新生牛血清促细胞生长活性检测方法的建立与应用

牛血清是医药生物技术产品中重要的原辅材料之一,做好牛血清的质量控制是提高生物制品质量的重要环节。本研究通过应用PK15、BHK21和ST三种兽用生物制品研制中常用的细胞作为载体,选用国内同等价位5个不同厂家生产的新生牛血清作为比较对象,采用细胞倍增时间测定法、细胞克隆形成率测定法、细胞三次连续传代培养法、MTT比色法和微量终点稀释法五种血清质量鉴定的方法进行比较,检测新生牛血清的促细胞生长活性,最终确定了MTT比色法作为便捷高效快速筛选新生牛血清的检测方法。     

如何做好新生犊牛血清的生产管理和质量监控

进行动物细胞、器官或组织的培养时，大多都需要在培养基中添加必需的新生犊牛血清或者胎牛血清。由于价格上新生犊牛血清比胎牛血清要低得多，并且也足以满足一些常规培养的要求，因此，新生犊牛血清制品在很长一段时间内会拥有广阔市场，生产这一产品会带来很大经济效益。由国家药品监督管理局颁布的《中国生物制品生产用主要原辅材料质控标准》(2000年版)，首次登录了“牛血清”条目，     

新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检测方法的建立

本研究用大肠杆菌标准噬菌体株选择确定的大肠杆菌C-3000作为宿主菌,采用增殖法和噬斑法与双层琼脂平板法,对多个厂家的新生牛血清进行了大肠杆菌噬菌体检测,建立了兽用生物制品细胞培养用新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。     

谈新生牛血清的质量控制

新生牛血清是指出生14h之内的未吃初乳的犊牛血清,也有人称之为小牛血清、犊牛血清等.由于它未受初乳影响,具有丰富的营养物质,抗体、补体中的有害成分最少,因而在生物学领域中得到了广泛应用,特别是在生物制品的生产制造过程中得到了大量应用.     

进境牛血清及相关制品的风险分析及管理模式探讨

生物医药的研发会用到牛血清。由于牛血清及其制品存在携带病毒的风险,因此这些牛血清及其制品应得到有效的管理。本文分析了进境牛血清及其生物制品的危害因子,并提出防范措施,以推动对进境牛血清及其制品的后续监管工作。     

兽用生物制品生产用牛血清质量标准研究——牛血清对Sp2/0细胞增殖试验研究

为制定兽用生物制品生产用牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准,将处于对数生长期的Sp2/0细胞分散,配制成50万/mL细胞悬液,用含10%不同牛血清的MEM营养液,在96孔细胞培养板上作对倍稀释,在5%CO2培养箱37℃培养48 h,计数每种血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率。结果表明,胎牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为20%-26%,犊牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为12%-18%。以胎牛血清作为标准参考血清计算不同牛血清对Sp2/0细胞的相对克隆形成率,3批胎牛血清的相对克隆形成率均在80%以上,6批有效期之内的新生牛血清的相对克隆形成率为50%左右。因此,将兽用生物制品生产用胎牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于80%;新生犊牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于50%。     

不同细胞进行牛血清中牛病毒检测的比较试验

选出最适合牛血清中外源病毒增殖的细胞,用于牛血清中病毒检测,可以提高血清中病毒的检出率,以确保用于疫苗生产的牛血清是安全可靠的。将牛腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒、牛副流感病毒、呼肠孤病毒和狂犬病毒接种到培养好的MDBK细胞、VERO细胞、BT细胞中,逐日观察细胞的病变情况,待观察到10%细胞出现病变或者培养7天后,进行免疫荧光染色,选择出适合用于此六种病毒增殖的细胞系。结果显示BT细胞对所有病毒敏感,vero细胞对BAV、BVDV病毒不敏感,MDBK对REO、BVDV、RV三种病毒不敏感。综合比较后,选择BT细胞为BPIV、BPV、BAV、BVDV的增殖及实验用细胞,vero细胞为REO、RV的增殖及实验用细胞,为了提高血清中病毒的检出率,可以选用多种细胞进行同时实验。     

60Coγ射线辐照的犊牛血清对细胞培养及病毒增殖的影响

现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系。这些技术几乎都是以细胞培养作为载体而发展起来的,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用,更是起到了不可替代的基础性作用。犊牛血清是细胞培养中最重要的培养基,它具有促进细胞增殖和诱导细胞分化等生物学功能,犊牛血清中的外源病毒会影响到生物制品的质量与     

羔羊血清促细胞生长效果的研究

为研究羔羊血清促细胞生长的效果,用羔羊血清以及羔羊与新生牛混合血清来培养VERO、BHK-21细胞,同时培养SP2/0-Ag14细胞并进行计数。结果表明：羔羊血清促细胞生长效应明显低于新生牛血清,但是与牛血清以不同比例混合后,促细胞生长效应有明显的提高,比例在4∶6和5∶5时,促细胞生长能力与牛血清接近。因此,在细胞培养过程中,把羔羊血清和新生牛血清按1∶1混合使用,既可降低成本,又具有良好的促细胞生长效果,使羔羊血清得到了充分利用,并产生一定的经济效益和社会效益。     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

牛血清中牛病毒性腹泻/粘膜病毒抗体检测的初步分析

为了初步分析新生牛血清中牛病毒性腹泻／粘膜病毒抗伴(BVD/MD-Ab)的检出率及其来源,将不同来源的新生牛血清进行分类分组,采用犊牛睾丸细胞微量中和试验法检测该抗体。结果表明,各区该抗体的阳性检出率分别为华北区11．7％、华东区23．4％、西南区29．4％、华南区30．5％、华中区31．3％、中南区42．2％、西北区37．8％,内蒙古地区62．9％,超过50％,且存在数犊牛睾丸细胞病变物质。试验为生产不含BVD/MD-Ab,且无细胞毒性的新生牛血清提供了参考依据和可行的方法。     

部分禽源生物制品外源病毒的检测

进行了部分禽用生物制品外源病毒检测的鸡胚检查法、细胞检查法和鸡检查法。鸡胚检查法应用SPF鸡胚检验;细胞检查法主要通过鸡红细胞吸附试验、禽白血病病毒ELISA和禽网状内皮组织增生症病毒IFA检验疫苗是否含有外源鸡红细胞吸附因子、禽白血病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒,并提出疫苗检验的判定标准,为各兽用生物制品生产企业新城疫疫苗的外源病毒检验提供参考。     

牛血清的研究进展

一、引言1.牛血清的研究进展。随着现代生物技术如基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术等广泛在生物制品的生产、研究中应用,对细胞培养过程中培养基的质量要求越来越高,目前培养基中的主要成分中,动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要的的作用。在动物血清中,牛血清的应用又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材     

牛血清的研究进展

一、引言1.牛血清的研究进展。随着现代生物技术如基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术等广泛在生物制品的生产、研究中应用,对细胞培养过程中培养基的质量要求越来越高,目前培养基中的主要成分中,动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要的的作用。在动物血清中,牛血清的应用又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响

选择促细胞生长性能良好的三批新生牛血清，经不同次数冻融后用其配制MEM培养淹，用于培养SP2／0细胞，从细胞最大增殖量和倍增时间2个指标测定促细胞生长效应。结果，用经不同次数冻融的新生牛血清配制的MEM培养液，对SP2／0细胞的最大增殖量和倍增时间影响不大；但反复冻融20次以上的新生牛血清配制的培养没使细胞的倍增时间延长。由此可见，为了防止细胞倍增时间延长，所用新生牛血清的冻融次数应该控制在20次以内。     

2012～2017年猪瘟活疫苗中牛病毒性腹泻病毒检测情况

为控制本公司猪瘟疫苗中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的污染,采用RT-PCR方法对猪瘟疫苗生产的全过程进行控制。2012～2017年共检测4089头新生牛血清、152批新生牛牛睾丸、1255份猪瘟抗原、114批猪瘟疫苗,BVDV阳性数分别为115、34、78和2份。     

牛血清中非特异性因子对貉传染性肠炎病毒增殖的抑制作用

7例从丹麦进口的成牛血清,5例本地成牛血清、3例初生犊牛血清及1例胎牛血清对貉传染性肠炎病毒核内包涵体形成抑制率(平均值)分别为71.6％、77.1％、5.8％及23.4％,30例从丹麦进口成年牛血清、12例本地成年牛血清、12例初生犊牛血清及1例胎牛血清对REV的红细胞凝集抑制价平均分别为1:72.4、1:68、1:54.6及1:64。在有牛血清存在的情况下,应用组织培养增殖病毒时,REV的红细胞凝集价明显下降。牛血清中的抑制因子对猫胎肾细胞株具有亲和性。该抑制因子不是来自抗REV或者与REV有交叉反应的某种病毒的抗体,而是种非特异性抑制因子。     

赤羽病

本病系由阿卡班病毒引起的牛、绵羊及山羊流产、早产,死胎,新生胎儿发生关节弯曲(AG)和积水性无脑症(HE)为特征的疾病。 最近在地理位置上有三个地区发生,它们是以色列(1969～1970)、 日本(1972～1974)和澳大利亚(1974)。胎儿感染阿卡班病毒之后,发现新生而未吃乳的犊牛血清     

牛血清中蛋白组分初步分析及其对细胞培养的影响

为探讨牛血清中蛋白组分对细胞培养的影响,应用凝胶过滤层析对不同牛血清进行初步组分分析,并应用MTT比色法衡量不同牛血清的促细胞生长作用.结果表明,蛋白组分大小相对较为一致的新生牛血清、商品血清1、2、5(一个波峰)与蛋白组分差异较大的成年牛血清、商品血清3、4(两个或者两个以上波峰)的促细胞生长作用相比较差异显著(P相似文献