猪精液冷冻技术研究

手握法采集约克种公猪(12月龄)精液,于37℃离心后弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,采用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。通过对不同稀释液及冷冻保护剂进行筛选研究,结果表明,Ⅶ号稀释液优于其他6种稀释液(P<0 05);甘油为较佳的冷冻保护剂(P<0 01),其适宜浓度为2%;干解冻效果优于湿解冻,其适宜温度为40～45℃,解冻后精子活率达0 46～0 52;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间(P<0 01)。     

不同冷冻温度对陶赛特肉羊冻后精子活力的影响

采集2只陶赛特肉羊的精液在不同冷冻温度下制作冻精,研究不同冷冻温度对其精子的冻后活力的影响。结果表明：在-105&#177;5℃--135&#177;5℃的温度下制作的冻精,解冻后的精子活力和精子复苏率非常显著地高于在-75&#177;5℃～-105&#177;5℃的温度下制作的冻精（P〈0．01）;比在其他2种区间的温度冷冻下、解冻后的精子活力也好,差异显著（P〈0．05）。     

猪精液冷冻技术的研究

从稀释液、解冻液、解冻速率方面研究了猪精液冷冻保存的效果。结果表明：在八种稀释液中,用Ⅰ号稀释液制作的冷冻精液解冻后精子活率（33&#177;1．2）％优于其它组（P〈0．05）;Ⅴ号解冻液解冻后精子活率（34&#177;2．4）％极显著高于Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ号解冻液（P〈0．01）,Ⅴ号解冻液解冻后精子存活时间506．6&#177;40．4h,极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号解冻液（P〈0．01）;以27．5℃／s的速率解冻,解冻后精子各项指标均为最高值。     

始冻温度和解冻温度对犬冻后精子活率的影响

本试验以Tris－葡萄糖稀释液为基础稀释液，就冷冻起始温度和解冻温度对犬精子冻后活率的影响进行了研究。试验结果表明：始冻温度为－70℃时冻后精子活率最高，达0．6284&#177;0．0408，明显优于始冻温度为－65℃和－75℃时的冻后精子活率（P〈0．05）；解冻温度为70℃时冻后精子活率最好，达0．6810&#177;0．0324，明显优于60℃和65℃时的冻后精子活率（P〈0．05）。     

德州驴精液冷冻试验

通过离心去除精清后，选用两种冷冻稀释液对德州驴精液进行了冷冻。结果表明，在实验条件相同的情况下，用配方2冷冻稀释液冷冻精液的效果好于配方1，其平衡前活力（0．769＋0．032）高于配方1的平衡前活力（0．737±0．039），但差异不显著（P〉0．05）；但其平衡后活力（0．700±0．038）极显著高于配方1的平衡后活力（0．605±0．040）（P〈O．01）。经过冷冻后，其冻后活力（0．460±0．066）也极显著高于配方1的冻后活力（0．325±0．064）（P〈0．01）。这表明，配方2是冷冻驴精液的较好配方。     

奶牛胚胎体外保存时间和温度对移植受胎率的影响

试验对胚胎在体外保存时间的长短及温度与移植妊娠率的关系进行统计分析，胚胎收集后分别在0-3h,3-6h和6h后冷冻，解冻后移植受胎率分别为46.07%,43.33%,30.56%,0-3h和3-6h冷冻的胚胎，移植受胎率没有明显差异（P〉0。05），6h后的冻胚与6h以前的冻胚移植受胎率差异显著（P〈0．05）。胚胎分别在室温和37℃保存5h后冷冻，解冻后移植受胎率分别为39．74％、42．24％（P〉0．05）。     

稀释液中添加维生素E对和田羊冷冻精液品质的影响

在和田羊精液冷冻稀释液中添加不同浓度的维生素E,比较其对和田羊冷冻精液品质的影响。结果表明：维生素E添加量为1．2mg／mL时精子解冻后活率（43．56％）显著高于对照组（34．14％）和其他各添加组（P〈0．05）;顶体完整率（51．39％）极显著高于对照组（40．12％）和其他各添加组（P〈0．01）。说明在冷冻精液稀释液中添加适当浓度维生素E可以减缓冷冻对精子的伤害,有效提高和田羊冷冻一解冻后精子活率,改善冷冻精液的品质。     

德国牧羊犬精液冷冻保存研究

用手握法采９条德国纯种牧羊犬（２～８岁）精液,在卵黄Ｔｒｉｓ和卵黄－葡萄糖稀释液中添加保护剂甘油和ＤＭＳＯ,液氮熏蒸制作颗粒冻精。结果表明,卵黄－Ｔｒｉｓ稀释液优于卵黄－葡萄糖稀释液。ＤＭＳＯ单独加和与甘油混合加均不利于解冻后精子活率,最佳甘油浓度为４％～６％,始冻温度－１５０℃热平衡温度－１０５℃,入氮温度－１１８℃,保持了正常的冷冻温度曲线,干解冻法解冻后活率高于湿解法（Ｐ〈０．０５）。在最优     

牛冷冻精液稀释液中草药配方的初步研究

通过比较以淫羊藿为主要成分的单方及复方中草药提取液对牛冷冻精液解冻后精子活率、畸形率、顶体完整率及低温保存时间的影响，以期开发牛冷冻精液中式稀释液。将三种不同配方的淫羊藿提取液分别以6．25％、12．5％、25．0％、50．0％的体积分数添加于稀释液中，制作牛颗粒冻精，利用干解冻法（40～42℃）解冻后分别检查精子活率、畸形率和顶体完整率，评定其品质。结果表明：配方三取得了较佳的冷冻效果。其提取液添加12．5％时精子冻后活率平均达到0．56，极显著高于其他各组（P〈0．01）：精子顶体完整率最高达到76．80％。畸形率仅14．61％，低温保存时间长迭138h。配方三最有利于生产牛冷冻精液。     

胚胎因素对奶牛体外受精胚胎解冻孵化影响的试验研究

对胚胎因素影响奶牛体外受精胚胎培养效果进行了研究。结果发现：在胚胎因素中，胚胎类型（冻胚和鲜胚）与胚胎发育阶段对胚胎培养效果没有显著影响（P〉0．05）；冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响显著（P〈0．01）；冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著（P〈0．05），解冻后A级胚胎存活率（80％，128／160）、囊胚孵化率（58．75％，94／160）显著高于B级胚胎存活率（59．38％，95／160）和囊胚孵化率（37．5％，60／160）（P〈0．05）；解冻水浴温度（20℃、30℃）对培养效果有极显著影响（P〈0．01）。     

水牛假阴道的改进及使用效果分析

针对摩拉水牛用欧式和改进型两种不同的假阴道采精效果进行了比较研究。结果表明水牛用欧式和改进型两种不同的假阴道采精其射精量差异极显著（P〈0．01）,精子密度的差异不显著（P〉0．05）,原精液活力的差异显著（P〈0．05）,冻精解冻活力的差异不显著（P〉0．05）,冻精解冻后精子畸形率的差异不显著（P〉0．05）,冻精顶体完整率的差异不显著（P〉0．05）,冻精产量的差异极显著（P〈0．01）;说明改进后的假阴道采精效果良好,能有效提高水牛的精液产量和质量。     

稀释液中添加半胱氨酸对绵羊冷冻精液品质的影响

在绵羊冷冻精液稀释液中添加0mmol／L、2．5mmol／L、5．0mmol／L、7．5mmol／L4个不同梯度的半胱氨酸，通过测定解冻后的精子活率、畸形率、顶体完整率、质膜完整率以及各项酶（SOD、GSH、GSH-PX、CAT和MDA）的活性来确定最适添加量。结果表明，添加5．0mmol／L的半胱氨酸组的精子活率和顶体完整率均极显著高于对照组和其他组（尸〈0．01），而畸形率显著低于对照组和其他试验组（P〈0．05）；各项酶指标中，5．0mmol／L半胱氨酸组SOD和GSH浓度与其余各组间差异不显著（P〉0．05），MDA浓度极显著低于对照组和7．5mmol／L试验组（P〈0．01），CAT和GSH-PX活性极显著或显著高于对照组和其他试验组（P〈0．01，P〈0．05）。说明冷冻稀释液中添加5．0mmol／L的半胱氨酸可有效保护精子免受过氧化物的损害。     

辽宁绒山羊冻精稀释液冷冻保存法

目前，人们习惯把辽宁绒山羊冻精稀释液在配制后放于0℃～4℃条件下保存，以备后用。然而这种保存的方法只能保存冻精稀释液1～2d，且配制需大量时间，受温度影响又大，严重影响配种的工作效率。为了延长稀释液的保存时间、方便冻精生产，笔者进行了将冻精稀释液在-5℃～-20℃、-196℃下进行冷冻保存试验及反复冷冻-解冻试验，现将试验结果简述如下。     

不同稀释液配方对奶牛冷冻精液的影响

采用假阴道法采集成年种公牛精液,经精液品质检查后,合格精液用四种不同冷冻稀释液进行稀释、冷冻、以筛选出适宜的冷冻稀释液和最佳冷冻保护剂.结果表明:Ⅱ号稀释液优于其它3种稀释液(P＜0.05);甘油为最佳冷冻保护剂.优于乙二醇和DMSO冷冻效果(P＜0.05),其最佳浓度为7%,精子冷冻后活率平均可达0.45±0.575,畸形率15.44%,项体完整率57.82%;奶牛细管冻精的解冻效果以75℃水浴,2 S到6 S的解冻时间最佳.     

关于提高波尔山头冷冻颗粒精液活率技术的初探

试验是在同一时期内通过采集波尔山羊精液、反复对照试验的方法，来提高波尔山羊冷冻颗粒精液活率。试验主要是用5种不同稀释液和稀释方法以及平衡时间的长短来影响冷冻后解冻的活率。试验表明：稀释液E的组成和稀释方法都明显优于其他4种，差异显著（P＜0．05）；平衡1小时后滴冻的精子活力和受胎率都高于其他平衡时间。     

不同冷冻曲线对种公牛精液冷冻质量的影响

种公牛精液的冻后活力是评定冷冻精液品质好坏的重要指标之一,也是影响牛人工授精受胎率的重要因素.影响冻精解冻后活力的因素包括种公牛个体差异(鲜精品质、耐冻性)、稀释液(甘油浓度、稀释液成分)、生产工艺(稀释方法、平衡、冷冻方法、冷冻曲线)和解冻方法等.而冷冻速度,即精子通过对细胞产生致死性伤害的0～-60℃温度区的速度,是决定冷冻精液冻后品质好坏的关键所在.     

咖啡因对猪精液冷冻的影响及冷冻－解冻方法的优化

本试验对猪精液冷冻保护液中添加咖啡因的作用进行了研究,并优化冷冻－解冻程序,提高0.5 mL细管猪精液冷冻解冻后的质量。在预先设计稀释液配方的基础上,使咖啡因终浓度为0、0.2、0.4、0.6 mg/mL,选择最佳咖啡因浓度,选出最优组合与传统的TCG稀释液和商业用Androhep〖XC1.TIF〗CryoGuardTM冷冻稀释液进行比较,比较3种不同的冷冻曲线对猪冷冻精液解冻后精子品质的影响,最后对38 ℃下30 s、50 ℃下13 s 2种解冻方法进行比较。结果表明,咖啡因浓度为0.2、0.4 mg/mL的精子冷冻后活力、质膜完整率、顶体完整率显著高于0、0.6 mg/mL（P＜0.05）,最佳添加浓度为0.2 mg/mL;预设计的稀释液配方及冷冻方案优于传统的TCG法（P＜0.05）,但与Androhep〖XC1.TIF〗CryoGuardTM稀释液(美国商业用)有一定差距（P＜0.05）;A曲线在猪精液冷冻－解冻后活力、质膜完整率和顶体完整率方面均显著优于B和C冷冻曲线（P＜0.05）;50 ℃水浴解冻13 s显著优于38 ℃解冻30 s（P＜0.05）。     

猪精液冷冻技术试验

从稀释液和解冻液的筛选，平衡时间、平衡温度、冷冻剂型的选择等方面进行试验。试验结果：猪精液冷冻后活率为３０％－６０％；解冻后的复苏率为５１．４２％－５８．７２％；保存３０天的冻精与保存３６０天的冻精受胎率无明显差异（Ｐ＞０．０１）；冻精保存期一年以上；输精受胎率达６３．６４％（６０％－６６．６６％），平均窝产仔６．１头。     

不同稀释液配方对牛冻精品质的影响

选用3种稀释液配方分别对6头种公牛精液进行稀释、封装、冷冻,并检查种公牛冻精解冻后的精子活力、畸形率、顶体完整率、冻后废弃率、存活时间及镜检感光度.结果表明：3种不同稀释液配方对种公牛精液冻后活力影响差异均显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液生产冻精的畸形率极显著高于Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液（P＜0.01）,3种稀释液冻精精子顶体完整率之间差异均极显著（P＜0.01）,Ⅲ稀释液与Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液间对牛精液所生产冻精的冻后废弃率影响均差异显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液与Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液间对牛精液所生产冻精的存活时间影响差异也显著（P＜0.05）,Ⅲ稀释液生产的冻精精子感光度优于Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液,其余各项指标差异均不显著（P＞0.05）.因此,可用自配Ⅱ稀释液替代进口专用Ⅲ稀释液.     

红景天粗多糖中基分对猪精子冻后生化指标及活力的影响

试验将采自5头杜洛克（2～4岁）猪精液（2次/周）冷冻解冻于含有红景天粗多糖中基分（Middle Components of Rhocliola Polysacchoride,MCRP）的稀释液中,应用计算机辅助精子分析系统对猪精子运动特征进行了评价,其它参数用常规精子评价方法进行评估,分析MCRP对猪精子冻后生化指标及活力的影响。结果表明,MCRP在稀释液中的有效浓度范围为4.0～6.0mg/L,当MCRP浓度为6mg/L时,其各项指标均显著高于其它各组（P〈0.05）,而且冷冻解冻后,MCRP添加于稀释液I的精子质量显著优于MCRP添加到稀释液II的精子质量（P〈0.05）。冷冻解冻液中MCRP的浓度与解冻后解冻液中的谷胱甘肽、精子线粒体活性、精子低渗肿胀系数呈显著正相关（P〈0.05）,而与解冻液中的丙二醛浓度呈显著负相关（r=-0.982,P〈0.05）。猪精液冷冻保护液中添加MCRP能够有效地抵抗由于冷冻产生的活性氧自由基对精子的伤害,从而提高精子冻后质量,但是MCRP抑制活性氧自由基的具体成分仍需要进一步的研究。