DENND1B蛋白对AP2B1蛋白细胞中表达及分布影响的研究

为探究含DENN结构域蛋白1B (DENND1B)对网格蛋白依赖性内吞接头蛋白复合体(AP-2)的β亚基(AP2B1)的影响,本实验利用si RNA干扰技术以及慢病毒包装过表达系统改变DENND1B蛋白的表达水平,通过荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及激光共聚焦技术研究DENND1B蛋白对AP2B1蛋白的表达以及细胞内定位的影响。结果显示:DENND1B蛋白沉默后能够下调AP2B1蛋白的表达,而过表达DENND1B后能够上调AP2B1蛋白的表达,并且干扰DENND1B蛋白表达后能够显著性地改变AP2B1在细胞内的定位(p0.05),使AP2B1蛋白由核周聚集改变为胞质弥散分布。上述结果表明DENND1B蛋白能够调控AP2B1蛋白的表达以及细胞定位。本实验为研究接头蛋白以及网格蛋白依赖性的质膜内吞途径提供了新的切入点。     

猪乳铁蛋白肽的分子改良及改良肽的生物学活性研究

本研究采用化学合成的方法获得了猪源乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽,旨在通过研究该抗菌肽一级结构与抗菌活性的关系,获得抗菌活性更高的改良肽.微量肉汤稀释法测定的最小抑菌浓度(MIC)及溶血性分析结果表明,猪乳铁蛋白肽LFP-20及其改良肽LF2A、LF-1和LF-3对大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄...     

合成三肽囊素阳性噬菌体模拟七肽的免疫活性初步研究

为探讨三肽囊素(Bursin)模拟七肽的免疫活性及其与Brusin的相关性,本研究根据Bursin阳性噬菌体展示七肽库中筛选得到的氨基酸序列(MTTNLQQ)人工合成该七肽.以ELISA和竞争ELISA检验合成七肽与Bursin在体外的免疫学反应的相关性;比较不同剂量的合成七肽(设定Bursin作为对照)对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗(La sota株)在鸡体诱导的特异性免疫应答的影响.结果显示合成七肽与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)能够特异性结合并且该结合作用可被Bursin阻断;动物试验的结果表明,低剂量(0.09 mg)的合成七肽对疫苗诱导的体液免疫应答的增强作用与Bursin相当,而且高剂量(0.3 mg)的合成七肽对细胞免疫应答具有一定的增强作用.因此,认为七肽序列MTTNLQQ具有与Bursin类似的免疫活性.     

牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿亚基不同组合融合抗原对BALB/c小鼠免疫保护性实验

为评价牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿亚基不同组合融合蛋白AP1-AP2、 AP1-BP、 BP-AP2、AP1-BP-AP2对BALB/c小鼠的免疫保护性,本研究取各融合蛋白与同体积的弗氏佐剂进行乳化,分别制备融合抗原免疫制剂,4种免疫制剂均以50μg/只对小鼠进行4次免疫后均产生了较高滴度的抗体,其中AP1-BP-AP2融合抗原产生的抗体滴度水平最高,可达1∶25 600。在免疫后第50 d时利用104 cfu/mL乳腺炎无乳链球菌攻毒,每天观察记录小鼠的精神状态、食量变化等生理状态。攻毒试验结果显示,4种不同融合抗原均显示不同程度的免疫保护性,其中AP1-BP-AP2融合抗原对BALB/c小鼠的免疫保护性为最佳,其免疫保护指数PI达到80%。本研究首次创新性地开展牛乳腺炎无乳链球菌Ia亚型PI-2a菌毛岛屿AP1、AP2、BP亚单位不同组合抗原对BALB/c小鼠的免疫保护试验,获得了AP1-BP-AP2融合抗原的免疫保护效果为最佳的结论,为进一步开发无乳链球菌性乳腺炎防控的亚单位疫苗及其流行病学检测试剂盒提供了实验依据。     

牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛辅助蛋白AP1、AP2主要抗原域串联表达及其免疫活性鉴定

利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。     

利用体外发酵法研究蜜蜂肽对瘤胃发酵参数及甲烷气体排放量的影响

本研究旨在通过体外发酵试验研究蜜蜂肽对瘤胃发酵参数及甲烷气体排放量的影响。本试验选用健康、体重[(40±3)kg]相近的高山美利奴羊(n=4)作为瘤胃液供体。试验采用单因子试验设计,共3个处理,在每千克干物质基础上,分别添加0、0.75、1.50 mg的蜜蜂肽,每个处理7个重复。发酵24 h后,冰水终止发酵,收集产气和发酵液,测定瘤胃发酵液pH,确定蜜蜂肽对发酵液气体产量、挥发性脂肪酸浓度以及部分微生物数量的影响。结果表明:体外发酵24 h,与不添加蜜蜂肽相比,添加0.75 mg蜜蜂肽能显著提高瘤胃内乙酸比例和乙酸/丙酸(P<0.05),显著降低丙酸比例(P<0.05),显著提高甲烷产量(P<0.05),有提高瘤胃pH(P=0.080)和普雷沃氏菌数量(P=0.078)的趋势。综上所述,在体外发酵24 h条件下,蜜蜂肽对绵羊瘤胃发酵有一定影响,能够调节绵羊瘤胃发酵模式。     

AP2M1在狂犬病病毒侵入中的作用研究

本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等方法分析AP2M1对RABV感染率的影响。结果显示:敲低AP2M1,RABV感染率显著下降;过表达AP2M1,RABV感染率上升。酸绕过实验显示AP2M1在RABV感染过程中发挥作用。激光共聚焦观察显示RABV G蛋白与AP2M1无共定位。免疫共沉淀实验显示AP2M1与RABV G蛋白无直接相互作用。本研究结果表明,AP2M1基因在RABV感染过程中发挥作用,但不是通过与RABV G蛋白的直接作用影响病毒的感染。本研究为阐明AP2M1在RABV生命周期中具体作用奠定了基础。     

穿心莲内酯对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌关键耐药蛋白PBP2a的抑制作用

本试验旨在为探究穿心莲内酯(andrographolide, AP)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)关键耐药蛋白青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a, PBP2a)的抑制作用。采用实时荧光定量PCR检测AP对PBP2a编码基因mecA的转录影响,通过在线软件SWISS-MODEL等对蛋白质结构进行分析,经PyMOL以及AutoDock Tools软件进行分子对接来探究AP与PBP2a结合的可能机制,运用动力学模拟来验证AP与PBP2a蛋白结合的可靠性,进一步原核表达PBP2a并制备其多克隆抗体,通过蛋白质免疫印迹检测AP作用下MRSA中PBP2a蛋白含量的变化。结果显示：64μg/mL的AP即可显著下调mecA的转录水平,AP与PBP2a蛋白的GLU170、GLU239和THR238之间可以形成稳定的氢键作用力;成功表达并纯化获得38 kDa的PBP2a蛋白转肽酶区,且制备出的多克隆抗体可以与PBP2a蛋白特异性结合;随着AP浓度的升高,PBP2a的表...     

追踪世界蜂业研究热点--中国农科院蜜蜂所归国博士石巍访谈录

石巍 ,女 ,1984年毕业于福建农学院养蜂系 ,同年分配到中国农科院蜜蜂研究所从事蜜蜂遗传和育种研究工作。“八五”农业部重点课题主持人之一。 1996年参加由联合国农业发展基金项目“经济昆虫的保护和利用” ,负责东非蜜蜂生物多样性的研究 ,同年 ,获得国际昆虫生理与生态中心和瑞典农业科学大学的全额奖学金 ,成为双方共同培养的博士生。 2 0 0 1年获得博士学位 ,同年怀着一颗赤子之心 ,回到国内 ,继续在中国农业科学院蜜蜂研究所从事蜜蜂研究工作。记者 :目前国际上的研究热点是什么 ,这些研究将对蜂业或对整个人类生活产生怎样的影响 ?…     

蜜蜂所在神经肽调控蜜蜂行为研究中取得新进展

<正>我所"蜜蜂蛋白质组学创新团队"开展了蜜蜂大脑神经肽组学研究,并首次阐明了神经肽对蜜蜂社会行为和产浆行为的调控机制,研究结果发表在蛋白质组学研究重要学术期刊《Journal of Proteome Research》上。神经肽是一类具有生物活性的多肽类物质,在调控神经元信号传递、神经回路和生理功能中发挥极其重要的作用。该研究通过对工蜂4个关键时期(刚出房、7日龄、哺育蜂、采集蜂)大脑神经肽的分析,在所鉴     

不同酿酒酵母体外模拟胃肠道内环境适应性研究

本研究旨在考察不同酿酒酵母菌株在体外模拟胃肠道内环境的适应性,为饲用酿酒酵母的科学使用提供理论依据。试验选择4株酿酒酵母菌株Sc1、Sc2、Sc3、Sc4分别开展:(1)37℃生长试验;(2)酸性酵母膏胨葡萄糖(YPD)肉汤中适应性生长试验;(3)人工胃液耐受性试验;(4)人工肠液耐受性试验。结果显示:Sc2在37℃具有较好的生长适应性,Sc4能够达到最大活菌数;pH3.0和pH4.0的YPD肉汤中4株酿酒酵母都能正常增殖,酿酒酵母Sc2、Sc3、Sc4酸耐受性优于Sc1;各菌株的商品化活性干酵母在人工胃液和人工肠液中2h存活率均高于50%,4h存活率高于45%,Sc4在模拟人工胃液中的耐受性最好,Sc3在模拟人工肠液中的耐受性最好。综上所述,不同酿酒酵母在体外模拟胃肠道内环境的适应性不同,酿酒酵母Sc2、Sc3、Sc4比酿酒酵母Sc1具有更好的胃肠道环境耐受性。     

Preparation of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA and Its Evaluation as Probiotic

The composition of colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was optimized to obtain the stable long-term storage agent,at the same time,the evaluation of this strain as a probiotic strain was conducted in this paper. The effects of different stabilizers,pH,NaCl and preservative concentrations on the preservation characteristics of this strain were studied. And spore yield,heat resistance,antibiotic sensitivity,artificial gastrointestinal tolerance,bile salt tolerance and other biological characteristics of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA as a probiotic strain were evaluated. The results showed that the colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was composed of 4% NaCl,0.1‰ calcium citrate,0.1‰ sodium diacetate,0.1‰ potassium sorbate and 2.0‰ xanthan gum with pH 7.Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could inhibit the growth of Salmonella, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. It had good tolerance to artificial gastric and intestinal juice, 0.3% pig bile salt, high spore production rate and strong heat resistance,and it could be used in conjunction with streptomycin and ampicillin. Therefore,Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could be used as a probiotic strain in livestock production.     

动物益生菌短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA制剂的制备及其益生特性评价

为优化短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂配方,获得性状稳定可长期贮存的菌剂,同时对其作为益生菌进行益生特性评价,本试验研究了不同稳定剂、pH、NaCl及防腐剂浓度对短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA发酵液保存特性的影响,并对其产芽孢率、耐热性、抗生素敏感性、人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性等生物学特性进行评估。结果显示,添加4% NaCl、0.1‰柠檬酸钙、0.1‰双乙酸钠、0.1‰山梨酸钾、2.0‰黄原胶,调节pH为7,可作为短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂保存的参考条件。短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA能够抑制沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种动物肠道病原菌的生长,具有产孢率高、耐热、耐酸、耐胆盐的特点,可与链霉素、氨苄西林同时使用,益生效果良好。因此,短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA可作为益生菌菌株应用于畜牧生产。     

Ruminal phytate degradation of maize grain and rapeseed meal in vitro and as affected by phytate content in donor animal diets and inorganic phosphorus in the buffer

The ruminal disappearance of phytate phosphorus (InsP₆‐P) from maize grain and rapeseed meal (RSM) was determined in two in vitro studies. In experiment 1, two diets differing in phosphorus (P) and InsP₆‐P concentration were fed to the donor animals of rumen fluid (diet HP: 0.49% P in dry matter, diet LP: 0.29% P). Maize grain and RSM were incubated in a rumen fluid/saliva mixture for 3, 6, 12 and 24 h. In experiment 2, a diet similar to diet HP was fed, and the rumen fluid was mixed with artificial saliva containing 120 mg inorganic P/l (Pi) or no inorganic P (P0). Maize grain and RSM were incubated with either buffer for 3, 6, 12 and 24 h. Total P (tP) and InsP₆ concentration were analysed in the fermenter fluids and feed residues. The disappearance of InsP₆‐P from maize was completed after 12 h of incubation in both experiments. From RSM, 93% (diet LP) and 99% (diet HP) of the InsP₆‐P in experiment 1 and 80% (Pi) and 89% (P0) in experiment 2 had disappeared after 24 h of incubation. InsP₆‐P disappearance was higher when diet HP was fed (maize: 3 and 6 h; RSM: 6 and 24 h of incubation) and when rumen fluid was mixed with buffer P0 (maize: 6 h; RSM: 12 and 24 h of incubation). InsP₆‐P concentration in the fermenter fluids was higher for maize, but no accumulation of InsP₆‐P occurred, indicating a prompt degradation of soluble InsP₆. These results confirmed the capability of rumen micro‐organisms to efficiently degrade InsP₆. However, differences between the feedstuffs and diet composition as well as the presence of inorganic P in the in vitro system influenced the degradation process. Further studies are required to understand how these factors affect InsP₆ degradation and their respective relevance in vivo.     

接种不同的瘤胃液与缓冲液比例对短期人工瘤胃发酵产气量及pH值的影响

应用短期人工瘤胃发酵技术,通过接种不同数量的瘤胃液,确定瘤胃液数量(微生物数量)对人工瘤胃发酵产气量及pH值的影响。试验分为10个处理,即缓冲液与瘤胃液体积比分别为11∶、21∶、31∶、41∶、51∶、61∶、71∶、81∶、91∶和101∶。每个处理设置2个重复,同时每个处理设置2个空白。将样品发酵48h,分别在2、4、8、12、24、48h6个时间点记录注射器活塞的位置,并在发酵结束时测定发酵液的pH值。结果表明:不同处理组2h和4h的产气量与瘤胃液比例极相关(P<0.01),8h和12h的产气量与瘤胃液比例显著相关(P<0.05),24h以后(包括24h)的产气量与瘤胃液比例不相关(P>0.05)。瘤胃液比例对人工瘤胃发酵的pH值没有影响。     

6株芽孢杆菌的生物学特性比较研究

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。     

冠斑犀鸟的半人工孵化及全人工育雏试验

为掌握冠斑犀鸟的人工孵化和育雏技术,了解冠斑犀鸟雏鸟的生长情况,2007年6月4日对一个处于封巢期的冠斑犀鸟巢箱进行了掏窝取卵,取出仅有的一枚处于孵化中期(照卵比照)的冠斑犀鸟卵进行人工孵化(蛋壳乳白色,蛋重30.1g,外径48.52mm×35.70mm)。孵化温度为37.8～38℃,湿度为40%～50%。入孵后9d顺利出雏,推算其孵化期约(21±2)d。雏鸟重26.0g,属晚成鸟。眼睛从9日龄起张开一条缝隙至16日龄完全睁开;卵齿没有脱落而是与喙融合生长至22日龄消失;羽毛从4日龄开始生长至33日龄全身羽毛长齐。雏鸟从出雏到飞行共哺育了42d,哺育期的体重峰值为616.0g,出飞前体重回落到590.0g,出飞体重减重率为4.22%。除体重外其他各项指标与自然哺育的生长一致,体重增长可以用Logistic方程很好地拟合。测量结果显示全人工育雏的幼鸟出飞重是亲鸟哺育的168.6%倍,反映了人工育雏体重增长过快,虽然出飞时间没有推后但飞行质量受到了体重过重的影响。     

Treatment of Bovine Ketosis with Invert Sugar,Glucocorticoids, and Propylene Glycol

Four different treatments of bovine ketosis, using 3 different pharmaceutical preparations, were monitored. The main antiketogenic and glucogenic ingredients of the preparations were as follows: invert sugar (Metabol), prednisolone and dexamethasone (Predasen), the former preparations combined (Metabol & Predasen) and propylene glycol and dexamethasone (Dexaprol). Blood samples were drained from the ketotic cows prior to the treatment. The animals were sampled again 2 and 7 days after the first sampling. The whole blood concentrations of acetoacetate (AA concn), β-hydroxybutyrate (BHB concn) and glucose (glue concn) were determined. The measures of the antiketogenic and glucogenic efficacy of the various treatments applied were their ability to reduce the AA concn and BHB concn and to elevate the gluc concn.Invert sugar (Metabol) alone had no antiketogenic efficacy, although in some cases it led to a subjective clinical improvement as reported by the owners of the animals. Invert sugar and glucocorticoids (Metabol & Predasen) dexamethasone and prednisolone (Predasen) and dexamethason plus propylene glycol (Dexaprol) were equally effective in bringing the AA, BHB and glue concns to normal range. The mean glue concn of the cows treated with Dexaprol was higher than that of the cows in the other treatment groups at 2 days (P < 0.01). No other differences between the 3 antiketogenic treatments could be shown.     

羊人工授精三级网点的建立

由精液供应站，精液转运站和输精点组成的羊人工授精三级网点，能更充分地利用优良种公羊精液，扩大配种范围，加速羊群改良。本文对三级站点的任务要求及应配备的设施和人员作出具体的论述。     

浙江现行蚕品种对小蚕人工饲料适应性的比较试验

用山东省蚕业研究所研制的粉状人工饲料,对我省现行推广的6对家蚕品种和2个雄蚕品种进行1-2龄人工饲料育的适应性比较试验。结果表明：各蚕品种喂饲人工饲料24 h后,疏毛率达95%以上的蚕品种有华东x春晨（99.80%）、菁松x皓月（98.69%）、明丰x春玉（96.15%）、秋丰x白玉（96.04%）、春华x秋实（95.45%）和华菁x平72（95.41%）;从各品种的生长情况和茧质来看,1-2龄人工饲料育的除全龄经过延长两天左右外,其虫蛹率、万蚕产茧量、全茧量、茧层量和茧层率均与全龄桑叶育基本接近。