草莓流式细胞检测提取方法的优化

为了制备高纯度的草莓细胞核悬液,提高流式细胞仪检测准确性,获得变异系数(CV值)小、可信度高的检测数据,为草莓倍性育种提供技术支持。通过优化过滤方法与OTTO提取液,应用流式细胞仪对二倍体川九1号和八倍体红颊草莓进行倍性检测。结果表明,较好的细胞核悬液过滤方法为先用70μm过滤器,再用40μm过滤器的二步过滤法;优化提取液配方为OTTOⅠ缓冲液:100 mmol·L-1柠檬酸,0.5%(V/V)Tween20和2%(V/V)聚乙烯吡咯烷酮(PVP),p H 2~3;OTTOⅡ缓冲液:400 mmol·L-1Na2HPO4·12H2O,p H8~9。用优化的提取方法制备的草莓细胞核悬液经流式细胞仪检测分析,其直方图主峰窄而集中、变异系数为5.43%。     

基于流式细胞术的15个油茶品种基因组测定研究

以15个油茶品种的嫩叶为材料,用基因组大小水稻日本晴为内标,筛选出适合油茶的流式细胞术估测基因组大小的方法。结果表明:经解离液的反复筛选,改良的Otto法对油茶细胞核的解离效果最佳,内标水稻与待测样品油茶的变异系数(CV)均控制在6%以内;细胞悬液在加入PI染色剂10 min后便可上机检测,15个油茶品种的基因组大小范围为6 411.99～9 398.58Mbp,品种间存在显著差异。     

基于流式细胞术的桫椤基因组大小测定

以买麻藤(Gnetum montanum)为内参,测定5种常用裂解液(Tris·MgCl_2、LB01、WPB、Otto’s、Galbraith’s)对桫椤(Alsophila spinulosa)细胞核的裂解效果,并通过比较桫椤和买麻藤流式细胞仪测定的荧光峰值,计算出桫椤的基因组大小。结果表明:5种裂解液中,WPB为桫椤最佳裂解液;桫椤基因组大小为6 003.25Mb,即2C DNA含量为6.138 pg。     

根际芽孢杆菌对水稻根系的促生效应

为研究不同根际芽孢杆菌及其复合菌剂对水稻根系的促生效应,采用盆栽试验筛出促生效果好的促生菌剂,研究其对水稻根系生长的影响。结果表明,经解磷菌(Bacillus pumilus sp.,J)、溶磷菌(Bacillus megateriun sp.,R)、解钾菌(Bacillus subtilis sp.,K)菌悬液处理后,水稻幼苗胚根长分别比未添加菌液处理提高161.2%、157.9%、110.5%;在未灭菌的土壤中,解钾菌(K,LZP06)菌悬液处理对水稻根系生长有较好的促生效应,水稻幼苗根干质量比清水对照提高了65.3%;在灭菌土壤中,解钾菌+解磷菌[(K+J)s]、解钾菌+溶磷菌+解磷菌[(K+R+J)s]菌悬液处理对水稻有较好的促生效应,水稻幼苗根干质量比灭菌水对照分别显著提高57.8%、69.2%。综上,K(LZP06)菌悬液、复合菌悬液(K+J)s和(K+R+J)s对水稻促生效果较好,可作为微生物肥料生产的候选菌剂。     

井岗霉素在水稻叶片中的残留分析

建立了井岗霉素高效液相色谱分析法:紫外检测器UV,检测波长210nm,以甲醇与Na2HPO4缓冲液(pH=7,体积比为2∶98)为流动相,流速1.2mL·min-1,以甲醇/水(体积比为9∶1)为提取溶剂,以C18固相萃取柱净化。并研究了井岗霉素在水稻叶片上的残留行为。结果表明:建立的方法平均回收率为84.25%～102.25%,变异系数(CV)为1.64%～2.98%,最低检出限为0.92mg·kg-1,方法符合残留分析的要求。消解动态试验结果表明:添加或不添加表面活性剂9708的井岗霉素在稻叶中的半衰期(T1/2)分别为2.4和3.0d,最终残留量未检出。     

山药蛋白酶解液的分离纯化

以山药(Dioscorea opposite Thumb.)为原料,选取碱性蛋白酶酶解山药蛋白粗提物制备山药蛋白酶解液。分别采用纤维素DE-52阴离子交换层析和Sephadex G-50凝胶层析,对酶解制备的山药蛋白酶解液进行分离纯化。结果表明:经过纤维素DE-52阴离子交换层析,得到4个吸收峰,收集每个峰组分,其单位质量的还原能力分别为峰2(P2)>峰1(P1)>峰3(P3)>峰4(P4)。采用Sephadex G-50凝胶分别用蒸馏水和Tris-HCl缓冲液对P1和P2组分继续分离纯化,均能得到2个吸收峰(组分)。     

井岗霉素在水稻叶片中的残留分析

建立了井岗霉素高效液相色谱分析法:紫外检测器UV,检测波长210 nm,以甲醇与Na2HPO4缓冲液(pH=7,体积比为2: 98)为流动相,流速1.2 mL·min-1,以甲醇/水(体积比为9: 1)为提取溶剂,以C18固相萃取柱净化.并研究了井岗霉素在水稻叶片上的残留行为.结果表明:建立的方法平均回收率为84.25%～102.25%,变异系数(CV)为1.64%～2.98%,最低检出限为0.92 mg·kg-1,方法符合残留分析的要求.消解动态试验结果表明:添加或不添加表面活性剂9708的井岗霉素在稻叶中的半衰期(T1/2)分别为2.4和3.0 d,最终残留量未检出.     

越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备

[目的]制备用于检测水稻黄矮病毒(RYSV)的多克隆抗体,为水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断提供技术支持.[方法]利用两种不同来源的RYSV抗原免疫家兔,一种是从受感染的水稻病叶组织纯化获得RYSV病毒粒子;另一种是从越南RYSV分离株克隆出完整N蛋白编码基因,然后将其连接至pET-28a载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中进行诱导表达获得N蛋白抗原.其中,N蛋白抗原又以两种形式(洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆)对家兔进行免疫.最后,采用PTA-ELISA分析评估家兔抗体血清(多克隆抗体)对水稻叶片和黑尾叶蝉RYSV的特异性和敏感性.[结果]分离自越南RYSV分离株的N基因由1542个核苷酸组成,与来自我国和日本RYS分离株N基因序列进行比对,其核苷酸序列同源性分别为98.1%和97.9%,对应的推导氨基酸序列同源性为83.4%和99.4%.以RYSV病毒粒子、洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆3种抗原免疫家兔获得的多克隆抗体均能有效检测出水稻植株中的RYSV,其中,感病植株的OD405分别为1.449、2.337和1.649,健康植株的OD405分别为0.375、0.294和0.283.PTA-ELISA检测结果表明,获得的多克隆抗体能从单个带病毒黑尾叶蝉中检测出RYSV,且该结论在RT-PCR检测中得到进一步验证.[结论]制备获得的多克隆抗体对RYSV具有较高特异性和敏感性,可用于水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断,同时表明以含有病毒植物蛋白的聚丙烯酰胺切片直接注射免疫模型动物制备多克隆抗体具有可行性.     

白刺链霉菌CT205对南方根结线虫的毒杀作用及盆栽防效

[目的]检测白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205产生的挥发性有机化合物(volatile organic compound, VOC)和非挥发性有机化合物(nonvolatile organic compound, NVOC),并研究其对黄瓜根结线虫病的生防效果。[方法]分别将线虫悬液和新鲜线虫卵悬液与白刺链霉菌CT205发酵上清液共同培养,测定发酵上清液对根结线虫J2s和虫卵的毒杀作用。用气相色谱-质谱(GC-MS)检测CT205产生VOC的主要组分及含量,采用二分平板来检测CT205 VOC杀线虫活性。通过固体发酵制备白刺链霉菌CT205制剂,开展黄瓜盆栽试验测定CT205制剂对黄瓜根结线虫病的生防效果。[结果]CT205发酵上清液对根结线虫J2s具有较强的杀虫活性,24 h时校正死亡率达91.21%;对根结线虫虫卵同样具有较强的抑卵孵化作用,处理时间在72 h后相对抑制率达80%以上。CT205产生的主要VOC有烯烃类、醇类等化合物,能显著抑制根结线虫J2s活性。CT205菌剂可有效降低黄瓜根结线虫病的发病率促进黄瓜植株生长,对黄瓜根结线虫病的防...     

利用流式细胞术检测甜菜染色体倍性和DNAC-值

【目的】研究流式细胞技术快速、准确、方便测定甜菜体内染色体倍性和DNAC-值,为甜菜染色体倍性、分子生物学领域的相关研究提供参考依据。【方法】以二倍体M39-8-4嫩叶为材料,以已知基因组的新疆野杏洛浦洪待克为外标,建立适合于甜菜染色体倍性和基因组的流式细胞术测定方法。【结果】经7种常用细胞解离液筛选, Marie's为甜菜作物的最佳选择。用Marie's解离液制备的甜菜细胞核悬浮液,测定4份甜菜材料和新疆野杏洛浦洪待克值的变异系数(CV)均小于5.0%,且上样速率超过 200 events/μL,可重复性好,结果清晰、可靠。M39-8-4超原、02343 刘福齐和7208 伊抗褐的DNA含量依次是821.88、891.9和1 759.59 Mb;待测材料LSR88-5-1为二倍体,DNA含量822.48 Mb。【结论】流式细胞术能准确区分不同倍性的甜菜材料;可作为鉴定甜菜倍性的方法。     

流式细胞术检测4种提取沙棘核DNA方法的比较

采用4种不同提取细胞核的方法,测定了6个不同沙棘品种的核DNA含量,比较了4种不同提取方法测得的CV值的差异.结果表明:4种提取沙棘核DNA的方法所测得的内标CV值为2.49%～11.31%,待测样CV值为2.53%～12.08%.当Tris.MgCl2法测定时,细胞核全部破碎,故未得到流式图;用Otto's法测得的CV值最小,内标与待测样CV值分别为2.49%～3.35%,2.53%～3.56%.因此,Otto's法为最适宜提取沙棘细胞核DNA的方法.     

水分胁迫下3个旱地小麦品种幼苗光合作用的比较研究

 水分胁迫下,抗旱品种云麦29、祥云爬地麦净光合速率高于干旱敏感品种科拜,其净光合速率差异达极显著水平(F测验P=0.01),云麦29、祥云爬地麦、科拜的临界水势值分别为-14.3,-13.3,-12.6(bar),随着水分胁迫加剧,各品种幼苗叶片明显地积累蔗糖,积累量的顺序是科拜>祥云爬地麦>云麦29。科拜与云麦29、祥云爬地麦蔗糖积累之差异达极显著水平,而云麦29、祥云爬地麦之间差异不显著,蔗糖积累与各品种抗旱性呈相反趋势,水分胁迫下,果糖、葡萄糖变化大致与各品种净光合速率相一致。     

适于双向电泳分析的番茄叶片总蛋白提取方法的优化

比较了三氯乙酸(TCA)、酚和十二烷基硫酸钠(SDS)3种提取方法在所获番茄叶片总蛋白产量及其在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率等方面的区别,并对3种蛋白溶解液以及超声处理在蛋白质溶解中的作用进行了分析探讨。结果表明,TCA提取法最佳,该方法提取番茄叶片总蛋白的得率最高、所获蛋白在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目最多,最清晰;酚法次之;SDS法最差。由离液剂和去污剂组成的蛋白溶解液复溶蛋白沉淀所获蛋白产量显著高于Tris-NaCl溶解液。还原剂和两性电解质以及超声处理显著增进蛋白质的溶解,提高蛋白产量。采用TCA提取法获得蛋白沉淀,再以溶解液Ⅱ(7 mol/L尿素,2 mol/L硫尿,2%CHAPS,2%SB3-10,65 mmol/L DTT,0.2%两性电解质)溶解,结合超声助溶的方法体系可以获得高得率和高电泳分辨率的番茄叶片总蛋白样品,该方法适用于双向电泳分析等下游操作。     

厚竹叶绿素荧光成像的异质性研究

[目的]为了研究厚竹叶片叶绿素荧光的异质性.[方法]运用调制荧光成像系统Mini-IMAGING-PAM的叶绿素荧光和成像技术,测量厚竹叶片叶绿素荧光,计算各荧光参数.[结果] PSⅡ最大量子产量(Fυ/Fm)和叶片吸光系数(Abs)均质性较高,实际量子产量(Y)、非光化学淬灭(NPQ/4)、光化学淬灭(qP)和相对电子传递速率(PS/50)的异质性都很强.Y、qP和PS/50的变化趋势基本相同,横向呈现两边高、中间低的趋势,即靠近叶片边缘数值高,靠近叶脉部分数值低.叶片纵向(从上到下)的Y、qP和PS/50变异系数逐渐减小,说明从叶子尖端到叶子基部异质性逐渐降低.PS/50和NPQ/4呈相反变化趋势.[结论]厚竹叶片各荧光参数有不同的异质性.     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗体水平检测与分析

为探讨PRRS免疫猪场和非免疫猪场抗体水平差异,采集福建各地区64个不同规模猪场血清样本1 742份,其中免疫猪场40个共1 059份血清,非免疫猪场24个共683份血清;采用美国IDEXX公司PRRS病毒抗体ELISA试剂盒进行检测,分析其抗体阳性率、CV值及S/P区间分布值.结果显示:免疫猪场抗体阳性883份,阳性...     

油松胚珠蛋白质提取分离技术的优化

采用4种pH值和2种SDS浓度的Tris-HCl提取液、TCA/丙酮溶液对油松胚珠蛋白质进行提取.经SDS-PAGE电泳检测,提取液pH值对提取效果的影响与SDS浓度有关.低浓度SDS（0.2%）需要提高提取液的pH值,pH 8.8的效果最好.SDS浓度提高到2%,pH值对蛋白提取量影响不明显,电泳条带都很清晰,同时分子量为14.4、16.1、17.1 kD的蛋白条带明显增强.经IEF/SDS-PAGE凝胶电泳检测,TCA/丙酮沉淀法所得图谱效果好、干扰少、蛋白点数多;用pH 8.8 Tris-HCl提取液提取时,低浓度SDS（0.2%）比高浓度SDS（2%）所得图谱效果好.      

金银花干制和冲泡过程中吡虫啉和啶虫脒的残留行为

为了研究金银花在干制和冲泡过程中吡虫啉和啶虫脒的残留行为,利用高效液相色谱法对其进行分析,结果显示,吡虫啉和啶虫脒在金银花和茶汤2种基质中的添加回收率为80.8%~94.5%,变异系数为0.5%~6.7%。晒干、阴干和烘干3种干制方法对金银花中的两种农药均有一定的消解作用,吡虫啉和啶虫脒残留的消解百分数分别为30.9%~78.3%和25.1%~78.0%,其中,晒干和高温烘干处理具有更高的消解百分数。在不同农药浓度、冲泡次数、茶水比和浸泡时间以及加不加盖子等冲泡条件下,金银花中的吡虫啉和啶虫脒残留分别有7.7%~26.3%和6.5%~39.4%转移至茶汤。可见合理的干制方法和冲泡条件可以减少吡虫啉和啶虫脒残留向人体的转移。     

基于局域网的视频解码算法的研究与实现

网络视频解码的基础是码流的管理和视频流的解析。所设计的基于局域网的视频解码算法采用了码流的三级缓冲管理机制：由接收缓冲区负责存储从服务器端接收到的码流，工作缓冲区直接向视频解码提供所需数据，中间缓冲区负责以上2个缓冲区的中转。码流的解析首先从复合流中提取视频流，然后从视频流中读取一定位数的数据进行解码。为了保证视频解码过程的随机开始，在解码开始前，要求服务器先发送有关信息以便得到解码所需的必要参数，再接收码流并从找到的第1帧Ⅰ图像开始解码。为了正确解出紧跟在第1帧Ⅰ图像后面的B图像，系统构造了前向预测图像数据。抖动处理提高了图像显示的质量和速度。     

大豆微核心种质蛋白亚基含量变异的分析

大豆蛋白品质及其加工特性均受到各亚基相对含量及11S/7S的影响,了解大豆蛋白亚基相对含量变异将对选育蛋白专用型品种有重要的指导意义。于2008-2010年对236份大豆微核心种质材料的大豆蛋白亚基相对含量的变异情况进行了分析。结果表明:大豆微核心种质资源中蛋白各亚基相对含量有广泛的变异,有很好的遗传改良潜力,α′、α、β、A3、A1A2A4、B亚基的变异系数分别为0.410、0.330、0.311、0.211、0.123、0.170,11S/7S变异系数为0.400。不同生态区各亚基在相对含量和遗传变异程度上存在差异,总体来说,A1A2A4、B亚基相对含量和11S/7S在北方一熟制春作大豆品种生态区(Ⅰ区)比黄淮海二熟制春夏作(Ⅱ区)大,Ⅰ区分别为0.220、0.403、2.616,Ⅱ区分别为0.212、0.370、2.343。α′、α、β、A3亚基相对含量在Ⅱ区比Ⅰ区大,Ⅱ区分别为0.064、0.090、0.153、0.070,Ⅰ区分别为0.062、0.086、0.127、0.061。α′、β、A3、A1A2A4亚基相对含量的变异系数在Ⅰ区比Ⅱ区大,Ⅰ区分别为0.549、0.270、0.259、0.193,Ⅱ区分别为0.435、0.262、0.254、0.185。α、B亚基相对含量的变异系数和11S/7S的变异系数在Ⅰ区比Ⅱ区小,Ⅰ区分别为0.333、0.184、0.249,Ⅱ区分别为0.348、0.216、0.331。因此,在Ⅰ区α′、β、A3、A1A2A4亚基相对含量具有更高的遗传改良潜力,在Ⅱ区α、B亚基相对含量和11S/7S具有更高的遗传改良潜力。     

花粉管通道法导入抗赤星病烤烟总DNA D_1代性状变异的研究

采用花粉管通道技术将抗赤星病烤烟ＣＶ８７的总ＤＮＡ导入感病烤烟ＮＣ８９,对其Ｄ_１代植株进行了田间生长性状、抗病性和烟叶品质的检测。结果显示,柱头滴加（ＤＺ）、切柱头滴加（ＱＤ）和子房注射（ＺＺ）等３种导入方法得到的Ｄ_１代植株在株高、株型、叶型、生育期等方面发生了较大的变异,变异率分别是１９．１０％,２０％和１８．２０％。３类植侏中分别有９．１０％,１０％和６．４０％的个体获得了对赤星病的抗性。在这些植株中,筛选出ＤＺ９８１１和ＱＤ９８１２在抗病性和烟叶品质上为优良植株。