胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

烟草花叶病毒影响烟草细胞活力的初步研究

以普通烟草原生质体为材料,初步研究了烟草花叶病毒(TMV)对寄主细胞活力的影响。结果表明,在接种20 d内,TMV对寄主叶肉细胞的分裂有抑制作用,且对不同细胞的生活力有不同的影响,并通过原生质体的培养做了验证。     

美味猕猴桃原生质体培养及植株再生技术研究

以美味猕猴桃雄株茎段愈伤组织为材料,分离原生质体,并培养在ＫＭ８Ｐ附加０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖和０．０５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的培养基上,用低熔点琼脂糖包埋,６￣７ｄ发生第一次细胞分裂,培养２０ｄ的分裂率为１１．３％,在未添加新鲜培养液的情况下,原生质体再生的细胞可持续分裂至８０ｄ左右,并形成２￣３ｍｍ大小的愈伤组织,然后采用二步诱导分化法将原生质体来源的愈伤组织诱导分化出绿苗,再诱导生根,形成完整的小植     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

小红毛菜原生质体的分离及培养

用蛋白酶和细菌酶分离出来的小红毛菜原生质体，在适宜的温度，光照下，具有很强的再生能力，培养２－３天，原生质体产生细胞壁，然后分裂成二个独立的细胞，经培养，这些细胞有的还能重复同样的分裂，使单细胞数目剧增，这些细胞经诱导培养能萌发成小红毛菜。     

芸苔属两个种原生质体的分离和培养

由甘蓝(Brassica oleracea)和芜菁(Brassica rapa)黄化小苗子叶和下胚轴分离出大量有活力的原生质体,并成功地进行了培养。30小时后发生第一次分裂。下胚轴原生质体分裂频率明显高于子叶原生质体。除芜菁子叶原生质体外,其余材料的原生质体均能持续分裂,20天后形成肉眼可见的愈伤组织。在 MS 培养基上,来源于甘蓝子叶原生质体的愈伤组织分化出根,其余的未见分化现象。     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株

[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系.     

大豆原生质体愈伤组织的体细胞胚胎发生(英文)

在改良MS培养基上从5个大豆品种成熟种子来源的幼苗未展开叶片上诱导出愈伤组织,利用2个月月龄的这些愈伤组织在摇床上建立了细胞悬浮培养系,细胞悬浮培养系每1至2周转培1次,并用于原生质体分离,转培后3到5天的细胞经酶解后原生质体的产量最高,纯化后的原生质体用3种方法进行培养,即液体培养法、琼脂包埋法和琼脂底层法,在琼脂底层法中,培养皿底层先浇上无甘露醇的琼脂培养基,而原生质体则悬浮在2到4毫升含0.45 mol甘露醇的培养基中,3种方法以琼脂底层法最佳,原生质体在培养后2到3天内能见到第1次细胞分裂,在适当的条件下1周内高达80％的原生质体发生分裂,置板频率一般在40％到60％之间,5个供试品种中4个的原生质体愈伤组织在固体和液体培养中出现体细胞胚胎发生,在液体培养条件下得到了大量子叶和胚根发育良好的体细胞胚,但由于这些胚未进一步萌发,故未能得到完整的再生植株。     

甘薯(Ipomoea batatas)原生质体的分离、培养与根的分化

用甘薯品种农林17号(中紫)的叶柄分离原生质体,对其在添加各种浓度的萘乙酸和激动素的改良细胞薄层培养基中进行悬浮培养。培养1～2 d 后,原生质体再生细胞壁,培养2～3 d 后,再生细胞发生第一次分裂,持续的细胞分裂形成小愈伤组织。悬浮培养的结果表明萘乙酸和激动素的适宜浓度分别为2.0～5.0mg/L 和1.0～5.0mg/L。此后,将小愈伤组织转移到MS 固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长。本试验达到根的分化.     

苜蓿与红豆草体细胞杂交的研究及条件

无臌胀病苜蓿品种的育种计划的可能突破口,是利用生物技术把单宁基因导入到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中去。本文首次报道了紫花苜蓿与红豆草(Onobrychis viciifolia Scop.)原生质体融合的可能性和条件,进而将红豆草的单宁基因导入到苜蓿中去。本实验结果证明苜蓿与红豆草的原生质体融合是可能的,通过基因型选择,选择同步分裂的苜蓿和红豆草细胞系,从其悬浮培养细胞系中分离原生质体,将两者混合悬浮在0.1mMCaCl_2 0.6M 甘露醇溶液中(pH5.6),原生质体总密度为3.6×10~5/ml(苜蓿占2.3×10~5/ml,红豆草占1.3×10~5/ml),在1.00～1.25 KV/cm 电场强度下,脉冲次数1～3次,其异核融合细胞频率可提高到26.7～40.9%,并且其异核体仍能较好地分裂,可以分裂2～3次,个别分裂4次,形成小细胞团,但植板率很低,未能持续分裂形成愈伤组织。建议为了提高异核体的植板率,电场强度应低于1.25KV/cm,甚至低于1.00KV/cm,脉冲次数1～2次为宜,以减少电场对细胞的损害。同时提高原生质体培养密度,改良培养条件和方法。如何保证异核体持续分裂和高的植板率是今后研究的关键问题。     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料，经不同液体培养基（Ｂｐ１，Ｂｐ２，Ｂ１）浅层培养，再生细胞高频分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经扩增后转移至分化培养基上诱导植株分化，从这两种原生质体获得了再生植株。在原生持培养过程中，原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有要分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系基大。在植株分化时，谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很促进作用。另外，原生质体的来源...     

棉花愈伤组织原生质体的分离、培养与分裂

从陆地棉的下胚轴愈伤组织中分离出原生质体.在培养期间,原生质体再生出细胞壁,接着又分裂、形成了多细胞群落.原生质体的存活和分离,需要25℃以上的温度条件,培养基中要有硝酸铵和氯化钙.     

葡萄原生质体培养中若干因素的研究

试验结果表明,处于对数生长期、再生能力强的培养细胞有利于原生质体分离和培养。原生质体分离和初期培养的适宜渗透浓度为0.5M;固体包埋法的效果明显优于液体培养,前者分裂率为后者的3.8倍,达13.8%;外源激素浓度以 B_5基本培养基添加 NAA 2.0mg/L,BA 2.0mg/L,原生质体分裂率最高;葡萄糖取代常规稳压剂甘露醇,效果显著,细胞分裂率是后者的2.6倍。     

抗氧化剂对杏和中国李原生质体培养的影响

以杏和中国李种胚愈伤组织为试材,研究了抗氧化剂对原生质体培养效果的影响。结果表明,在酶解液和培养基中加入聚乙烯吡咯烷酮对提高原生质体产量、活力和分裂能力具有显著的效果。在培养基中加入不同浓度的甘氨酸和抗坏血酸也可提高中国李原生质体培养的分裂频率和植板率。     

甘蓝型油菜与紫罗兰融合体培养的影响因素研究

对影响甘蓝型油菜与紫罗兰下胚轴原生质体融合后的融合体培养因素进行了研究。结果表明:采用液体浅层培养,以改良的KM8p为培养基附加2,4-D1.5 mg/L,NAA0.5 mg/L,6-BA0.5 ml/L,以蔗糖0.3 mol/L和葡萄糖0.1 mol/L作渗透稳定剂进行培养效果最好;原生质体培养3～6 d,细胞发生第1次分裂,第7天时分裂频率最高为13.8%;35天后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,其植板率最高为6.5%。     

培养条件对大白菜无菌苗叶肉原生质体培养的影响

以市售栽培品种城青2号、高脚白大白菜无菌苗叶肉原生质体为材料,分别就激素、原生质体的培养密度、培养方式、多胺类物质对细胞分裂频率以及后期发育的影响进行了系统的研究.还探讨了在原生质体培养10天后加入提高了pH值的培养液来控制细胞褐化的可能性.     

紫外线对柑桔原生质体的影响初探

用强度约为５６μＷ／ｍｍ２的紫外线ＵＶ分别照射Ｐａｇｅ和Ｍｕｒｃｏｔ原生质体３０ｓ、１ｍｉｎ和５ｍｉｎ,发现随着辐照时间的延长,原生质体活力趋于下降。Ｍｕｒｃｏｔ的原生质体较Ｐａｇｅ的原生质体对ＵＶ敏感。辐射１ｍｉｎ和５ｍｉｎ的原生质体在培养过程中未能出现分裂,而是慢慢地发生质壁分离,最后破裂。而辐射３０ｓ的原生质体与对照都恢复分裂形成细胞团并长出愈伤组织。     

几种担子菌菌丝原生质体的分离与再生

本实验从几种食用担子菌的菌丝中运用纤维素酶和β-葡糖醛苷酸酶的混合酶解液分离出原生质体并进行了培养。这些原生质体在培养中再生了管状的初生菌丝,并在继代培养中形成克隆。本论文报道了原生质体从菌丝释放的形态学观察结果,并对原生质体分离与再生的条件进行了讨论。