人工接种CMV后辣椒植株中病毒含量的时序变化及症状表型

以5份不同类型的辣(甜)椒为供试材料,人工接种CMV重花叶型株系,通过DAS-ELISA方法,分别检测接种5、10、15、20、25、30d后辣椒植株中CMV含量的时序变化,同时对供试材料进行人工接种抗性鉴定,并对2种方法得到的数据进行相关性分析。结果显示:不同类型供试材料接种5~15d后的病毒含量逐渐增加,并于15d时达到最高水平,之后略有回落;通过DAS-ELISA检测得到的植株病毒含量与人工接种抗性鉴定得到的病情指数呈正相关,说明2种鉴定方法获得的结果一致。     

筛选抗西瓜花叶病毒(1及2)西瓜(初报)

共150份地理来源不同的材料,用苗龄3周带西瓜花叶病毒1和2的切穗接种。高抗材料中生长良好的植株越冬后,再次进行抗性评价,从选出的植株上取1～4个切穗,在田间条件下繁殖接种。自印度引入而存活的西瓜,具有极好的园艺性状,但不抗两种花叶病毒。来自非洲的材料对两种花叶病毒,具有最好的抗     

应用real-time RT-PCR监测柑橘衰退病毒强、弱毒株的时序变化

 使用褐色橘蚜在提前7个月预免疫接种了柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）弱毒株CT11的锦橙植株上拮抗接种强毒株CT14,应用real-time RT-PCR技术,监测供试植株中CTV强、弱毒株的含量变化,同时采用内参基因18S rRNAF/R及nad5F/R校正检测结果。试验结果表明,在拮抗接种3个月内始终未能在预免疫的拮抗植株中检测出强毒株CT14。在25头蚜虫拮抗接种后45 d和50头蚜虫拮抗接种后10 d,绝大多数预免疫的拮抗植株中弱毒株的含量高于预免疫的负对照植株,此后弱毒株的含量基本下降到负对照植株的水平,而负对照植株内弱毒株的含量变化不明显。     

辣椒抗白粉病人工接种鉴定方法研究

以不同抗感病辣椒品种（系）为试材，从接种浓度、调查时间、接种植株苗龄、接种后发病条 件、接种植株处理方式等方面对辣椒抗白粉病人工接种鉴定方法进行了研究。结果表明，辣椒抗白粉病 的最佳人工接种鉴定方法为：用含孢子1×10⁴个·mL^-1的菌悬液接种，接种15 d后进行抗病性鉴定，15 片真叶期为接种鉴定苗龄，接种后黑暗保湿24 h，随后转为白天温度23～27 ℃，相对湿度60 %～85 %， 夜间温度16~18 ℃，相对湿度95 %～100 %的环境条件适宜白粉病菌的侵染。     

RIP和TCS双价转基因草莓抗草莓镶脉病毒鉴定

用小叶嫁接法对农杆菌转化RIP和TCS双价抗病毒基因所获得的草莓品种森嘎拉和戈雷拉转基因植株接种草莓镶脉病毒,采用PCR方法检测嫁接成活后的转基因草莓苗草莓镶脉病毒。结果表明:这2个品种的转基因植株均有部分植株未扩增出草莓镶脉病毒特异条带,说明转入的外源基因具有一定的抗草莓镶脉病毒作用。     

樱桃番茄新品种‘吉农2号小番茄’

 ‘吉农2号小番茄’是以农家品种‘红樱桃’与丹麦引进的小番茄杂交而成。该品种植株无限生长型，普通叶，生长势强，于第8～9节着生第一花序，每穗结果20～40个。果实红色，圆形，酸甜可口，单果质量10～15 g。抗斑枯病、晚疫病和病毒病，适于露地和保护地栽培。     

秋福红树莓叶片离体再生植株研究

以红树莓品种秋福(Rubus L.cv.Autumn Bliss)离体叶片为外植体,研究适合其再生植株的叶片部位、放置方式、植物生长调节剂以及暗培养时间等条件。结果表明,叶片外植体接种于MS+TDZ2.00mg/L+IAA0.10mg/L的培养基,暗培养2～3周转移至正常光照下培养效果最好,愈伤组织形成率、不定芽再生率和外植体不定芽数分别为100.00%、95.83%和(5.57±0.27)个。将再生芽接种于1/2MS+IBA0.10mg/L的培养基中,35d后生根率达100.00%。再生植株炼苗后移栽,30d时成活率达97.30%,成功地建立了红树莓叶片的离体再生体系。     

番茄黄化曲叶病毒的实时荧光定量PCR 检测

番茄黄化曲叶病毒病（Tomato yellow leaf curl virus disease,TY LCVD）是目前为害番茄生
产的重要病害,准确检测TYLCV 含量是深入研究该病毒致病机理以及抗病育种的基础。根据TYLCV 的
DNA 保守序列设计引物,基于SYBR Green I 检测模式,构建了TYLCV 实时荧光定量PCR 检测体系,并
且对接种病毒30 d 后的感病番茄植株中的TYLCV 进行检测。结果显示,1ng·μL^-1 感病番茄总DNA 中
约含有3.47×10⁶ 个病毒拷贝。利用实时荧光定量PCR 法比普通PCR 法的灵敏度提高100 倍。     

青枯雷尔氏菌胁迫对烟草植株抗氧化酶系活性的影响

以青枯雷尔氏菌RS-1403作为外源微生物,研究不同浓度青枯雷尔氏菌胁迫对烟草植株叶片PPO、POD、SOD酶活性的影响。结果表明:PPO和POD酶活性总和显著高于对照,而SOD酶活性总和除了处理2(接种浓度为2.35×10~4CFU/mL)外,其余的各个处理的均低于对照。烟草植株的根部、茎部和叶片的POD、PPO和SOD酶活性总和明显高于对照处理,并且其酶活性达到高峰的时间有所不同。胁迫接种5 d后,烟草植株叶片和茎部的POD酶活性和对照处理的比值最大,胁迫接种10 d后,烟草植株根部POD酶活性比值最大。烟草植株叶片和根部在接种15 d后,PPO酶活性和对照处理的比值达到最大,茎部PPO酶活性在接种5 d后比值最大。接种20 d后,处理烟草植株叶片和茎部的SOD酶活性和对照处理的比值达到最大,接种后25 d,根部SOD酶活性比值最大。     

大蒜白腐病抗性鉴定方法研究

 以汉中红皮蒜（抗病）和改良蒜（感病）为鉴别品种,对大蒜抗白腐病鉴定中的接种叶龄、接种部位、接种后培养温度及调查时期等进行研究。结果表明,苗期白腐病菌通过伤口和自然孔口均可浸染大蒜植株,而花芽鳞芽分化期通过伤口侵入。抗病性鉴定最适接种叶龄为6叶期,离体接种法较活体接种法更简便快捷。离体接种鉴定时叶面接种和叶背接种鉴定结果无显著性差异;接种后最适培养温度为18 ℃,最适调查时期为接种后7 ~ 8 d。以G005（抗病）、G023（感病）和G025（感病）大蒜为验证品种,离体接种鉴定结果显示,建立的大蒜白腐病抗病性鉴定方法可行,能反映品种的真实抗性。     

番木瓜抗PRSV突变的抗病性鉴定

通过接种PRSV Ys、Vb和Sm3个株系及田间诱发鉴定,研究了抗PRSV突变岭抗1号（聪1）的抗病稳定性。结果表明,LK-1表现出高抗PRSV-Ys和PRSV-Vb2个株系的能力,对PRSV．Sm株系则无明显抗病能力,抗病性不因自交繁殖而丧失,种植到田间的接种苗成株期的田间抗性表现与苗期表现基本一致,表明LK-1的抗病性能具较高的稳定性。     

原核表达的PRSV HC-Pro 基因同源dsRNA 诱导番木瓜抗性的研究

 利用番木瓜环斑病毒（PRSV）HC-Pro 基因3′端824 bp 区段,通过OZ-LIC 法构建了含有PDK 内含子的发夹RNA 编码结构,并选用pSP73 和M-Jm109LacY 分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA 原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG 诱导表达的dsRNA 不被DNase I 和RNase A 降解,稳定性较好。采用喷洒dsRNA 粗制品的方式对番木瓜植株进行保护性处理和治疗性处理,症状观察及ELISA、Real-time RT-PCR 分析结果表明,保护性处理能有效诱发对番木瓜环斑病毒的抗性（发病率低,发病时间晚）;治疗性处理（植株已接种PRSV 25 d）能在处理初期引起番木瓜环斑病毒积累量发生短暂降低。     

抗苹果斑点落叶病基因Mal d 1的克隆及功能鉴定

以苹果叶片总RNA为模板,通过克隆获得抗苹果斑点落叶病基因Mal d 1。Mal d 1开放阅读框长度为480 bp,编码159个氨基酸残基,包含2个外显子和1个内含子。蛋白结构分析显示,Mal d 1蛋白包含bet v 1-like结构域。荧光定量PCR分析结果表明,Mal d 1在苹果叶、花、果皮、果肉中均有表达,但各器官中表达水平存在差异;在不同发育时期的果皮中都有表达,表达水平随时间呈现先上升后下降的趋势;在抗性品种叶片中表达水平较高;在叶片人工接种病菌条件下表达量随时间的延长明显高于对照组。利用PRI101-AN载体和农杆菌介导的遗传转化方法转化苹果愈伤组织,转基因愈伤组织的抗病鉴定结果显示,Mal d 1过量表达增强愈伤组织对苹果斑点落叶病的抗性。     

分泌型Cecropin B 抗菌肽基因转化血橙提高其抗溃疡病水平

 为了利用Cecropin B（CB）抗菌肽基因提高柑橘对溃疡病的抗性,人工合成了两个含有信 号肽的Cecropin B 抗菌肽基因PR1aCB 和AATCB。洋葱表皮瞬时表达分析表明,与非分泌型CB 抗菌肽 相比,PR1aCB 和AATCB 抗菌肽在细胞间隙中优势积累。进一步构建了CaMV 35S 调控 PR1aCB 和AATCB 基因的植物表达载体,转化塔罗科血橙（Citrus sinensis Osbeck）上胚轴,获得转基因植株。GUS 组织化 学染色、PCR 和Southern blot 分析表明外源基因已成功整合入柑橘基因组。Real-time PCR 定量分析表明, 抗菌肽基因在转基因植株中成功表达。柑橘叶片离体抗性分析表明,转PR1aCB 和AATCB 基因植株的抗 性显著强于非转基因植株,其抗性水平与高抗品种‘南丰蜜橘’（C. succosa Hort. Ex Tan）和‘四季橘’ （C. madurensis）相当。     

Breaking the intergeneric hybridization barrier in Carica papaya and Vasconcellea cauliflora

The present investigation was undertaken to develop PRSV (Papaya ringspot virus) resistant hybrids through intergeneric hybridization. Intergeneric hybridization was done involving nine Carica papaya cultivars as female and Vasconcellea cauliflora as male. To break the intergeneric hybridization barrier, various nutrient combinations were used. Among the combinations used, sucrose 5%, sucrose 5% + boron 0.5% and sucrose 5% + CaCl₂ 0.5% improved the fruit set and seed set percentage. A total number of 1197 flowers were pollinated and 308 fruits were obtained. On extraction, 721 seeds were obtained from CO 7, Pusa Nanha and CP 50. Out of 721 F₀ seeds (crossed seeds) sown, 419 seeds germinated and artificial screening for PRSV was carried out 27 days after sap inoculation. Out of 29 F₁ hybrid plants from CO 7 x V. cauliflora cross, only six plants namely CO 7V1 to CO 7V6 were found free from PRSV symptoms. Similarly, out of 55 F₁ hybrids from cross involving Pusa Nanha x V. cauliflora only 23 plants namely PNV1 to PNV23 were found free from the symptoms and 70 plants namely CPV1 to CPV70 out of 335 plants of CP50 x V. cauliflora cross were found free from PRSV symptoms. Among the crosses, Pusa Nanha x V. cauliflora had higher yield under PRSV infected conditions, however, total soluble solids and total sugars were found lesser than the CO 7 x V. cauliflora cross. The hybridity of the progenies were confirmed by using ISSR (Inter Simple Sequence Repeats) primers by the amplification of DNA from progenies and their parents. ISSR primers UBC 856, UBC807 and ISSR primer combinations UBC 856-817, UBC 810-817, UBC 861-817, UBC 856-810, UBC 861-810 and UBC 856-817 clearly amplified specific bands of the male parent, which were present in F₁ progenies, but it was absent in female parents.     

脐橙叶片矿质营养元素含量的分区分布特征

为揭示矿质营养元素在脐橙叶中分区分布特征,以枳砧和枳橙砧纽荷尔脐橙为对象,测定新叶和老叶的叶尖、叶缘、中部、叶基和翼叶等5个分区中10种元素(N、P、K、Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn和B)的含量,并分析各分区离子组成的差异。主成分分析显示,第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)分别解释了总变量的43.4%和21.1%,明确区分了新叶和老叶,大致区分了叶不同分区,发现新叶翼叶与其他分区具有明显差异,而老叶本叶各分区的离散程度明显大于新叶本叶各分区。两种砧木脐橙新叶中钾含量分布表现为翼叶叶基中部叶缘≈叶尖,镁含量表现为叶尖≈叶缘中部叶基翼叶;两种砧木脐橙老叶中锰含量表现为叶尖≈叶缘中部叶基翼叶,硼含量表现为叶尖叶缘中部叶基翼叶。N、P、B在新叶本叶各分区以及P、Ca在老叶本叶各分区间含量都没有显著差异。枳砧脐橙新叶翼叶Mn、Cu和Zn的含量与叶片其他分区没有显著差异,而枳橙砧脐橙新叶翼叶Mn、Cu和Zn的含量都分别显著低于叶片其他分区。结果表明,不同元素叶片分区分布特征存在明显差异,翼叶的元素含量和离子组成与叶片其他分区差异明显。     

番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因原核表达蛋白的抗血清制备及其检测应用

 以受番木瓜环斑病毒（Papaya ring spot virus,PRSV）侵染的番木瓜（Carica papaya）叶片为供试材料,采用RT-PCR 方法克隆其外壳蛋白基因cp,并将其连接到原核表达载体pET-28b（+）上,酶切鉴定及克隆测序确定开放阅读框的正确性,将获得的重组质粒转化大肠杆菌表达宿主菌。通过摸索转化的表达宿主菌种类、IPTG 浓度及诱导时间,获得高效表达PRSV cp 的条件。SDS-PAGE 分析结果表明,CP 融合蛋白分子量为36.8 kD。以Ni2+-NTA 亲和层析柱纯化的融合蛋白为抗原,免疫注射新西兰大白兔制备得到高效价抗体,间接ELISA 测定效价为1︰16 384。Western blot 检测结果表明,制备的抗血清可与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。通过ID-ELISA 检测田间样品证实了制备的抗血清与PRSV 侵染病叶发生了良好的特异性反应。本试验为PRSV 的快速检测以及PRSV 编码蛋白的功能研究奠定了基础。     

冬瓜人工接种5种病毒后的症状观察

选择5种在葫芦科作物上常见的病毒病原：小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV ）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、番木 瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus，PRSV）、南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus，SqMV），人工接种子叶 期的冬瓜幼苗，观察分析5种病毒在冬瓜上的症状差异。结果表明：这5种病毒均可侵染冬瓜，且不同病毒在冬瓜 上的发病时间、发病率及症状存在明显差异：显症最早的是SqMV，最迟的是WMV；发病率普遍较低，都在30 %以下 ，ZYMV的发病率仅为4 %。     

利用CRISPR/Cas9系统敲除葡萄中VviEDR2提高对白粉病的抗性

利用CRISPR/Cas9系统定点编辑葡萄白粉病感病基因VviEDR2（Enhanced disease resistance 2），在VviEDR2的DUF1336结构域设计靶位点VviEDR2-T1，构建CRISPR/Cas9敲除载体，通过农杆菌介导法转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织。对PCR阳性植株进行靶位点扩增测序，结果表明，共有8个转基因植株在靶位点处发生不同类型的双等位基因突变，编辑效率为32%；突变体植株生长势较弱，叶片较小，茎秆丛生、细弱。进一步对突变体植株进行抗病检测，结果表明，接种葡萄白粉菌（Erysiphe necator Schw.）5 d后，突变体植株叶片上白粉菌孢子仅能萌发出少量较短初级菌丝，表皮细胞产生大量明显的H2O2，而野生型叶片中白粉菌萌发出大量初级菌丝、次级菌丝和吸器，无明显H2O2产生。这些结果表明，可以利用CRISPR/Cas9技术编辑葡萄感病基因VviEDR2，提高葡萄白粉菌抗性。     

促生菌CH1诱导黄瓜对猝倒病抗性的研究

 采用分根法研究了植物生长促生菌CH1诱导黄瓜对猝倒病的抗性以及黄瓜植株经CH1处理后根部与叶部组织的超氧化物歧化酶( SOD) 、过氧化物酶( POD) 、过氧化氢酶(CAT) 、多酚氧化酶( PPO) 和苯丙氨酸解氨酶( PAL) 的活性变化。结果表明, 促生菌CH1提高了黄瓜的成苗率, 处理后的28 d, 猝倒病相对防效高达78.64% , 推测促生菌CH1使黄瓜产生的诱导抗性是其防病的主要原因。黄瓜经CH1处理并同时接种腐霉菌后, 处理根部与未处理叶部组织中SOD、POD、CAT、PPO和PAL活性都明显高于其它处理, 其根部这些酶的活性分别在处理后3、3、5、5和5 d时出现高峰, 叶部酶活性变化基本与根部的相吻合。表明这些酶活性的提高与CH1诱导的黄瓜对猝倒病抗性可能有一定的相关性, 而且CH1对这些酶活性的诱导具有系统性。