绿僵菌对暗黑金龟蛴螬的室内致病力测定

从黄褐金龟虫尸分离的绿僵菌菌株（ＲＡＷ８），经室内试验，结果对暗黑金龟幼龄蛴螬致病力强，在每克含孢量２０×１０６～２．５×１０６的土中饲养，致病率均达１００％，孢子浓度降低，致病时间延长，死亡率也减少     

绿僵菌CQMa128乳粉剂对蛴螬时间-剂量-死亡率模型分析

用拌土法测定了金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株CQMa128乳粉剂对蛴螬3龄幼虫的毒力。结果表明：土壤含有1×106~1×108孢子/g绿僵菌乳粉剂时,蛴螬的校正死亡率随着绿僵菌孢子浓度的增加和作用时间的延长而增大,土壤含有5×107孢子/g绿僵菌乳粉剂时蛴螬的校正死亡率达85.2%。运用时间-剂量-死亡率模型对生测数据进行拟合,通过Hos-mer-Lemeshow拟合异质性检验,并估计了该制剂对蛴螬的致死剂量与致死时间。随着接种天数的增加,相应的LD50和LD90随之降低,剂量效应逐渐增强。土壤中含有3×107、5×107和1×108孢子/g绿僵菌乳粉剂处理的LT50值分别为10.18、8.42、6.79d。当土壤含有1×108孢子/g绿僵菌乳粉剂时,蛴螬死亡率可达90%以上,LT90为10.50d。该绿僵菌制剂在蛴螬的生物防治中具较强的应用潜力。     

花生播种期施用绿僵茵防治蛴螬的研究

本文研究金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopliaeM202．1菌株对花生蛴螬的防治效果。室内生物测定表明,在含有绿僵菌5×10^6、10×10^6和20~10。孢子．g^-1土壤中,暗黑鳃金龟Holotrichiaparallela幼虫死亡率分别为22．4％、41,1％和74．4％,高浓度下LT50为11．9d。盆栽试验中,在播种花生时进行土壤施菌。施药处理,并在花生开花时进行接虫对比处理,结果显示：对照土壤中接虫处理的蛴螬为害可造成花生好果数减少29．2％,果重减轻26．1％,虫果增加率达28．1％;土壤施菌后接虫条件下虫果增加率为20．7％,比对照减少7．4％;但不论接虫与否,花生好果数及果重与对照土壤不接虫处理的差异均不显著;辛硫磷处理对蛴螬有较好的直接控制作用,但使花生结荚数减少;1／2剂量绿僵菌加1／2剂量辛硫磷混合处理不能很好控制虫害。田间试验显示,播种时绿僵菌能有效控制蛴螬为害,收获期花生的好果数和果重都提高40％左右,显著高于对照,虫果率降低10．9％;绿僵菌的防治效果显著高于辛硫磷。     

小菜蛾高致病力绿僵菌的筛选、鉴定及培养特性研究

为开发蔬菜害虫小菜蛾Plutella xylostella的高致病力真菌生物农药,以3龄小菜蛾幼虫为供试虫源,测定了25株虫生真菌菌株对小菜蛾的致病力,从中筛选出1株对小菜蛾幼虫有较高致病力的菌株CQM125。生测结果显示,在20℃、1.0×108孢子mL 1菌株CQM125菌液处理小菜蛾幼虫的LT50为3.97 d;25℃、5.0×107孢子mL 1菌液的LT50为2.44 d;在25℃下,第7 d的LC50为2.31×104孢子mL 1;接种处理后,20℃、8 d的小菜蛾死亡率为84.22%,对小菜蛾表现出良好的控制效果。依据菌株的形态特征、培养性状和rDNA ITS序列分析将菌株CQM125鉴定为金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae。对该菌株的培养基和培养条件进行了优化,优化后的产孢培养基为PPDA,其中葡萄糖2%,蛋白胨0.5%;最适产孢温度30℃,最适产孢pH值为6.0;最适光照条件为前6 d黑暗,后8 d光照。     

金龟子绿僵菌KMa0107菌株对三种玛绢金龟幼虫的致病力

室内测定了金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae菌株KMa0107对玛绢金龟属3种金龟子幼虫的致病力。结果表明,KMa0107菌株对玛绢金龟Maladerasp.、阔胫玛绢金龟M.verticalis和小阔胫玛绢金龟M.ovatula幼虫均具有较强的毒力。接种后,玛绢金龟、阔胫玛绢金龟、小阔胫玛绢金龟3种幼虫的毒力方程分别为Y=0.39X＋2.93（R2=0.97）、Y=0.41X＋2.33（R2=0.85）和Y=0.46X＋2.56（R2=0.97）。接种后3-9d,KMa0107菌株对玛绢金龟、阔胫玛绢金龟、小阔胫玛绢金龟幼虫的致死剂量对数值分别为9.09±0.3~5.26±0.18、9.04±0.29~4.67±0.21和7.35±0.18~4.7±0.17。在菌株KMa0107孢子悬浮液1.65×108~1.65×105孢子/ml浓度下,玛绢金龟、阔胫玛绢金龟和小阔胫码绢金龟幼虫LT50的估计值范围为3.4-6.2d、3.3-5.6d和2.7-4.7d。3种玛绢金龟幼虫接种绿僵菌孢子悬浮液后,随着病原菌的侵染,虫体血淋巴中蛋白质含量也随之发生变化。接种后4d,3种玛绢金龟幼虫血淋巴中蛋白质含量均明显下降。接种后2-6d,3种金龟幼虫血淋巴蛋白质含量减退率间差异显著,其中小阔胫玛绢金龟和阔胫玛绢金龟血淋巴蛋白质含量减退率明显高于玛绢金龟。     

不同菌株绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾幼虫致病力及林间防治试验

刚竹毒蛾(Pantana phyllostachysae Chao)是福建省毛竹林的一种主要害虫,本研究应用5种金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)菌株和1种白僵菌(Beauveria bassiana)菌株,对3龄初幼虫进行感染力测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株。结果表明:应用1.45×10 7孢子/mL孢悬液感染12 d后,3龄初幼虫的校正死亡率均达到63.16%以上;其中MaFzzL-01和Ma1291-2两个绿僵菌株对该幼虫的致病力分别为90.93%和84.21%,其LT50值分别为5.97 d和6.67 d,LC50值分别为1.727×10 4孢子/mL和2.029×10 4孢子/mL。结果说明:绿僵菌MaFzzL-01和Ma1291-2两个菌株对该幼虫的致病力强,且致死速度快。应用1.45×10 8孢子/mL孢悬液进行林间防治可以取得良好效果。     

感染星天牛幼虫高致病力金龟子绿僵菌菌株的筛选

室内测定了6株金龟子绿僵菌菌株的菌落生长速率、产孢量及其对星天牛幼虫的致病力。结果表明：不同菌株生长速率和产孢量存在显著差异,在PPDA培养基上,菌株MaYTTR04和MaZPTR01的菌落生长较快,培养15 d后,菌落直径分别为6.3 cm和5.9 cm;产孢量以菌株MaYTTR04最大,MaZPTR01其次,分别为2.0×10^8孢子·cm^-2和1.1×10^8孢子·cm^-2,显著高于其他菌株。生物测定结果表明,不同绿僵菌菌株对星天牛幼虫的致病力差异显著,接种20 d后,星天牛幼虫累积死亡率在40%～96.7%之间;菌株MaZPTR01和MaYTTR04对星天牛幼虫致死率分别达到96.7%和93.3%;僵虫率也高,分别达到86.7%和80%;致死中时（LT50）短,分别为5.71 d和5.80 d。研究结果表明,菌株MaZPTR01和MaYTTR04对星天牛幼虫致病力较强,同时具备良好的生产性能,故可作为优良菌株用于星天牛的防治。     

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株对铜绿丽金龟和 黄褐丽金龟幼虫生长发育及取食的影响

研究了苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis HBF-1菌株对10日龄铜绿丽金龟Anomala corpulenta和黄褐丽金龟A.exoleta幼虫存活率、拒食、抑制生长及取食选择性的影响。结果表明,随着感染剂量的增大和感染时间的延长,两种金龟子幼虫的存活率均下降,对铜绿丽金龟幼虫的拒食作用和生长抑制作用增强,使该幼虫对饲料的选择性增强。感染7 d时,对黄褐丽金龟幼虫的LC50值为64.16 μg/g,14 d时下降到13.98 μg/g,对铜绿丽金龟幼虫的LC50值则由79.69下降到19.14 μg/g。当菌剂浓度为10 μg/g、感染7 d时,HBF-1菌株对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为4.74%和9.84%,14 d时分别为30.75%和73.87%;当菌剂浓度达到160 μg/g、感染7 d时,对铜绿丽金龟幼虫的拒食率和生长抑制率分别为39.01%和83.61%,14 d时分别为86.10%和97.75%。可见高浓度菌剂对铜绿丽金龟幼虫有一定的拒食作用。     

苏云金芽孢杆菌HBF-1菌株防治金龟科幼虫的效果评价

以我国筛选出的对金龟科幼虫具有杀虫活性的HBF-1菌株为供试菌株，采用菌悬液与含有土豆丝的土壤混合饲喂幼虫的方法，测定了HBF-1菌株孢晶粉剂对华北地区主要金龟子幼虫的毒力，其敏感性依次为四纹丽金龟Popillia quadriguttata、黄褐丽金龟Anomala exoleta、蒙古丽全龟A．mongolica、铜绿丽金龟A．corpulenta和苹毛丽金龟Proagopertha lucidula，LC50为3．104、18．987、30．924、34．713和55．995μg／s土。HBF-1菌株悬浮剂防治花生田金龟子幼虫的田间小区试验结果表明，50倍液的虫口减退率为71．4％～75．4％，保果效果为58．7％～72．9％。在花生产量比较试验中，HBF-1菌株悬浮剂50倍液处理区比空白对照区的产量增加363．0—903．0kg／hm^2。HBF-1菌株悬浮剂施入草坪后可免受阳光中紫外线的照射，杀虫活性保持较长时间；经调查，HBF-1制剂在土壤中经过120天后仍保持杀虫活性。     

对华北大黑鳃金龟幼虫高毒力绿僵菌菌株的筛选及分子鉴定

绿僵菌Metarhizium anisopliae是一类对多种害虫具有高活性的病原真菌。本研究以华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita 1龄幼虫为对象,从4株绿僵菌中筛选出1株毒力较高的菌株,命名为M7-9。采用浸渍法对华北大黑鳃金龟1龄幼虫进行毒力测定,结果表明,绿僵菌M7-9的致死率为96.67%,僵虫率为96.67%,致死中时为2.82 d;致死中浓度为1.29×106孢子/m L;绿僵菌M7-9 ITS序列分子鉴定表明该株绿僵菌为金龟子绿僵菌。     

金龟子绿僵菌CQMa128新制剂对花生蛴螬的田间防控效果

为明确金龟子绿僵菌CQMa128微粒剂和乳粉剂对花生蛴螬的田间防治效果,设计随机区组小区试验,采用绿僵菌微粒剂在花生播种期防治上一年的3龄蛴螬老熟幼虫;采用绿僵菌乳粉剂在花生幼果期防治当年的1～2龄蛴螬.同期调查绿僵菌新制剂的施用对蛴螬主要天敌臀钩土蜂的影响.金龟子绿僵菌CQMa128微粒剂(最适剂量375 kg/hm2)施药后30～40 d,平均校正防效为75.58％～80.03％;金龟子绿僵菌CQMa128乳粉剂(最适剂量7.5 kg/hm2)施药后15～20 d,平均校正防效为77.59％～86.46％.花生果荚收获期平均保果率达85.76％～87.13％,花生果荚鲜重平均增产量达832.5～916.4kg/hm2,控害保产效果显著.且绿僵菌新制剂的施用对臀钩土蜂的存活未见有明显不良影响.表明金龟子绿僵菌CQMa128新制剂能够时田间花生蛴螬进行持续有效的防控.     

一株引起田间昆虫流行病的虫生真菌的多基因序列鉴定

本研究采用形态学鉴定、单基因、多基因序列系统发育进化分析等方法对引起山东临沂地区的白菜地夜蛾科昆虫流行病的病原真菌进行鉴定,明确了此病原真菌的系统分类地位。通过菌株的菌落特征、培养特征和产孢特性初步确定引起山东临沂地区夜蛾科昆虫流行病的病原菌系绿僵菌属Metarhizium spp.,通过多基因序列测定、系统发育进化分析,进一步确定引起流行病的菌株为莱氏绿僵菌Metarhizium rileyi,菌株命名为SDMr01。用浓度为1.0×108个/mL的SDMr01孢子悬浮液分别浸泡小菜蛾Plutella xylostella及斜纹夜蛾Spodoptera litura 2龄幼虫进行致病性测定,14 d后累计校正死亡率分别为77.1％、80.5％。结果表明,莱氏绿僵菌SDMr01对部分夜蛾科害虫具有良好的生防潜力及开发应用前景。     

几种农药防治花生蛴螬的田间药效评价

利用播种期拌种和撒毒土的方法,开展了5种农药对花生田蛴螬的田间药效评价。试验结果表明,几种毒死蜱药剂对蛴螬的防治效果为61.95%~86.39%,以毒·辛30%微囊悬浮剂防治效果(86.39%)最好,吡虫·毒死蜱30%微囊悬浮剂(79.74%)次之,毒死蜱5%颗粒剂防治效果(61.59%)最低。从不同剂型防治蛴螬的效果来看,微囊悬浮剂显著好于颗粒剂。几种毒死蜱药剂对花生均有增产效果,分别较对照增产11.60%~21.65%,其中毒·辛30%微囊悬浮剂处理的产量最高(3 539.823kg/hm2),毒·辛8%颗粒剂、吡虫·毒死蜱30%微囊悬浮剂、毒死蜱15%颗粒剂增产效果相当,毒死蜱5%颗粒剂增产最低。在花生蛴螬的防治中,应该逐年提升毒死蜱微囊悬浮剂的使用面积。     

提升Bt和球孢白僵菌防治蛴螬效果的颗粒载体

为提升微生物杀虫剂对地下害虫蛴螬的防治效果,本研究研制了一种颗粒载体。首先,选择了生产企业常用的单螺杆膨化机作为生产设备,进一步通过颗粒大小、结构稳定性、生产过程等关键因素比较,确定了颗粒载体的物料配方（玉米粉、花生粕、膨润土比例为1：3：2,加水量20%）。进一步研究结果显示,Bt、球孢白僵菌等对蛴螬有效的杀虫微生物能够在颗粒载体上增殖生长。此外,本研究还发现对暗黑鳃金龟有效的Bt185与球孢白僵菌间无拮抗;暗黑鳃金龟幼虫的生物活性测定结果表明,颗粒载体与Bt185或球孢白僵菌结合后的校正死亡率为使用Bt185或球孢白僵菌单一粉剂的2倍,并且颗粒载体与这两种菌株协同使用的校正死亡率达77.55%,显著提升了Bt和球孢白僵菌单一粉剂对蛴螬的杀虫效果。上述研究结果为研制新型高效蛴螬生物杀虫剂提供了新思路,对突破目前蛴螬生物防治的瓶颈具有重要意义。     

绿僵菌IMI330189菌株突变体库的建立及毒力相关突变株的筛选

为了研究绿僵菌毒力相关的功能基因,采用农杆菌介导的转化方法将携带苯菌灵抗性标记基因的T—DNA导入绿僵菌IMI330189中,获得了绿僵菌突变体库,采用人工饲料诱饵法测定了突变株对3龄东亚飞蝗Locustamigratoria的毒力。研究发现,突变株对东亚飞蝗的毒力都有不同程度的改变,在诱饵剂浓度为10^8孢子．g-1下,野生型菌株IMI330189对东亚飞蝗的致死中时（LT50）为4-3d;突变株189-1的毒力略有提高,其LT50值为3．5d;其余突变株的毒力均降低,且突变株189—4、189—5、189—6、189—10、189-11、189—13和189—15几乎丧失了对东亚飞蝗的毒性,校正死亡率小于50％。本研究为进一步分离毒力相关基因、探索绿僵菌的致病机制奠定了基础。