抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体的制备与鉴定

以蔗糖密度梯度离心提取猪皮下脂肪细胞和其他组织细胞膜蛋白，经SDS—PAGE分析，结果表明：皮下脂肪细胞与其他组织细胞膜蛋白的组成存在较大差异，但仍有一些相同的膜蛋白成分；以皮下脂肪细胞膜蛋白为抗原，免疫山羊制备了抗脂肪细胞膜蛋白抗体，经ELISA测定抗体效价迭1：12800，经western世界人民blotting鉴定，所制备的抗体与肾周脂肪、肠系膜脂肪、心、肝、脾、肺、肾、肌肉和红细胞膜蛋白有交叉反应，但反应原性较弱，表明制备出的抗脂肪细胞膜蛋白抗体是高效价的，有一定特异性的。     

抗猪脂肪细胞特异膜蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的猪脂肪细胞特异膜蛋白 (40 0 0 0 )为抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备了 2 A3、3 H7和 3 A6等 3株单克隆抗体 ,分别属于 Ig A、Ig M和 Ig G1亚类 ,其最佳稀释倍数分别为 1∶ 1 6 0 0、1∶ 3 2 0 0和 1∶ 6 4 0 0。经 Western blotting鉴定 ,3株单抗均能与 4 0 0 0 0的抗原结合 ,且具有较强的抗原亲和力 ,亲和常数分别为 4 .86× 1 0 8、1 .86× 1 0 9和 2 .4 6× 1 0 9;对皮下脂肪细胞具有很强的特异性 ,经 Western blotting鉴定仅与猪和人脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与牛、羊、兔、鸡、鼠等动物的脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应 ;能与滇玉、滇昆、滇陆、长撒、长白、DL Y、约长撒和撒坝等品种猪皮下脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与皮下脂肪细胞的其他膜蛋白无交叉反应 ;仅与长撒猪皮下脂肪和腹部脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,与心、肝、脾、肺、肾、肌肉、肠系膜脂肪和肾周脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应     

猪脂肪细胞膜免疫调控的研究

本文综述了脂肪细胞膜免疫技术的研究概况。免疫机制。影响因素、及特异膜蛋白的研究等。对于进一步深入研究猪脂肪细胞膜蛋白的组成和功能。揭示脂肪细胞膜蛋白与脂肪细胞代谢和功能之间的关系．阐明脂肪细胞分化和脂肪沉积的分子和细胞机制,寻找减少猪脂肪过度沉积提供了科学依据,开辟了降低猪脂肪。提高瘦肉率研究的新领域。     

猪特异性脂肪细胞膜蛋白的研究进展与应用前景

猪的特异性脂肪细胞膜蛋白的表达可能涉及到脂肪细胞的分化与生长的调节 ,缺乏该蛋白可能导致肥胖症。本文概述了国外对该膜蛋白的研究进展 ,并阐述了应用前景     

急性冷刺激后巴马猪背膘和腹股沟皮下脂肪组织的脂质组比较

本研究旨在获得巴马猪皮下脂肪组织（包括背膘（backfat）和腹股沟皮下脂肪组织（inguinal subcutaneous white adipose tissue，iWAT））在急性冷刺激（4 ℃、4 h）后其脂质组成应答的差异。正常饲喂的6月龄巴马公猪在急性冷刺激处理后进行屠宰，收集背膘和腹股沟皮下脂肪组织，利用液相二级质谱（LC-MS/MS）高通量脂质组学检测技术分析其脂质组成。结果表明，在巴马猪皮下脂肪组织中，中性脂类、游离脂肪酸、磷脂类和鞘脂类4大类脂质含量差异巨大，其中含量最高的为中性脂类，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中分别占4大脂类总和的97.43%和98.53%；含量最低的为鞘脂类，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中所占比例分别为0.10%和0.07%。在16亚类脂质组成中含量最高的脂质为甘油三酯，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘分别占16亚类脂质总和的95.97%和97.33%；含量最低的脂质为磷脂酸，在腹股沟皮下脂肪组织和背膘中所占比例分别为3.98E-04%和1.13E-04%。主成分分析表明，背膘和腹股沟皮下脂肪组织在急性冷刺激后脂质组成存在差异。以∣差异倍数∣>1.5和P<0.05为标准筛选，共获得18种差异显著的脂类，其中16种脂类在背膘中含量显著低于腹股沟皮下脂肪组织，其中包括14种甘油三酯、DAG32：1（16：1/16：0）和PE40：6p；只有2种脂质（CL74：8（18：2）和TAG54：3（16：0））在背膘中的含量显著高于腹股沟皮下。巴马猪皮下脂肪主要脂质组成为甘油三酯；急性冷刺激后，背膘和腹股沟皮下脂肪组织对急性冷刺激存在不同的应答。     

猪猪异性脂肪细胞膜蛋白的研究进展与应用前景

猪的特异性脂肪细胞膜蛋白的表达可能涉及到脂肪细胞的分化与生长的调节，缺乏该蛋白可能导致肥胖症。本文概述了国外对该膜蛋白的研究进展，并阐述了应用前景。     

脂肪细胞膜免疫技术研究进展

脂肪细胞膜免疫技术是从以动物脂肪细胞膜分离得到的膜蛋白作为抗原,通过被动免疫或主动免疫来破坏脂肪细胞,使脂肪组织中的细胞数量减少,限制其贮存脂肪的能力,从而达到调控动物生长和降低动物脂肪的目的。本文将对脂肪细胞膜蛋白抗体的制备、作用机制及在动物上的使用效果进行阐述,并对此技术尚需解决的问题和发展方向进行综述。     

猪脂肪沉积相关的生化特征研究

以遗传瘦肉型的斯格猪和长白猪以及遗传脂肪型的通城猪和太湖猪为动物样本，分析了血清中激素敏感脂酶，肌肉组织中氨基酸组成、含量和克分子比，分离纯化了肌细胞和脂肪细胞质和膜，并对其膜蛋白进行了SDS－PAGE比较分析。结果表明，脂肪型的通城猪血中激素敏感脂酶活性比瘦肉型的长白猪高近3倍，2猪种中雌雄差异不显著。脂肪型的通城猪与太湖猪肌细胞蛋白质中的氨工酸组成及含量十分相似，瘦肉型的斯格和长白猪的氨基酸含量却显著地高于脂肪型的通城和太湖猪。氨基酸组分中，瘦肉型猪的3种碱性氨基酸（Lys、Arg和His）、2种典型的疏水氨基酸（Ｌeu和lle)、易形成疏水核的苯丙氨酸以及形成二硫键的半胱氨酸均显著地高于脂肪型，这与瘦肉型猪蛋白质的溶解性能较差相关。蛋白质的SDS－PAGE分析发现，脂肪型猪肌细胞质中存在一种一约44．7kDa，与脂肪沉积相关的蛋白质。脂肪细胞膜中的94kDa蛋白也显示也脂肪沉积的遗传特征相关，另外，脂肪型的通城猪性成熟前后肌细胞膜上存在蛋白质组分差异。     

贵州地方猪胶原蛋白特性及相关基因组织表达研究

本实验为探索贵州地方猪胶原蛋白特性及相关基因COL3A1、LOX的mRNA组织表达规律,以柯乐猪、宗地花猪、杜大长杂交猪为研究对象,采用酶联免疫吸附实验探索贵州地方猪胶原蛋白含量及特性,实时荧光定量PCR法检测COL3A1、LOX基因mRNA组织表达规律,结果表明:3个猪种皮下脂肪胶原蛋白含量均高于背最长肌。宗地花猪皮下脂肪和背最长肌组织胶原蛋白含量极显著高于杜大长杂交猪,柯乐猪2个组织胶原蛋白含量显著高于杜大长杂交猪;HP交联含量在背最长肌组织最高的为宗地花猪,在皮下脂肪组织最低的为宗地花猪;LP交联含量在2个组织中均是宗地花猪最低;COL3A1基因在宗地花猪皮下脂肪中表达量较高,表明COL3A1基因表达水平与胶原蛋白含量分布呈正相关;而LOX基因表达趋势与HP和LP交联含量存在相关性,对HP和LP交联含量有重要影响。     

脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪组织中凋亡相关基因表达的影响

探讨脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪组织Bcl-xl、Bax-αmRNA表达的影响。将160头体重27.0 kg左右的杜×(长·梅)三元杂交商品猪,随机分成试验组和对照组,每组设4个重复,每个重复20头,公母各半。在试验组基础日粮中添加75 mg/kg脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体(简称AIg Y)。饲喂104 d后,从每组选出体重相近的12头猪(公母各半)进行屠宰,分离背部皮下脂肪组织、肾周脂肪组织和肠系膜脂肪组织,并称重,同时采集脂肪组织样,采用RT-PCR检测Bcl-xl、Bax-αmRNA表达水平,并测定各部位脂肪组织DNA、RNA浓度,计算RNA、DNA含量以及RNA/DNA比值。结果显示:试验组皮下、肾周、肠系膜脂肪组织DNA含量分别比对照组下降了38.42%(P0.01)、39.92%(P0.05)和39.16%,而DNA、RNA浓度以及RNA/DNA比值差异不显著;与对照组相比,试验组脂肪组织Bcl-xl mRNA相对表达丰度下降了18.13%(P0.05);Bax-αmRNA相对表达丰度升高了13.79%(P0.05)。提示:日粮中添加脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体使Bax-α与Bcl-xl基因表达失去平衡,可能诱导猪的脂肪细胞凋亡,上调的Bax-α和下调的Bcl-xl mRNA表达说明AIg Y是通过线粒体途径诱导脂肪细胞凋亡的。     

The expression of genes related to adipocyte differentiation in pigs

The purpose of this study was to detect differential expression of genes related to adipocyte differentiation in pigs by suppression subtractive hybridization. Adipocytes and stromal vascular cells (a fraction containing preadipocytes) from pig adipose tissue were isolated for mRNA extraction. The cDNA from preadipocytes was subtracted from the cDNA from adipocytes. The subtracted gene fragments were cloned into pGEM-T Easy TA cloning vector. We selected 384 clones for gene sequence determination and for further analysis. These genes were subjected to a differential screening procedure to confirm the differential expression of genes between the 2 cell types. We found that at least 36 genes were highly expressed in the adipocytes compared with preadipocytes. Among these, 6 genes including 2 novel genes with the greatest differences were selected and confirmed by Northern analysis. We found that angiotensin I-converting enzyme (ACE), ataxia-telangiectasia mutated protein (ATM), calpain 1, and stearoyl coenzyme A desaturase 1 (SCD1) were highly expressed in adipocytes compared with preadipocytes (P < 0.05). The relative mRNA abundance of ACE, ATM, calpain 1, SCD1, and 2 novel genes discovered in the current study was increased at the later stages of adipocyte differentiation (P < 0.05). The results confirmed that the genes involved in lipid metabolism and adipocyte differentiation were highly expressed in porcine adipocytes. However, further investigation is needed to demonstrate specific functions of the novel genes discovered in the current study.     

Cellularity of developing subcutaneous adipose tissue in Landrace and Meishan pigs: Adipocyte size differences between two breeds

Experiments were designed to compare the adipocyte cellularity of subcutaneous adipose tissue between growing Landrace (low backfat) and Meishan (high backfat) pigs at 1 week, 3 weeks, 6 weeks, 3 months and 5 months of age. As pigs aged, body weight and backfat thickness of both breeds significantly increased. When compared at equal ages, backfat thickness adjusted to equal body weight was greater for Meishan pigs. The mean diameter of fat cell size also increased with age, and by 6 weeks adipocytes from both outer and inner layers of subcutaneous adipose tissue were larger in Meishan pigs. At 5 months, approximately 80% of the adipose tissue mass in Meishan pigs was attributable to adipocytes measuring 95–165 µm in diameter, whereas adipocytes of 75–145 µm comprised most of the tissue mass in the Landrace. Although the contribution of smaller adipocytes (25–45 µm) to the tissue volume was negligible, both breeds showed a biphasic diameter distribution at all ages, suggesting that adipocyte hyperplasia is still active. Our results demonstrate that cellularity differences exist between the subcutaneous adipose tissues of Landrace and Meishan pigs, and adipocyte hypertrophy is the most overwhelming contributor to the greater backfat deposition for Meishan pigs.     

猪乳腺细胞分离培养及EGFP基因转化

本研究旨在从猪乳腺组织中分离得到上皮细胞和成纤维细胞,并将EGFP基因导入这些细胞.利用乳腺细胞堵养体系从成年猪乳腺组织中分离培养上皮细胞和成纤维细胞,并利用脂质体介导转染技术将EGFP基因导入这些细胞.结果,从成年猪乳腺组织中成功分离培养出上皮细胞和成纤维细胞,获得转EGFP基因上皮细胞和成纤维细胞.上皮细胞呈短梭形或多角形,细胞之间紧密相靠,互相衔接,连接成片;细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2～4枚,比较明显.成纤维细胞呈长梭形.结果表明,可以从猪乳腺组织中分离上皮细胞和成纤维细胞,EGFP可以在这些细胞中表达.     

猪甘油三酯水解酶和激素敏感脂酶基因表达规律的研究

利用半定量RT-PCR法分析比较了甘油三酯水解酶(Triacylglycerol hydrolase,TGH)和激素敏感脂酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)基因在不同猪种、不同发育阶段及不同部位脂肪组织中转录表达的差异,探讨其在猪脂肪组织的表达规律。结果显示,脂肪型个体TGHmRNA表达丰度显著低于瘦肉型和杂交型个体,成年猪较初生仔猪低,皮下、腹膜和内脏脂肪组织中TGH表达量依次递增;其变化规律与HSL相同。此外,对分离培养的原代前体脂肪细胞通过诱导分化和油红O染色区分分化状态,分析TGHmRNA表达的时序变化,发现TGH在前脂肪细胞中不转录表达,诱导分化后开始表达,且在诱导分化第4天表达量最高,分化第10天表达量下降,达到峰值的时间较HSL早。结果表明,TGH的表达与个体肥胖程度、年龄、脂肪组织部位以及脂肪细胞分化程度相关,同时,在脂肪细胞分化过程中,TGH表达峰值早于HSL,提示TGH在脂肪细胞发育过程中可能较早承担基础脂解作用。