不同ELISA和AGID试剂盒检测马传染性贫血病毒抗体的比较

为比较商品化ELISA试剂盒和AGID试剂盒检测马传染性贫血病毒（EIAV）抗体的效果,并评价不同ELISA试剂盒的敏感性、特异性和一致性,将EIAV强阳性血清进行倍比稀释,分别用4种商品化ELISA试剂盒和3种AGID试剂盒进行检测,比较最低检出限;此外,以28份临床马血清作为样品盘,以AGID结果作为标准,通过计算符合率、Kappa值、敏感性、特异性和约登指数,综合评价4种ELISA试剂盒的检测效果。灵敏性结果显示：4种ELISA试剂盒可检出的最大稀释度分别为1:1 024、1:256、1:32和1:128,而3种AGID试剂盒可检出的最大稀释度均为1:16。临床样本检测结果显示：4种ELISA试剂盒与AGID检测结果的符合率均超过89%,其中有3个品牌的ELISA试剂盒一致性较高;4种ELISA试剂盒敏感性为75.00%~100%,特异性为87.50%~100%,约登指数为0.75~1.00。结果表明,ELISA试剂盒的检测灵敏度普遍高于AGID试剂盒,且与AGID试剂盒的检测结果符合率高,是EIAV检测的可靠手段之一,但不同ELISA试剂盒敏感性和特异性存在一定差异,应根据实际情况合理选择使用。本研究为制定科学合理的EIAV检测方案和试剂盒筛选提供了数据支撑。     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

四种牛结节性皮肤病抗体ELISA检测试剂盒的比对

为筛选可靠的牛结节性皮肤病免疫抗体评价方法,以已知牛结节性皮肤病感染牛血清17份、羊痘疫苗免疫牛/羊血清77份和阴性牛血清20份作为样品盘,以病毒中和试验结果作为金标准,通过Kappa一致性和诊断效能评价,分别对市售的4种牛结节性皮肤病/羊痘抗体ELISA检测试剂盒进行分析比对。结果显示:4种ELISA检测试剂盒特异性为87.5%～94.34%,敏感性均不足80%,其中2种试剂盒与病毒中和试验的符合率超过80%,一致性为高度。结果表明,在临床应用中应根据检测目的选用可靠的试剂盒。本研究为科学有效防控牛结节性皮肤病提供了技术支持。     

高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌抗体

为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌（M. bovis）抗体的可行性，对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示，该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品，而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应（TST）阴性牛血清样品等均为阴性；灵敏性试验结果显示，该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核（bTB）强阳性血清参考品；稳定性试验结果显示，该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%；临床样本检测结果显示，该方法与IDEXX M. bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%，具有较高的一致性，且差异不显著。以上结果表明，高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠，可作为TST检疫的补充抗体检测方法，用于bTB的诊断、检疫和净化。     

妊娠相关糖蛋白检测试剂盒在奶牛早期妊娠诊断上的应用

为了研究妊娠相关糖蛋白(PAG)检测试剂盒在人工授精(AI)后28~32 d奶牛早期妊娠诊断上的应用效果,试验采集49头AI后28~32 d奶牛血液样品,分离血清并应用PAG检测试剂盒进行检测;采血当天利用兽用B型超声诊断仪(B超)进行妊娠检查,并于AI后第35天用B超复检。结果表明:AI后28~32 d,PAG检测试剂盒检测奶牛早期妊娠的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为92.0%、95.8%、95.8%、92.0%、93.9%,与B超检测方法结果的一致性(Kappa值)为0.632。说明PAG检测试剂盒可以高效应用于奶牛的早期妊娠诊断中。     

三种ELISA方法与荧光抗体病毒中和试验检测狂犬病抗体的一致性分析

为筛选合适狂犬病抗体检测的试剂盒，该研究以荧光抗体病毒中和试验（fluorescent antibody virus neutralization FAVN）方法为参照，与3个ELISA试剂盒方法进行比对，进行一致性分析，并计算了三种试剂盒的敏感性和特异性。结果显示：三种不同的试剂盒中，试剂盒A与FAVN一致性最好，Kappa值为0.605，有较高的一致性，符合率为86%；试剂盒B次之，Kappa值为0.485，为中度一致，符合率为80%；试剂盒C与FAVN的一致性最差，Kappa值为0.310，符合率也最低，为74%。在敏感性和特异性方面，试剂盒A的敏感性最高，为92.1%，试剂盒B的特异性最高，为72.7%。本研究为临床上科学的筛选试剂盒提供了依据。     

3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

为比较3种抗牛支原体(M.bovis)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测M.bovis血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测.结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%.一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性.此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性.因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查.     

猪瘟病毒5种ELISA抗体检测试剂盒的比较

[目的]比较猪瘟病毒（CSFV）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果。[方法]利用细胞中和试验制备的标准质控血清,制备不同猪瘟抗体效价的阳性血清70份和阴性血清20份,对5种试剂盒的敏感性、特异性和符合率进行比较。利用该5种试剂盒对不同年龄段猪群血清中猪瘟抗体水平进行检测。[结果] 5种试剂盒的敏感性为85.7%-100%,特异性均达到100%,符合率为88.9%-100%。不同年龄段猪血清样品中,5种试剂盒检测结果不尽相同。[结论]猪瘟抗体效价的高低对5种试剂盒检测结果的一致性有一定影响,尤其是针对弱阳性样品时,IDEXX猪瘟抗体试剂盒和荷兰赛迪公司的猪瘟抗体试剂盒检测效果相对较好,为猪瘟免疫检测工作提供了一定依据。     

布鲁菌病cELISA试剂盒检测结果差异性分析

采集新疆地区牛血清90份、羊血清76份,以英国参考实验室APHA竞争性ELISA试剂盒检测结果为确诊标准。应用A、B、C、D 4个不同国产商品化布鲁菌cELISA抗体检测试剂盒对上述样品进行对比检测。结果表明4个试剂盒检测同一批样品结果存有差异,同一厂家试剂盒检测牛、羊血清结果也有差异。C试剂盒无论检测牛或羊血清特异性都最高,敏感性也较好;A试剂盒检测牛或羊血清特异性都最低。4个试剂盒与英国参考实验室cELISA抗体检测试剂盒符合度均较好,敏感性均很高,但特异性参差不齐,最高达100%,最低仅60.53%。结果提示,要重视检测试剂盒特异性指标,降低布病的误判率,减少不必要的经济损失。     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。     

布鲁氏菌病补体结合酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒敏感性和特异性评价

为评价布鲁氏菌病补体结合酶联免疫吸附试验抗体检测试剂盒（ CF-ELISA试剂盒）的敏感性、特异性及与其他试剂盒的符合率,用CF-ELISA试剂盒对布病感染地区牛、羊血清各200份,布病净化地区牛、羊群血清各100份进行抗体检测,同时与其他商品化检测试剂进行了比较。结果表明,感染地区牛、羊血清抗体的McNemar检验结果表明CF-ELISA试剂盒与间接酶联免疫吸附试验（ iELISA）试剂盒和CGS的敏感性和特异性差异均不显著（ P＞0．05）,Kappa一致性检验分析结果表明,CF-ELISA试剂盒与iELISA试剂盒检测结果有高度的符合性。检测净化地区牛、羊群血清抗体产品间的特异性和符合率均为100％。     

一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒

用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。     

三种伪狂犬病病毒gE抗体ELISA检测试剂盒的比较

为比较3种品牌(A、B、C)伪狂犬病病毒(PRV)g E抗体ELISA检测试剂盒的临床使用效果,应用中和试验来标定伪狂犬病非免疫猪场的180份临床血清样品,同时用3种试剂盒进行检测,并对试剂盒的重复性、敏感性、特异性以及与中和试验结果的符合度等指标进行测定与分析。结果显示:3种试剂盒的批内稳定性均较好,变异系数均小于10%;批间重复性差异较大,变异系数最小者为8.09%,最大者高达21.31%;3种试剂盒的诊断特性良好,敏感性为95.56%~97.78%,特异性为94.44%~100%;各试剂盒检测结果与中和试验结果均完全相符(Kappa值为0.91~0.96)。比较结果表明,3种试剂盒均适用于临床样品的PRV g E抗体检测,其中稳定性及敏感性俱佳的试剂盒C更适用于PRV的持续监测、早期发现、引种检疫及净化效果评估,而特异性与准确性最高的试剂盒B更适用于贵重病畜的诊断淘汰。因此,生产实践中应根据诊断目的合理选择最适试剂盒。     

牛口蹄疫病毒VP2结构蛋白抗体间接ELISA方法的建立

为建立牛口蹄疫(FMD)抗体的检测方法,本研究将口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因,通过pPROEXTM HTb表达载体在大肠杆菌DH5α中表达,获得大小为35ku的重组VP2蛋白(rVP2),western blot证实rVP2可与FMDV5种血清型的牛阳性血清发生特异性反应。以纯化复性的rVP2为抗原建立了FMDVrVP2间接ELISA方法。重复性试验证实批内、批间变异系数均小于10%。特异性交叉试验表明,该抗原不与常见的其他7种牛病阳性血清发生交叉反应。检测非免疫无口蹄疫国家牛阴性血清的特异性为100%;检测感染血清敏感性为97.3%;检测O-AsiaⅠ的二价苗免疫牛血清,与4种商品化试剂盒比较,其符合率分别为69.0%、95.0%、90.4%和86.8%。实验结果表明建立的ELISA方法可以用于口蹄疫感染和免疫抗体检测。     

牛结核γ-干扰素检测法和比较皮内变态反应在牛临床检测中应用

我国已启动牛结核病净化计划和评估论证工作。有效诊断是有效实施牛结核病"检疫-扑杀"控制策略的前提。牛结核γ-干扰素检测法是国际公认的确诊方法。本研究进行不同方法的临床比对试验,旨在指导临床有效选择和应用牛结核检测的不同方法。使用牛结核菌素比较皮内变态反应(CCT)与牛结核γ-干扰素检测法对某奶牛场200头奶牛实施平行检测,γ-干扰素检测法同时采用了国产试剂盒(KIT1)与进口试剂盒(KIT2)。结果显示:CCT与KIT2具有中等一致性(Kappa值为0.5),但特异性较差(66.4%),阳性预测值低(54.0%),易出现假阳性结果导致大量的错杀。γ-干扰素检测试剂盒KIT1与KIT2具有较好的一致性(Kappa值为0.9),总符合率95.0%,表明二者均能有效检测牛结核,且国产试剂盒能显著降低检测成本。在控制成本的前提下,建议用皮试先初筛,γ-干扰素检测法确诊阳性牛。     

常见肉类成分荧光PCR检测试剂盒的比较

目前市场上肉类成分检测试剂盒种类繁多。为了评价不同厂家试剂盒的应用效果，选取当前市场上4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒，对其特异性、灵敏性及效率成本进行了分析比较。结果显示：4个品牌的5种肉类成分荧光PCR检测试剂盒特异性均较好，不同肉类之间没有交叉反应；但检测同一种肉类的不同品牌试剂盒及同一品牌检测不同肉类的试剂盒灵敏性存在差异；不同品牌的试剂盒检测时间和成本也有区别，A品牌耗时最短，D品牌价格最高。结果表明，不同品牌试剂盒的灵敏性、检测耗时和检测成本各有特点，使用者可根据使用目的及经费预算选择合适的试剂盒。     

牛副流感3型病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛支原体多重PCR检测方法的建立

为建立检测牛副流感3型病毒(BPIV3)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛支原体(M.bovis)的多重PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的BPIV3的HN基因、IBRV的g C基因、BVDV的5'UTR和M.bovis的oppD/F基因序列设计特异性引物,通过优化反应条件建立了一种可以同时检测以上4种病原的多重PCR方法。结果显示,该方法对牛呼吸道合胞体病毒、小反刍兽疫病毒、牛布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、牛源多杀巴氏杆菌A型和B型无特异性扩增,对BPIV3和BVDV的cDNA最低检测量分别为100 pg和1 ng,对IBRV和M.bovis的DNA最低检测量分别为10 pg和100 pg,具有较高的特异性和灵敏性。对临床33份鼻拭子样品和12份牛肺样品的检测结果与已发表文献中PCR方法的检测结果一致。本研究建立的多重PCR检测方法可同时对BPIV3、IBRV、BVDV和M.bovis进行检测,为这4种病原的诊断和检测提供了一种实用、便捷的方法。     

地方流行性牛白血病间接gp51-ELISA抗体检测试剂盒的研制

利用重组牛白血病病毒gp51蛋白作为包被抗原研制了gp51-ELISA诊断试剂盒.试剂盒主要成分包括抗原gp51包被96孔板、HRP标记的兔抗牛IgG和牛白血病阴性、阳性标准血清.对试剂盒进行了特异性、灵敏度、重复性及保存期试验.结果表明,试剂盒特异性好,灵敏度是AGlDT的4～8倍,批间和批内的变异系数分别小于10%和15%,于一20℃保存至少能保持6个月检测结果稳定.与法国Synbiotics公司同类试剂盒进行比对试验,诊断敏感性、特异性和符合率分别为75%、96.1%和94.6%.对采集于山东济南的164份奶牛血清和进口澳大利亚奶牛的398份血清进行检测,抗体阳性率分别6.10%和4.77%.     

玫瑰花环抑制实验检测肉牛早孕因子(EPF)活性

[目的]为了根据早孕因子活性的检测作为依据来判断肉牛妊娠状态.[方法]本实验采集不同孕期的肉牛的血样,同时进行了妊娠诊断,通过玫瑰花环抑制实验检测活性.[结果]实验表明,未怀孕牛和怀孕牛花环抑制滴度差异显著(P<0.05),不同孕期的早孕因子活性差异不显著.[结论]玫瑰花环抑制滴度高于8可以确认牛怀孕,低于4为未怀孕.     

几种羊棘球蚴病免疫抗体检测试剂盒的对比试验

以标准阴性和阳性血清检验4种市售羊棘球蚴病免疫抗体检测试剂盒的敏感性和特异性。试剂盒1对标准血清的符合率均为100%,试剂盒2对标准阳性和阴性血清的符合率均为85%和50%,试剂盒3对标准阳性和阴性血清的符合率均为20%和100%,试剂盒4对标准阳性和阴性血清的符合率均为100%和90%。结果表明,试剂盒1与4的敏感性和特异性相对较高。