列进行同源性分析,结果显示这3份样品的病毒序列与其他PCV3参考序列处于同一个进化分支,与PCV3的同源性为93.3%～99.5%,表明我国犬确实存在PCV3感染。     

2016——2018年我国部分猪群塞尼卡病毒回顾性监测

塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)是最近新出现的可引起猪水泡样病变的单股小RNA病毒。为了解SVA的流行状况,采集对2016—2018年从我国辽宁等省份猪群的164份病料和2018年从我国福建等7省份35个屠宰场的458份组织混合样品和95份血清样品,用荧光实时定量RT-PCR方法进行SVA检测和分析。结果显示:在2016年的48份样品中,从3个省份检测出7份阳性样品,阳性率为14.6%。2017年的32份病料中,从5个省份检测出7份阳性样品,占比为21.9%;2018年的84份病料中,从3个省份检测出19份阳性样品,占比为22.6%。屠宰场组织样品中,从6个省份检出55份SVA阳性样品,阳性率为12.0%;血清样品中,从1个省份检出7份阳性样品,阳性率为7.4%。结果表明,我国猪群SVA感染年份至少可追溯到2016年;SVA在我国流行面相对较广,且猪群中存在隐性带毒,因此须重视猪群的SVA监视和监测。     

古巴非洲猪瘟根除的经验与借鉴

1971年非洲猪瘟首次传入古巴并于当年根除,1980年再次传入并在一年内又被根除。古巴能快速根除非洲猪瘟,主要与防控专业委员会的及时成立,协作机制的快速建立;全面扑杀措施的快速实施,健康猪产品的合理利用;民间团队的积极参与以及政府财政的大力支持密切相关。古巴的根除经验,可为我国非洲猪瘟的防控提供参考。     

布鲁氏菌病检测和防治方法研究进展

布鲁氏菌病被我国列为二类动物疫病,严重威胁畜牧业发展和进出口贸易,同时也对人类健康造成危害。本文概述了布鲁氏菌病流行现状,从细菌学、免疫学、分子生物学方面综述了布鲁氏菌病最新检测技术,从疫苗研发及药物治疗方面研究了布鲁氏菌病防治进展,从而提出了积极探索准确快速的检测技术,加快新型疫苗制备等建议。