马铃薯新品种青薯9号高效再生体系的建立

为了建立马铃薯新品种青薯9号的遗传转化体系,以青薯9号无菌苗为材料,通过对其茎段和叶片再生体系的筛选,优化了培养基添加的最佳植物激素配比浓度.试验结果表明:无菌苗的茎段比较适合诱导愈伤组织并且愈伤组织的诱导需要光照.青薯9号马铃薯茎段外植体愈伤组织诱导的最佳基础培养基为:MS无机成分+蔗糖25 g/L+琼脂6 g/L+肌醇100 mg/L+烟酸2mg/L+盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5 mg/L+盐酸硫胺素(维生素B1)0.4 mg/L+叶酸0.25mg/L+生物素0.05 mg/L.愈伤组织诱导丛生芽分化的最佳基础培养基是:MS培养基+蔗糖25 g/L+琼脂8 g/L+酪蛋白的酶水解物1 g/L.最佳愈伤组织诱导培养基激素配比为:2.0 mg/L NAA +6.0 mg/L 6-BA;最佳分化培养基激素配比为:0.1 mg/L NAA+ 3.0 mg/L 6-BA+ GA3 3.0 mg/L+ ZTR 1.0 mg/L.     

马铃薯地方主栽品种"春薯4号"遗传转化体系的建立

以吉林省马铃薯主栽品种"春薯4号"(Solanum tubberosum cv.Chunshu 4)无菌试管苗为材料,以茎段为外植体,采用L9(33)正交试验设计,研究植物激素对愈伤组织诱导和分化的影响;通过对遗传转化体系中的筛选剂浓度、抗生素种类及浓度等影响因素的优化,初步建立了马铃薯"春薯4号"的遗传转化体系.结果表明:最适合愈伤组织诱导的培养基配方为MS+2.0mg/L6苄氨基嘌呤(6-BA)+0.2 mg/L萘乙酸(NAA)+0.3 mg/L 2,4-二氯苯酚代乙酚(2,4-D),"春薯4号"茎段的愈伤组织诱导率最高,为98.57％,愈伤组织为淡绿色,呈致密的哑铃形;最适合愈伤组织分化的培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L吲哚乙酸(IAA)+1.0 mg/L玉米素(ZT),愈伤组织的分化出苗率最高,为54.1％,幼苗粗壮,畸形苗少;在遗传转化体系中,筛选剂双丙氨膦浓度为6.0 mg/L时,为愈伤组织最适筛选压,为4.5 mg/L时,为再生苗最适筛选压;农杆菌抑菌剂最适组合为500 mg/L头孢霉素+200 mg/L羧苄青霉素.     

双单倍体马铃薯DM再生体系的构建

以双单倍体马铃薯(Solanum tuberosum)DM1-3-516-R44的无菌茎段、叶片作为材料,构建马铃薯离体再生体系。结果表明,茎段愈伤组织适宜的诱导培养基BI为MS+0.5 mg/L IAA+2.5 mg/L 6-BA,叶片愈伤组织适宜的诱导培养基BN为MS+1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,愈伤的平均诱导率均达95%以上,甚至可以全部诱导愈伤形成;愈伤组织分化不定芽适宜的培养基BZ为MS+3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ZT,分化率也达到90%左右。     

马铃薯‘华颂66号’遗传转化体系的建立

为探究马铃薯的最佳遗传转化体系,以紫色马铃薯‘华颂66号’无菌组培苗茎段为外植体,用农杆菌介导法将含有植物沉默载体质粒pBWA(V)KS-miR8019转化马铃薯外植体,测定不同预培养时间、不同激素组合及抗生素对马铃薯愈伤再生转化体系的影响。结果表明：1)茎段预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率最高;2)最适的外植体愈伤组织诱导的培养基配方为：MS干粉式培养基+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,愈伤组织的诱导率为96.7%。最适愈伤组织分化的培养基为：MS干粉式培养基+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA₃;3)植株再生及生根的抗生素最适筛选浓度为75 mg/L的卡那霉素;4)农杆菌抑制剂的最适浓度为300 mg/L的特美汀,且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入。综上,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个影响因素进行试验,初步建立了马铃薯‘华颂66号’的遗传转化体系。     

生长素和细胞分裂素在马铃薯愈伤组织分化中的作用

以晋薯7号马铃薯茎尖、茎段、叶圆片为外植体,通过愈伤组织的诱导和根、不定芽的分化,研究生长素和细胞分裂素不同配比在马铃薯愈伤组织分化中的作用。试验结果表明:6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂有利于茎段愈伤组织的生长,MS+6-BA 2.0 mg/L+ZT 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+GA35.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂有利于茎尖不定芽的分化,MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.5mg/L+GA35.0 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂对叶片根的分化效果较好。     

甘薯再生体系的建立及试管结薯初探

为进一步提高甘薯脱毒快繁与试管薯的生产技术,以豫薯4号种薯催出芽苗的茎段与茎尖为外植体建立甘薯的再生体系,并对试管结薯进行了初步探索.结果表明:愈伤组织诱导最佳培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.8 g/L (pH 5.8);最佳愈伤组织分化培养基为MS+NAA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.8 g/L(pH 5.8);不同品种与不同外植体愈伤诱导的比较中,出愈率与生长状况总体上豫薯4号＞豫薯7号＞遗306＞农大22,叶柄＞叶片＞茎尖＞茎段;试管结薯的试验中有根的膨大现象,但还未得到试管薯.     

马铃薯品种茎段愈伤组织诱导和植株再生的研究

以2个马铃薯品种夏坡蒂和费乌瑞它茎段为外植体,研究了不同植物激素对马铃薯愈伤组织诱导及其不定芽分化的影响.结果表明,夏坡蒂和费乌瑞它的茎段最佳愈伤诱导组织培养基分别为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+GA30.5mg/L和MS+ZT 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA30.5mg/L,愈伤率均可达到100%;夏坡蒂和费乌瑞它的不定芽最佳诱导培养基分别为MS+ZT 2.0 mg/L+NAA0.1mg/L+GA3 5mg/L和MS+6-BA 2.0mg/L+ZT 2.0mg/L+GA3 5mg/L,诱导率分别为52.38%和53.6%.结果为进一步转基因工作中高效植株的再生奠定了一定的基础.     

马铃薯高效遗传转化受体体系的建立

以4个马铃薯(Solanum tuberosum L.)栽培种为材料,对其叶片、茎段和试管薯3种外植体再生体系进行研究,筛选与优化马铃薯遗传转化的受体材料和条件,建立马铃薯高效遗传转化受体体系。结果表明:茎段较叶片愈伤组织形成速度更快、诱导率更高。其中,‘陇薯3号’愈伤组织分化效果最佳,分化率和出苗率分别达100%和175.0%。在添加1.0mg·L~(-1)ZT+1.0mg·L~(-1) IAA+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.2mg·L~(-1) GA的MS培养基中,4个品种的试管薯均可通过直接分化再生系统分化成苗。其中,以‘青薯168’试管薯薯片出苗率最高(110.0%)。验证了试管薯作为转化受体,受基因型的影响小,转化周期短,是马铃薯遗传转化的最佳材料,进一步建立试管薯繁育及再生体系,为马铃薯遗传转化奠定良好的基础。     

马铃薯野生种Solanum pinnatisectum离体再生体系的建立

为给马铃薯野生种的开发利用和遗传转化提供参考,以二倍体马铃薯野生种Solanum pinnatisectum 的茎、叶为材料,进行了离体再生体系的研究.结果表明,叶片和茎段愈伤组织的最适诱导培养基分别为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L和MS+6-BA 2.0 mg/L+ 2,4-D 1.5 mg/L,诱导率分别达97.75%和100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基分别为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA3 2.5 mg/L 和MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+GA3 5.0 mg/L,不定芽分化率分别达75%和100%;生根培养基以MS+NAA 0.3 mg/L效果最好,生根率达100%.     

鲁枣3号茎段不定芽诱导研究

为了建立枣优良新品种鲁枣3号的茎段不定芽再生体系,以其幼嫩茎段为外植体,研究了不同基本培养基和植物生长调节剂对茎段愈伤组织诱导及不定芽再生的影响。结果表明:基本培养基WPM比MS显著提高了愈伤组织诱导率,WPM上的愈伤组织诱导率达100%,但不能诱导愈伤组织产生不定芽。TDZ对不定芽的再生比6-BA更有效,成功诱导愈伤组织获得了14.9%的不定芽再生率,而6-BA未能诱导愈伤组织产生不定芽。鲁枣3号茎段适宜的不定芽再生培养基为:MS+1 mg/L TDZ+0.2 mg/L IBA。