水解酪蛋白对诱导苜蓿愈伤组织的影响

以两个苜蓿品种新牧1号和新疆大叶苜蓿无菌苗的幼叶为外植体，研究了4种诱导培养基对愈伤组织的影响，增殖培养基中添加水解酪蛋白对愈伤组织增殖的影响，以及分化培养基中KT对愈伤组织分化的影响。结果表明：①叶片愈伤组织诱导培养基以MS＋2，4-D2．00mg／I，＋NAA1．00mg／L＋KT1．00mg／L为宜，新牧1号和新握大叶苜蓿的出愈率分别为100％，95．5％；②增殖培养基中附加CH0．15g／L有利于新牧1号愈伤组织的生长，附加CH1．00g／L有利于新疆大叶苜蓿的愈伤组织的生长；③分化培养培养基中附加KT4．00mg／L，两品种的分化率最高分别为新牧1号25．0％、新疆大叶苜蓿13．2％。     

6-BA、NAA对苜蓿不同外植体愈伤组织培养的影响

以新牧1号和新疆大叶两个苜蓿品种为试材,研究了7个培养基对不同无菌苗外植体愈伤组织诱导和生长影响,以及不同浓度的植物生长调节物质6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)对愈伤组织生长及分化的作用.结果表明:(1)浓度在2～8 mg/L,NAA有利于苜蓿愈伤组织的诱导,随浓度的增大呈促进作用,而在1～3 mg/L,1mg/L 6-BA有利于苜蓿愈伤组织的诱导,随浓度的增大呈抑制作用;(2)MS+2,4-D 2 mg/L+NAA 4 mg/L+6-BA 1 mg/L即MS4为新牧1号的较佳诱导培养基,MS+2,4-D 2 mg/L +NAA 8 mg/L +6-BA 1 mg/L即MS5为新疆大叶苜蓿的较佳诱导培养基;(3)以无菌苗下胚轴、子叶及叶片为外植体,确定下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体.     

紫花苜蓿高效遗传转化受体系统的建立

以新疆大叶和新牧一号苜蓿下胚轴和子叶为材料,研究了不同基因型、外植体、培养基及激素配比对其愈伤组织诱导、芽分化和根诱导的影响,建立了适用于这2种苜蓿的再生体系。结果表明,下胚轴是一种较好的外植体材料,其再生能力高于子叶,最高再生率为54.96%;0.2 mg/L KT能辅助2,4-D对愈伤组织的诱导发挥更好的作用;SH培养基相对于MS培养基对愈伤组织的诱导更有效,而MS培养基则有利于愈伤组织的分化;适用于2种苜蓿愈伤组织诱导、分化及生根培养的培养基分别为SH(附加2 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT),MS(附加1.0 mg/LBAP和0.3 mg/L NAA)和不含激素的1/2 MS(扩繁时附加1 mg/L IBA)。     

苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以改良SH为基本培养基,研究了不同激素配比和不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响,筛选出诱导愈伤组织的最佳外植体是下胚轴、最佳培养基为SH+2,4-D 2mg/L+KT 0.2mg/L;继代增殖后对愈伤组织进行分化再生培养,研究了附加不同浓度外源激素的MS和改良SH培养基对愈伤组织分化的影响,确定最佳分化培养基为改良SH+NAA0.1mg/L+KT 0.5mg/L。     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

三个苜蓿品种植株高频再生体系的研究

以适宜于西北地区生长的‘甘农1号’杂花苜蓿、‘甘农3号’紫花苜蓿,‘新疆和田大叶’紫花苜蓿3个品种的不同部位外植体为供试材料,进行了植株体外再生的研究.结果表明,苜蓿基因型、外植体来源、外源激素种类及浓度、激素处理时间、培养基蔗糖浓度等因素均影响细胞的生长发育和植株再生.‘甘农1号’苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和体细胞胚形成率最高,可达97.2%和70.9%,‘新疆和田大叶’苜蓿下胚轴次之,‘甘农3号’出愈率和体细胞胚形成率均最低;苜蓿愈伤组织诱导以2.0mg/L 2,4-D单独处理或2.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT组合处理为最佳,在此激素组合处理下,下胚轴愈伤组织诱导率最高可达97.2%,激素处理时间以20d为宜;体细胞胚的发育则以2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA的激素组合处理为宜,在此激素组合处理下,体细胞胚形成率最高可达70.9%.适宜的生根培养基为1/2MS+1.0mg/L IBA+1%蔗糖+0.7%琼脂.体细胞胚形成阶段培养基添加25~30g/L的蔗糖有利于愈伤组织分化.     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

孜然芹下胚轴胚性愈伤组织的诱导及再生植株的研究

以孜然芹下胚轴为外值体,研究了在不同种类和浓度激素处理下产生愈伤组织,经继代增殖成胚性愈伤组织,在分化培养基上,胚性愈伤组织进一步分化,得到了再生植株.结果表明:下胚轴在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 0.5 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,20 d愈伤诱导率达100;,继代培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L培养基中,增殖率达80;,在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中光照16 h/d培养30 d,可见再生植株,再生率为18.75;.     

樟树胚性愈伤组织诱导与体胚发生研究

以樟树未成熟合子胚为外植体,探讨了外植体取材时间、植物生长调节剂配比、附加有机物等因素对胚性愈伤组织诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的影响。结果表明:不同采集时期的合子胚愈伤组织诱导率差异显著,只有心形胚时期的合子胚才能诱导胚性愈伤组织;在改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA培养基初诱导情况下,后接入改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2,4-D培养基中,胚性愈伤组织诱导率可达77.78%;外加添加200 mg/L水解络蛋白和200 mg/L环糊精可保持胚性愈伤组织增殖和体细胞胚诱导,胚性愈伤组织增殖系数达3.86,每克愈伤组织平均分化116.67个体细胞胚,胚性愈伤组织继代周期以25～30 d为宜。在改良MS+200 mg/L环糊精+1.0 mg/L ABA+0.5 mg/L IAA中可以促使体胚成熟萌发,萌发率可达52.78%。将萌发的芽体转接到MS+0.1 mg/L BA+0.5 mg/L IAA+0.2 g/L AC生根培养可获得完整植株。     

激素、培养基、添加物对苜蓿子叶再生体系建立影响

.00 mg/L AgNO3,可使新疆大叶杂花苜蓿的分化率从41.1; 增加到63.3;.     

不同培养基对苜蓿花药愈伤组织继代和分化的影响

将7种苜蓿品种(品系)(MT-2、MT-146、MT-328、MT-335、新牧1号、新疆大叶和KS220-97)的混合花药接种于N6大量元素+MS微量元素+MS铁盐+B5有机物+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5 mg/L的固液双层培养基上,诱导出愈伤组织,再转接到不同成分及添加物的培养基中培养,观察培养效果.结果表明:①在含MS、SH、N6的大量元素的培养基上的初代培养, MS或SH的效果好于N6,愈伤组织第5～9次继代培养中,N6大量元素培养基的继代培养效果最好.②花药愈伤组织继代培养基中添加AC、LH、PVP-40对愈伤组织的生长和防止褐变有明显作用.③继代培养中期,添加NAA超过0.5 mg/L时易褐化.④在N6大量元素培养基上的愈伤分化、生长表现好于其它培养基,1/2MS大量元素次之.⑤在分化培养的后期不加激素,有利于愈伤组织的生长.     

不同品种紫花苜蓿愈伤组织及分化体系的建立

[目的]建立不同品种紫花苜蓿的愈伤组织及分化体系。[方法]以4个品种的无菌苗子叶为外植体,研究不同的激素浓度及基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导及分化的影响。[结果]4个品种诱导形成的愈伤组织差别不大;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH+2,4-D 2 mg/L+KT 0.05 mg/L;苜蓿王的分化率和出苗率表现较佳;最佳分化培养基为改良SH+KT 0.4 mg/L。[结论]该试验为今后筛选易分化的苜蓿品种和研究"转基因苜蓿疫苗"奠定了基础。     

四个马铃薯品种幼茎段再生技术的研究

以4个马铃薯栽培品种为试材,进行了其茎段的离体再生研究。结果表明,东农303、夏波帝、鄂1 号茎段愈伤组织最佳诱导培养基为MS+6-BA 3．0 mg／L+NAA 0．01 mg／L;费乌瑞它为MS+6-BA 3．0 mg／L+ NAA 0．1mg／L,愈伤组织的诱导率均可达100％。费乌瑞它和鄂1号不定芽分化诱导的最佳培养基均为MS+ 6-BA 2．0 mg／L+NAA 0．2 mg／L;东农303为MS+6-BA 2．0 mg／L+NAA 0．1 mg／L:夏波帝为MS+6-BA 2．0 mg／L+NAA 0．3 mg／L,其不定芽分化率分别达96．7％．96．7％,83．3％和80．0％。各品种不定芽的诱导生根率均为100％,试管苗移栽成活率为95％。     

紫花苜蓿品种'德宝'不同外植体愈伤组织诱导研究

以紫花苜蓿'德宝'的下胚轴、叶片、子叶和叶柄为外植体,研究了不同浓度(1.5、2.0、2.5 mg/L)2,4-D对各外植体愈伤组织诱导的影响.结果表明:4种不同外植体的愈伤组织发生能力存在显著差异,下胚轴的愈伤组织诱导率最高,达98.5％,显著高于叶片(P＜0.05),其他各外植体之间差异不显著.不同浓度2,4-D下各外植体愈伤组织发生也存在显著差异,浓度1.5 mg/L和2.0 mg/L的2,4-D MS培养基对愈伤组织的诱导效果优于浓度2.5 mg/L的2,4-D MS培养基(P＜0.05),且有利于愈伤组织的胚性化.另外,2,4-D浓度在1.5～2.5 mg/L范围内,低浓度利于叶片和子叶愈伤组织发生,二者在1.5mg/L浓度下的愈伤率可达100％,显著高于2.5 mg/L浓度处理,而叶柄和下胚轴的愈伤率在各浓度下差异不显著.     

燕麦成熟胚的组织培养及植株再生

以燕麦成熟胚为外植体,通过对不同基因型、培养基的激素种类和配比、盾片放置方式的研究,探索影响燕麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的因素.结果表明:基因型对燕麦愈伤组织的诱导及分化有显著影响;不同基因型材料诱导愈伤及分化所需激素及其比例不同,‘白燕2号’和‘陇燕3号’的最佳诱导培养基为MS+4mg/L 2,4-D+1mg/L NAA,分化培养基分别为MS+0.4mg/L NAA+0.2mg/L KT+1.0mg/L 6-BA和0.8mg/L NAA+0.8mg/L KT+1.0mg/L 6-BA;‘丹麦444’的最佳诱导培养基为MS+2mg/L 2,4-D,分化培养基为0.2mg/LNAA+0.4mg/L KT;接种时将成熟胚盾片朝下直接接触培养基放置,可获得更高的诱导率;‘陇燕3号’的成熟胚有利于燕麦再生体系的建立.     

甘农2号杂花苜蓿愈伤组织诱导及体细胞胚和芽分化的研究

以甘农2号杂花苜蓿下胚轴为材料,MS为基本培养基,研究了不同浓度的2,4-D、NAA、KT、BA、蔗糖及2,4-D作用时间对甘农2号杂花苜蓿愈伤组织的诱导、体细胞胚和芽分化的影响.结果表明,3 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L NAA为愈伤组织诱导阶段最佳激素组合;2,4-D作用时间以15 d为宜;最佳的芽分化培养基为MS+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+7 g/L琼脂+20 g/L蔗糖.     

卡那霉素对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

[目的]研究紫花苜蓿叶片在诱导愈伤组织阶段、愈伤组织分化阶段对卡那霉素的敏感程度。[方法]确定卡那霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织形成的影响,并在形成愈伤组织的基础上,进一步确定卡那霉素对愈伤组织分化的影响。[结果]不同浓度的卡那霉素对紫花苜蓿叶片诱导愈伤与分化均有一定的抑制作用,而且随浓度升高,抑制作用增强;卡那霉素对愈伤组织分化阶段的敏感程度比诱导愈伤阶段高;分化阶段选择压力要控制在25 mg/L以下;延迟加入卡那霉素或在分化阶段降低卡那霉素浓度是对筛选转化苗的可取办法。[结论]该研究为利用农杆菌介导法转化紫花苜蓿奠定了基础。