杂交玉米品种家佳荣2号种子纯度的InDel分子标记鉴定

为建立一个简捷、经济、准确可靠的室内杂交玉米种子纯度鉴定方法,以玉米杂交种家佳荣2号及其父母本、JR02杂交组合为材料,用InDel(插入-缺失)分子标记技术和田间小区种植鉴定2种方法对家佳荣2号杂交种子进行纯度鉴定。结果显示,InDel分子标记鉴定的纯度为95.6%,田间小区种植鉴定的纯度为97.8%,InDel的结果略低于田间小区种植鉴定的结果。18对InDel引物中能与家佳荣2号双亲基因组稳定结合且具有多态性的引物共有11对,多态性检测率为61%,其中有1对引物带型偏父本,其余10对InDel引物都能与家佳荣2号稳定结合,可用于鉴定家佳荣2号的种子纯度。在10对引物中随机选取2对引物,有1对引物能从家佳荣2号中区分出其相似品种JR02。2种方法鉴定结果高度一致,表明InDel分子标记可作为玉米杂交种室内纯度鉴定的方法。     

利用SSR技术鉴定玉米杂交种“家佳荣2号”的种子纯度

【目的】玉米杂交种子的纯度直接影响农作物的产量、品质和农户的收成,建立一套简单、快速、准确、可靠的纯度鉴定方法十分必要。【方法】本试验以‘家佳荣2号’玉米杂交种及其父母本为材料,采用幼叶CTAB法和碱煮法提取DNA两种方法,利用SSR标记技术从20对玉米纯度鉴定标准SSR引物中筛选应用于‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的引物,同时人为掺入其他品种籽粒以验证特异引物的可靠性。此外,同步采用公认的田间小区种植鉴定法研究‘家佳荣2号’的种子纯度,比较室内和田间种植鉴定的纯度差异。【结果】采用幼叶CTAB法提取得到的DNA比碱煮法效果更好;筛选得到引物phi072k4和bnlg2291k4是‘家佳荣2号’种子纯度鉴定的特异性引物,掺杂验证结果可靠,‘家佳荣2号’室内SSR鉴定纯度为96.4%,田间种植鉴定的纯度为97.5%,2种方法结果高度一致。【结论】幼叶CTAB法提取DNA更适合玉米种子纯度的分子鉴定;SSR方法可用于玉米杂交种纯度的室内快速鉴定。     

甘蓝一代杂种纯度SSR鉴定与田间鉴定的一致性研究

【目的】分析甘蓝杂交种纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间形态学鉴定结果的一致性,寻找一种快速、准确鉴定甘蓝杂交种纯度的方法。【方法】选用SSR分子标记,筛选杂交种具有父母本互补带型的引物,用其鉴定“秦甘50”杂交种的纯度,并与田间常规鉴定结果的一致性进行比较。【结果】300对SSR分子标记引物中,有1对引物SQ1019对“秦甘50”杂交种表现为父母本互补带型;利用引物SQ1019标记鉴定“秦甘50”大田杂交种的纯度为96.3%;“秦甘50”大田杂交种经田间鉴定纯度为96.0%,2种鉴定结果的一致性高达99.7%。【结论】SQ1019是SSR分子标记“秦甘50”杂交种的特异引物,SSR分子标记是一种快速、准确鉴定“秦甘50”杂交种纯度的方法,其结果与田间常规鉴定结果相一致。     

西瓜杂交组合T-1种子纯度鉴定的SSR标记研究

【目的】研究有效的西瓜杂交组合种子纯度的SSR标记鉴定方法,为室内鉴定的实际应用提供理论依据。【方法】以西瓜杂交组合T-1及其亲本自交系P-1、M-13为材料,在子叶展平期采用CTAB法提取DNA,利用优化的西瓜SSR标记方法进行杂交种子的纯度鉴定,并与田间表型鉴定进行比较。【结果】从36对SSR引物中筛选出3对(MCPI-5、MCPI-16、MCPI-17)稳定性强、可重复性好、在杂交种及其母本之间具有多态性的引物。将这3对引物中的MCPI-5和MCPI-16用于267株T-1杂交种群体纯度鉴定,显示种子纯度为97.75%,与田间种植鉴定结果一致。【结论】3对SSR引物MCPI-5、MCPI-16和MCPI-17可用于西瓜杂交组合T-1种子纯度的室内鉴定。     

甘蓝型油菜“甘杂1号”种子纯度的SSR鉴定

【目的】建立有效的鉴定"甘杂1号"种子纯度的SSR分子标记方法,为提高"甘杂1号"大田制种纯度提供分子辅助工具。【方法】以"甘杂1号"杂交种及其母本3131A和父本3116C种子为供试材料,利用SSR分子标记技术鉴定"甘杂1号"种子纯度,从200对引物中筛选出特异性强、稳定性高的SSR引物,并将SSR引物鉴定的"甘杂1号"种子纯度与田间种植鉴定结果进行比较。【结果】在200对SSR引物中,筛选出了2对在杂交种和父母本之间存在显著差异的引物(CB10569和Na12E03),且条带清晰可辨,即杂交种含有父母本的特异互补带型。将这2个引物在120株"甘杂1号"杂交种群体中进行重复验证,发现CB10569和Na12E03 2对引物鉴定出"甘杂1号"的种子纯度分别为82%,79.5%。SSR标记的鉴定结果与田间种植鉴定结果(83%)基本一致。【结论】得到的2对SSR引物CB10569和Na12E03,可用于甘蓝型油菜品种"甘杂1号"种子纯度的鉴定。     

基于SSR分子标记对西瓜杂交种早佳8424纯度的高通量鉴定

【目的】建立西瓜杂交种早佳8424纯度SSR分子标记鉴定体系,满足制种单位种子真实性和纯度的高通量快速准确鉴定的需求。【方法】以早佳8424及其双亲为材料,筛选条带清晰扩增稳定的多态性SSR标记,优化DNA提取和PCR扩增体系,并与传统田间鉴定结果进行比较,验证其准确性。【结果】从72对SSR引物中筛选获得4对在早佳8424上表现为双亲互补带型的引物,分布于第5、第6和第9条染色体上,片段大小约100~300 bp。将扩增片段大小不同的引物组合进行双重或多重PCR扩增,获得4个双重PCR组合。将SSR分子标记WS27+MCPI-05组合对192株种植于温室中的早佳8424杂交种纯度进行鉴定,同田间传统鉴定结果一致。【结论】筛选获得的SSR标记及其组合结合碱裂解法提取DNA可用于早佳8424西瓜杂交种纯度鉴定,效率高,操作简便且可高通量流水作业。     

基于 SSR 分子标记的‘汇丰 2 号’辣椒杂交种子纯度和真实性鉴定

【目的】‘汇丰 2 号’辣椒为杂交一代新品种，具有中早熟、抗病性强、耐储运和品质佳等特性，深受农户和消费者喜爱。为保障种子质量，拟建立一套快速、简便的种子纯度和真实性鉴定方法。【方法】基于辣椒基因组已公开的 SSR 分子标记资源，以‘汇丰 2 号’父、母本为材料，筛选多态明显、条带清晰且扩增稳定的 SSR 标记，对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度鉴定，并结合田间形态鉴定验证分子标记鉴定的准确性。此外，利用筛选出的 SSR 标记对‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种进行真实性鉴定。【结果】筛选出 2 个 SSR 标记 L0143 和 L0622，其多态明显，且条带清晰、扩增稳定。其中，标记L0143 在母本 W2280 中 PCR 扩增条带为 149 bp，在父本 W2102 中的扩增条带为 141 bp；标记 L0622 在母本和父本中的扩增条带分别为 208 bp 和 196 bp。2 个标记单独使用时均可以准确鉴定‘汇丰 2 号’种子纯度，且 2个标记同时使用可以将‘粤红 1 号’、‘汇丰 1 号’、‘汇丰 2 号’和‘汇丰 5 号’4 个品种区分开，即可鉴定它们的真实性。【结论】筛选出的 SSR 分子标记 L0143 和 L0622 能够快速、准确、低成本、有效的对‘汇丰 2 号’杂交种子进行纯度和真实性鉴定，该鉴定方法操作简单，能够替代传统杂交种子纯度和真实性鉴定的方法，具有较高的商业应用前景。     

豫玉22玉米杂交种子纯度的SSR和SNP分子比较鉴定

为研究豫玉22玉米杂交种子的SSR和SNP两种分子标记纯度鉴定方法,为快速有效鉴定玉米种子纯度提供依据。采用SSR荧光标记法和SNP分子标记的KASP技术对豫玉22玉米杂交种子进行基因组DNA提取、引物筛选、基因型分析、纯度鉴定。豫玉22的SSR特异性引物为umc2007y4和bnlg161k8,纯度鉴定结果为97.92%。SNP特异性引物MaSNP64和MaSNP245纯度鉴定结果是98.44%。SSR和SNP分子标记鉴定豫玉22玉米杂交种子纯度的最佳方法,为拓展玉米杂交种纯度鉴定方法具有指导意义。     

蛋白质凝胶电泳法鉴定杂交玉米种子纯度与田间种植鉴定法的相关性研究

采用玉米蛋白凝胶电泳法和田间小区种植鉴定法对30个杂交玉米种子样品进行纯度测定,并对2种方法所得数据进行了回归分析。结果表明,2种方法所得结果达显著相关,相关系数r=0.653 1,线性回归方程为:y=23.93+0.760 8x。证明蛋白质凝胶电泳法鉴定玉米种子纯度是可靠的,且可用电泳纯度推算出田间鉴定纯度。     

应用高分辨率熔解曲线技术分析水稻分子标记基因型

 【目的】验证高分辨熔解曲线（high-resolution melting curve analysis,HRM）技术在水稻分子标记分析中应用的可行性和可靠性,应用该技术对水稻重组自交系（RIL）群体及其亲本进行SSR、InDel和SNP标记基因型分析。【方法】以粳稻品种丽江新团黑谷（LTH）和籼稻品种三黄占2号（SHZ-2）及其衍生的RIL群体为材料,以纯合亲本LTH作为参比基因型,利用HRM技术分析一个G/A转换的SNP标记以及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）难以分辨的一个SSR标记和一个InDel标记的基因型。【结果】通过加入适量的参比DNA,HRM能够分辨2个纯合亲本及其衍生的纯合体和杂合体RI系的分子标记基因型,并且以加入20%模板量的参比DNA对3种基因型的分辨最好。利用该方法对作图群体的部分RI系进行分子标记基因型分析,结果与变性PAGE的分析结果完全吻合。【结论】验证了HRM应用于水稻SSR、InDel以及SNP标记分析的可行性和可靠性。相对于凝胶电泳分析,HRM具有分辨率高、高效、快速、操作简单、安全等优点,是一种在水稻分子标记分析中很有应用前景的技术。     

利用SRAP标记快速检测西瓜杂交种子纯度

【目的】以设施、露地兼用西瓜杂交品种早佳(84-24)及其父本、母本为试验材料,利用SRAP分子标记技术进行DNA指纹图谱构建,筛选出能够快速检测西瓜早佳(84-24)杂交种子纯度的SRAP标记。【方法】选取28对SRAP引物,对供试西瓜品种早佳(84-24)及其父、母本的基因组DNA进行扩增,筛选出扩增多态性好、条带清晰、稳定的SRAP引物作为候选标记,利用100粒杂交种子进行纯度检测准确性验证。【结果】28对供试引物中有22对引物在F1及其父、母本之间扩增出多态性条带,多态性比率为78.6%,其中有1对为父本显示,母本缺失的显性SRAP引物(Me6F/Em2R)。用显性引物(Me6F/Em2R)对100粒西瓜杂交种子进行纯度检测,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度为99.0%,与田间形态学鉴定结果(99.1%)基本一致。【结论】利用SRAP标记(Me6F/Em2R),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以对西瓜杂交种早佳(84-24)的纯度进行快速、准确鉴定。SRAP分子标记技术在西瓜杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。     

葡萄无核性状的SSR新分子标记开发及应用

【目的】开发葡萄无核性状的SSR新分子标记,对葡萄杂种后代进行早期无核性状鉴定,为分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对母本‘红地球’与父本‘森田尼无核’及F₁代杂交群体的133份葡萄材料进行RAD-seq,将测序结果比对到参考基因组上;运用SAMtools软件生成CaSFS软件所需的pileup和glf文件,过滤获得亲本之间的有效SNP集;采用窗口滑动的方法,确定每个窗口的基因型,选择以每15个SNP为一个窗口,每次滑动一个SNP,得到每个个体的基因型并生成bin图;对生成的bin图采用拟测交的方式利用Joinmap软件进行连锁分析,构建‘红地球’与‘森田尼无核’遗传连锁图谱;用WindowQTLCartographer2.0软件进行QTL定位,在定位区间通过Perl程序语言找到符合SSR特征序列的35个SSR分子标记,用Primer premier5.0软件设计35个SSR分子标记引物对,通过HRM技术筛选亲本之间在无核性状上存在差异的SSR分子标记,并在131株F₁代杂交群体及65个葡萄品种的自然群体中检测无核分型正确率、无核检测率、无核保持率。【结果】在‘红地球’与‘森田尼无核’构建的遗传连锁图谱上,将葡萄无核性状定位在chr18号染色体上,定位区间26 835 846-26 960 426,对无核的贡献率为77.9%,LOD阈值为26.3。亲本之间在无核性状上存在差异的SSR分子标记为VvSD10,其在111 bp等位点能对葡萄无核性状进行鉴定,利用分子标记VvSD10上的111 bp等位点通过HRM技术在葡萄F₁代杂交群体及自然群体中进行葡萄无核性状的鉴定。结果表明,分子标记VvSD10在F₁代杂交群体及自然群体中的无核分型正确率分别为97%、94%,其无核检测率均为56%,无核保持率分别为77%、85%。【结论】分子标记VvSD10在遗传群体及自然群体中的无核分型均能提供较高的准确信息,为无核葡萄的分子标记辅助育种奠定了基础。     

浅谈玉米种子纯度鉴定技术

随着科学技术的不断发展,玉米种子纯度鉴定技术由传统的形态鉴定、田间种植鉴定,逐步发展为生化指纹鉴定和分子标记鉴定。文章对玉米种子纯度鉴定的鉴定方法及其应用作了介绍,并分别讨论了各种方法的优缺点。从而使玉米种子纯度鉴定技术变得简便、快速、准确。     

利用ISSR分子标记鉴定苦瓜杂交种纯度

【目的】采用ISSR分子标记对苦瓜杂交一代品种秀玉1号纯度进行鉴定,为生产上提高苦瓜新品种纯度鉴定效率提供参考。【方法】利用ISSR技术和91条引物,对苦瓜品种秀玉1号及其亲本的DNA指纹进行分析。【结果】从91条引物中筛选出两条特征引物ISSR-845和ISSR-891,能同时扩增出F1代及其父母本的多态性条带510 和300 bp。其中,ISSR-845能够区分父本机械性混杂,ISSR-891能够准确区分母本自交系与杂种F1代;经群体验证,该标记与田间鉴定结果高度一致。【结论】ISSR技术具有准确、简便、高效、实用性强等优点,可用于生产上苦瓜种子纯度的快速鉴定。     

小区种植法鉴定杂交玉米种子纯度的问题及建议

<正>玉米是我国主要农作物,为了保证农业用种安全,北京市房山区种子管理站在做好杂交玉米种子净度、水分和发芽率三个室内检测项目基础上,近2年又利用田间小区种植方法鉴定杂交玉米种子纯度,取得很     

基于SNP分子标记的玉米杂交种基因型分析与纯度鉴定

为研究SNP 分子标记鉴定玉米杂交种纯度的方法,选用甘肃省推广的6 份玉米杂交种为试验材料,通过应用SNP 分子标记的KASP 技术鉴定玉米杂交种的基因型和纯度,试验结果为95.83%-98.96%之间,说明SNP 分子标记KASP 技术结果可靠,实现了高效率、高灵活性、简便快捷、低成本的技术优势,可以作为玉米杂交种纯度检测的新方法,并在今后基于SNP 标记的玉米品种分子鉴定中发挥越来越重要的作用,能够有效为我省乡村振兴战略背景下玉米制种品种质量监测技术研究提供技术参考。     

利用SSR分子标记技术鉴定和分析茄子杂种F_1的纯度

【目的】分析、鉴定茄子杂种F1纯度,为提高茄子杂交育种效率提供参考依据。【方法】在育苗期,采用SSR分子标记技术对栽培茄×栽培茄正、反杂交种和野生茄×栽培茄杂交种进行纯度鉴定及亲缘关系分析。【结果】从124对SSR引物中筛选出15对在亲本间存在差异、扩增稳定、条带清晰的引物;从210株杂种F1单株中共鉴定出208株真杂种,杂种纯度为99.0%,鉴定结果与田间性状调查结果一致;栽培茄×栽培茄正、反交组合的F1与亲本的亲缘关系均较近,遗传关系差别微小;野生茄×栽培茄组合的F1与父本的亲缘关系均较远,且表现出偏母本遗传。【结论】SSR分子标记技术能快速、准确鉴定茄子杂交后代的纯度,可作为分子标记辅助育种手段用于指导选择符合茄子育种目标的优良杂交品种选育。     

基于超薄等电聚焦电泳技术的杂交水稻种子纯度鉴定

为评价超薄等电聚焦电泳技术鉴定杂交水稻种子纯度的准确性;分别利用超薄等电聚焦电泳技术和田间小区种植技术鉴定杂交水稻64S×G67F1种子纯度,比较两者的吻合程度。结果表明:用超薄等电聚焦电泳技术鉴定的种子纯度和大田种植鉴定的纯度完全吻合;说明超薄等电聚焦电泳技术鉴定杂交水稻种子纯度结果准确可靠。     

小区种植法鉴定杂交玉米种子纯度的问题及建议

玉米是我国主要农作物,为了保证农业用种安全,北京市房山区种子管理站在做好杂交玉米种子净度、水分和发芽率三个室内检测项目基础上,近2年又利用田间小区种植方法鉴定杂交玉米种子纯度,取得很大突破,在种子质量监管上取得了显著效果。     

分子标记技术在玉米种子纯度鉴定中的应用

玉米种子纯度是关系玉米种植产量和品质的关键因素,分子标记技术是DNA 水平上鉴定玉米杂交种纯度的有效方法,本文通过RFLP、RAPD、AFLP、SSR 和SNP 五种分子标记技术在玉米杂交种纯度鉴定中的应用进行对比分析,希望对玉米种子纯度鉴定研究工作提供参考。