伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及毒力和耐药性分析

为探究南宁伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的毒力和耐药情况，本研究采集犬、猫粪便拭子，通过分离培养、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、khe基因、毒力基因及耐药基因等方法对细菌特性进行分析。结果显示，分离的菌株中有4株能在麦康凯培养基上形成液状菌落，轻挑拉丝且镜检为短杆状革兰氏阴性菌，疑为肺炎克雷伯氏菌。16S rRNA测序结果显示，分离菌与肺炎克雷伯氏菌同源性达99%，同时肺炎克雷伯氏菌特异性基因（khe）阳性。其中，分离株GXKP-C14、GXKP-D15对大部分临床常用抗菌药物敏感，分离株GXKP-D1则表现出高水平多重耐药，分离株GXKP-D4耐药性稍低于GXKP-D1，对临床常用药氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、四环素、多西环素、呋喃妥因、复方新诺明表现耐药，对头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多黏菌素等敏感。部分菌株携带tet（A）、QnrS、bla_SHV、sul2、mcr-1等耐药基因和WabG毒力基因。本研究结果为犬、猫源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及治疗提供了试验依据。同时，黏菌素耐药基因mcr-1的检出将为多黏菌素的耐药性控制和合理使用提供参考。     

狐狸源肺炎克雷伯氏菌分离株生物学特征分析

为确定狐狸源肺炎克雷伯氏菌的致病性、耐药性、耐药机制及其生物被膜(BF)形成能力,本研究对分离自病死狐狸的10株肺炎克雷伯氏菌进行形态特征、培养特性、生化试验、16S r RNA鉴定及khe基因鉴定,利用K-B法检测其药敏性,利用PCR方法检测了其耐药基因、荚膜血清型、毒力基因,利用96孔微量板测定BF形成能力并进行了分离菌对小鼠的致病性试验。结果显示,这10株肺炎克雷伯氏菌均对多种常用抗菌药物耐药,均可以引起小鼠发病或死亡,但BF形成能力有明显差异。部分菌株携带floR、mcr-1、TEM等耐药基因和wabG、fimH、uge、rmpA等毒力基因,89F-2、58F-2、60N-1属于K1血清型。本研究结果为狐狸源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及防治提供了实验依据。同时,本实验首次从狐狸源肺炎克雷伯氏菌中检测到粘菌素耐药基因mcr-1,这将为黏菌素的临床使用和风险评估提供技术参考。     

猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析

为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3%),其次是氯霉素(63.9%)。对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因。结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强。本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。     

狐狸源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及毒力检测

从濒死期蓝狐肺脏中分离到1株革兰阴性短杆菌,并对分离菌株进行形态学观察、16S rRNA鉴定、全自动细菌生化鉴定仪鉴定及khe基因鉴定,在此基础上,完成了分离菌株的分型、人工感染小鼠试验、药敏试验及毒力基因检测等。最终鉴定结果显示,该分离菌株为K20型肺炎克雷伯菌,命名为SWKp17;同时,Vitek细菌鉴定仪鉴定该菌为肺炎克雷伯菌。人工感染试验和药敏试验结果表明,该细菌有致病性和多重耐药性。其对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为2.9×10~7 CFU;对三代头孢菌素类、氯霉素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、磺胺类耐药,但对亚胺培南和多黏菌素敏感。该菌株具有fim、ureA、mrkD及wabG毒力基因,但不具有rmpA、kfu、alls、iroNB、ybtA、uge、iucB等毒力基因。结果表明,引起本次狐狸肺炎的致病菌为非K1、K2、K3、K5、K20、K54及K57型肺炎克雷伯菌,本研究为临床治疗由该菌引起的狐狸肺炎提供参考依据。     

1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性分析

旨在了解从猪肺组织中分离得到的肺炎克雷伯菌的致病性和药物敏感性，本研究通过形态学鉴定、PCR鉴定、16S rRNA基因测序和MLST多位点序列分析等方法对分离菌株进行鉴定，毒力基因检测和小鼠攻毒试验确定分离株的致病性，并采用抗生素和中药分析药物敏感性。结果表明，分离菌株为革兰阴性杆菌，生化结果与肺炎克雷伯菌生化特性相符；16S rRNA基因序列比对分析和系统发育树构建确定分离菌株为肺炎克雷伯菌，命名为肺炎克雷伯菌KP-0728；MLST分析显示，KP-0728属于ST-35型，与ST-875汇聚在一支；KP-0728含有uge、wabG、fimH、kfu 4种毒力基因，感染小鼠可导致小鼠多个器官不同程度的病变，高剂量感染可导致小鼠死亡；KP-0728携带bla-SHV、sul2、tetA、aadA1 4种耐药基因；KP-0728对氨苄西林、亚胺培南、庆大霉素、四环素、复方新诺明耐药；对头孢曲松、头孢氨苄、头孢美唑、阿奇霉素、氧氟沙星、多黏菌素B、替考拉宁敏感；9味中药体外抑菌试验结果显示，茯苓对肺炎克雷伯菌分离株KP-0728的抑菌效果最为显著。动物治疗试验相关数据显示茯苓对KP-0728具有体内抑制作用。综上，本研究分离到1株猪源ST-35型肺炎克雷伯菌，携带多种毒力基因和耐药基因，人工感染小鼠可致小鼠发病，半数致死量(LD₅₀)为4.56×10⁶ CFU，对中药茯苓和多种抗生素敏感，研究结果为肺炎克雷伯菌的防治和疫苗研究提供了参考依据。     

鸡源肺炎克雷伯菌的分离鉴定和耐药性分析

为探究鸡源肺炎克雷伯菌的流行性和耐药情况,本试验采集蛋鸡新鲜粪便60份(雏鸡36只/产蛋鸡24只),通过分离培养、VITEK2 Compact生化鉴定、特异性基因PCR扩增和微量肉汤稀释法对分离菌株进行了菌种鉴定、耐药表型、耐药基因以及毒力基因检测。结果显示,从粪便样本中共分离出48株肺炎克雷伯菌;分离菌株对氨苄西林、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑和复方新诺明表现出高度耐药,耐药率范围为50.00%~100.00%,对奥格门丁、庆大霉素、头孢类和喹诺酮类药物耐药程度较低,耐药率范围为14.58%~27.08%,对黏菌素和美罗培南敏感;75.02%的菌株表现为多重耐药,最高表现为8重耐药,占10.42%。耐药基因和毒力基因检测结果显示,48株肺炎克雷伯菌共检出aadA1、tetA、oqxA、oqxB、blaTEM和qnrB 等6种耐药基因,以及entB、wabG、uge和kfuBC 等4种毒力基因,本试验结果可为临床用药、动物源细菌耐药性监测和健康养殖提供数据支持。     

禽源耐黏菌素大肠杆菌耐药性分析

为研究禽源大肠杆菌的黏菌素耐药及mcr-1(mobile colistin resistance)基因携带情况并检测耐黏菌素大肠杆菌的耐药表型,分析其多重耐药性,从湖北不同地区分离并鉴定大肠杆菌117株,耐黏菌素大肠杆菌的比例为27.35%(32/117),其中mcr-1基因携带率为71.88%(23/32)。23株mcr-1阳性菌株的黏菌素MIC值均介于4～16μg/mL之间,为低水平的耐药。其中22株呈现出不同程度的多重耐药性,并对四环素、复方新诺明、氨苄西林的耐药率较高(85%),其次是萘啶酸和环丙沙星(73.91%);对阿奇霉素和氨曲南的耐药率较低(20%);未发现对阿米卡星和亚胺培南耐药的菌株。mcr-1阳性菌株对萘啶酸、环丙沙星、头孢曲松及头孢噻肟这4种抗生素的耐药率显著高于mcr-1阴性菌株(P0.05)。本研究为mcr-1介导的耐黏菌素机制研究提供了参考数据。     

犬源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

为了对采集自天津市某动物医院犬子宫蓄脓脓汁进行病原菌的鉴定,试验采用分离培养方法进行病原菌的分离,同时对分离到的菌株进行生化试验、药敏试验、16S rRNA测序鉴定,对测序结果进行同源性分析并构建系统遗传进化树。结果表明:共分离得到两株(Fl-rj、Fs-rj)革兰氏阴性短杆菌,两株分离菌的生化特性基本一致,且都与肺炎克雷伯氏菌的生化特性相似。两株分离菌16S rRNA基因测序结果相似度高达99.8%,且两株分离菌与肺炎克雷伯氏菌(NR_117683.1)的同源性分别高达99.6%和99.9%,在系统进化树中位于同一分枝。两株分离菌均对氨曲南、头孢唑林、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、妥布霉素敏感,对氨苄西林、头孢噻吩、麦迪霉素、哌拉西林耐药。说明本试验分离菌株目前耐药性不强,可使用头孢类药物抑制。     

一株猪源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性、耐药基因的检测

为了确定发病母猪组织是否感染病原菌及调查病原菌耐药情况,试验对发病母猪组织进行细菌分离培养,经过培养观察、生化试验、16S rRNA测序确定分离菌株,对分离菌株进行药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因检测、常见血清型分型及毒力基因检测。结果表明:分离得到一株肺炎克雷伯氏菌。分离菌株的16S rRNA测序结果与NCBI上18株肺炎克雷伯氏菌参考菌株序列同源性均在99%以上。分离菌株接种在血琼脂培养基上会发生α溶血现象,且具有多重耐药性,携带四环素类tet耐药基因,氨基糖苷类aph(3′)-Ia、strA、strB耐药基因,磺胺类sul 1、sul 2耐药基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaSHV,与耐药表型结果一致。分离菌株血清型分型为K20型,含有ureA、wabG、uge毒力基因。在小鼠致病性试验中,以浓度为6.15×10~8cfu/mL的菌液进行攻毒,能够使小鼠在22 h内死亡,表明分离菌株对小鼠具有致病性。说明本试验所分离得到的猪源肺炎克雷伯氏菌具有严重的耐药性和强致病性。     

沧州地区猪源肺炎克雷伯菌分离菌株、耐药性及耐药基因检测

为了分析沧州地区猪源肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因流行情况,试验采用细菌学常规的分离鉴定方法和16S rRNA PCR法,从沧州地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、肝脏、鼻拭子等病料组织123份,分离得到了45株致病性肺炎克雷伯菌。采用K-B药敏纸片法和PCR法分别检测45株致病性肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因流行情况。结果显示,45株致病性肺炎克雷伯菌分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考等9种药物耐药性较高,耐药率在55.6%以上;对其他药物耐药率在13.3%～22.2%;分离菌株呈现多重耐药现象,耐11、10种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的24.4%、28.9%;bla_(TEM)、ant(3″)-Ⅰa、aph(3′)-Ⅱa、sul2、sul3五种耐药基因检出率较高,检出率在80.0%以上;bla_(SHV)、floR、qnrA三种耐药基因检出率在37.8%～46.7%;bla_(CTX-M)、mcr-1、qnrS、rmtB四种耐药基因未检出。说明该地区分离的45株致病性肺炎克雷伯菌耐药性严重,呈现多重耐药现象,携带耐药基因复杂。     

四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了分析四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌耐药性并确定其耐药基因的携带情况，本试验采集了四川地区不同养殖场患呼吸道疾病牦牛肺脏、咽拭子、鼻拭子共127份病料组织，分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌，并采用微量肉汤稀释法结合PCR扩增法检测43株肺炎克雷伯氏菌的耐药性和耐药基因携带情况。结果表明：43株肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药率较高，为65.12%~90.70%；对阿米卡星、氟苯尼考、多黏菌素B、大观霉素4种药物的耐药率在20.93%~48.84%之间；对头孢噻呋、恩诺沙星、环丙沙星3药物的耐药率在18.60%~25.58%之间；多数筛选分离得到的菌株均呈现出多重耐药性，耐9、10种药物的菌株最多，分别占分离菌株的23.3%和20.9%。通过使用PCR扩增法检测分离菌携带的耐药基因情况，结果表明：bla_TEM、bla_SHV、sul2、sul3、floR 5种耐药基因检出率较高，检出率在62.8%~69.8%之间；ant （3″）-Ⅰa、aph （3'）-Ⅱa、aac （6'）-Ⅰb、aacC2 4种耐药基因检出率较低，检出率在7.0%~20.9%；bla_CTX-M、Mcr-1、qnrA、qnrS、rmtB 5种耐药基因未检出。综上所述，本试验中分离得到肺炎克雷伯氏菌具有较强的耐药性并携带有较多的耐药基因，为了更好的促进四川省牦牛养殖产业的发展，应注意避免滥用抗生素并通过药敏试验对症下药。     

2022年青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌流行情况

为了分析青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,并为多黏菌素的临床应用提供参考依据,本试验于山东省青岛市屠宰场采集鸡源和鸭源粪便样本,通过多黏菌素培养基分离大肠杆菌;分别采用琼脂稀释法、PCR、接合试验和全基因组测序,分析菌株的药物敏感性、耐药基因和毒力因子流行特征、系统发育群、mcr-1基因可转移性和遗传环境。结果显示,本试验从133份粪便样本中共分离获得26株多黏菌素耐药大肠杆菌,总分离率为19.55%(26/133),其中鸭源菌株分离率(24.24%,16/66)高于鸡源菌株(14.93%,10/67)。药物敏感性分析结果显示,所有菌株对替加环素和美罗培南全部敏感,对其余测试药物耐药率较高(42.31%～100%),所有分离菌株均存在多重耐药现象,鸡源菌株多重耐药较为分散,而鸭源菌株多重耐药集中于6和9重。26株分离菌株均携带黏菌素耐药基因mcr-1;其余耐药基因携带率介于7.69%～96.15%,tet(B)基因仅在鸡源菌株中携带(20.00%),qnrS基因在鸡源菌株中携带率(30.00%)显著低于鸭源(100%)。毒力因子检测发现,tarT、aer、pap和neu...     

北京地区宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征研究

为研究宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况,同时了解宠物犬携带bla_(CTX-M)基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征,本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌,通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株,运用PCR检测bla_(CTX-M)基因,药物敏感性试验测定bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型,PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示,共分离到7株bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌,3株来自宠物肛拭子,4株来自宠物鼻拭子;药敏试验结果显示,7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药,但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示,其中3株细菌相似度为100%,而另外4株细菌相似度差异较大(30%)。全基因组结果显示,7株菌共有5个ST分型,bla_(CTX-M)基因分离的亚型为CTX-M-14型(n=5)和CTX-M-3型(n=2),同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出,目前宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低,但其多重耐药性较严重,本研究分离的耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(SHV)亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足,需进一步关注宠物细菌耐药性,为后续防控提供依据。     

鸽源ST443肺炎克雷伯菌的分离鉴定和生物学特性分析

为查明引起江苏省某养殖场赛鸽肺炎的病原及其生物学特性,本试验从患有呼吸道疾病的赛鸽肺组织中分离到1株肺炎克雷伯菌,通过形态学、生化鉴定、PCR扩增和16S rRNA基因测序对分离菌株进行鉴定,并采用多位点序列分型(MLST)、毒力基因检测、荚膜血清型分型、wzi基因测序、致病性分析、生物被膜形成能力测定、耐药基因检测、药敏试验和中药体外抑菌试验对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示,分离菌株为革兰阴性杆菌,显微镜下可见两端钝圆、杆状菌体,生化鉴定、khe基因PCR扩增和16S rRNA基因进化发育树分析确定其为肺炎克雷伯菌;MLST分型为ST443型;该菌株携带fimH、uge和wabG三种毒力基因;wzi基因测序鉴定分离菌株荚膜血清型为K16型;该菌株人工感染健康雏鸡可导致雏鸡多个器官出现不同程度的病变,半数致死量(LD₅₀)为4.68×10⁹ CFU/mL;分离菌株具有中等生物被膜形成能力,携带bla_SHV、bla_TEM、tetM和sul1四种耐药基因,对头孢曲松、头孢美唑、丁胺卡那、复方新诺...     

四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了分析四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌耐药性并确定其耐药基因的携带情况,本试验采集了四川地区不同养殖场患呼吸道疾病牦牛肺脏、咽拭子、鼻拭子共127份病料组织,分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌,并采用微量肉汤稀释法结合PCR扩增法检测43株肺炎克雷伯氏菌的耐药性和耐药基因携带情况。结果表明:43株肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药率较高,为65.12%～90.70%;对阿米卡星、氟苯尼考、多黏菌素B、大观霉素4种药物的耐药率在20.93%～48.84%之间;对头孢噻呋、恩诺沙星、环丙沙星3药物的耐药率在18.60%～25.58%之间;多数筛选分离得到的菌株均呈现出多重耐药性,耐9、10种药物的菌株最多,分别占分离菌株的23.3%和20.9%。通过使用PCR扩增法检测分离菌携带的耐药基因情况,结果表明:bla_(TEM)、bla_(SHV)、sul2、sul3、floR 5种耐药基因检出率较高,检出率在62.8%～69.8%之间;ant(3″)-Ⅰa、aph(3′)-Ⅱa、aac(6′)-Ⅰb、aacC2 4种耐药基因检出率较低,检出率在7.0%～20.9%;bla_(CTX-M)、Mcr-1、qnrA、qnrS、rmtB 5种耐药基因未检出。综上所述,本试验中分离得到肺炎克雷伯氏菌具有较强的耐药性并携带有较多的耐药基因,为了更好的促进四川省牦牛养殖产业的发展,应注意避免滥用抗生素并通过药敏试验对症下药。     

青岛地区鸡源bla_(NDM)与mcr-1耐药基因的流行性试验

为了解青岛地区鸡源大肠杆菌中碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)与黏菌素耐药基因mcr-1流行情况。2018-2019年从青岛地区共采集195份鸡直肠拭子和盲肠内容物,通过选择性培养基筛选目的菌株和16S rRNA菌属鉴定。采用琼脂稀释法测定菌株对10种常见重要抗菌药物的敏感性,通过PCR检测bla_(NDM)与mcr耐药基因并测序。结果共计分离到186株大肠杆菌,其中鸡泄殖腔源98株,鸡盲肠源88株。药敏试验结果显示,分离菌株对阿莫西林、四环素、头孢氨苄耐药率均高于90%;多黏菌素81.2%、庆大霉素88.7%、氧氟沙星86.6%和头孢噻肟87.1%,呈现较高的耐药率;对替加环素(4.8%)则表现低水平耐药率。进一步分析发现,62.9%的测试菌株对8种以上药物耐药,表现多重耐药。耐药基因检测揭示了31.2%(n=58)大肠杆菌携带mcr-1基因,7.5%(n=14)携带bla_(NDM),包括1株bla_(NDM-1)、1株bla_(NDM-9)、12株bla_(NDM-5)。其中6株大肠杆菌株同时携带了bla_(NDM)和mcr-1,包括5株bla_(NDM-5)+mcr-1和1株bla_(NDM-9)+mcr-1。表明山东青岛地区鸡源大肠杆菌耐药菌检出率较高,多重耐药现象严重;且bla_(NDM)和mcr-1存在共同传播。     

苍蝇中产耐NDM型碳青霉烯类肠杆菌的流行情况与耐药性分析

为明确苍蝇对产NDM型碳青霉烯类耐药肠杆菌(NDM-CRE)传播的作用,对2016年9月-2017年9月采集于青岛地区某肉鸡养殖场周边的苍蝇进行NDM-CRE的流行情况与耐药性分析。通过细菌分离,16S rRNA鉴定与bla_(NDM)耐药基因的确认,从120份苍蝇样品中分离出31株碳青霉烯耐药菌株(分离率为25.8%),其中NDM-CRE 16株(分离率为13.3%),分别为大肠杆菌10株(分离率为8.3%)、弗氏柠檬酸杆菌5株(分离率为4.2%)和肺炎克雷伯菌1株(分离率为8.3%)。对16株NDM-CRE进行NDM亚型鉴定,确认10株为bla_(NDM-5),6株为bla_(NDM-9);对其进行16种抗菌药物敏感性测试,结果显示,所有分离株除对替加环素敏感外,对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸钾(2∶1)、美罗培南、头孢唑啉、头孢西丁、头孢噻呋、四环素、土霉素和复方新诺明均耐药;85%以上的分离株对庆大霉素(87.5%)、氟苯尼考(93.8%)、氯霉素(93.8%)和恩诺沙星(87.5%)耐药;46.7%的分离株对氨曲南耐药;18.8%的分离株对多黏菌素E耐药;所有分离株对至少11种抗菌药物耐药,以耐14种抗菌药物菌株最多(n=6)。此外,对分离菌株进行12种耐药基因检测,结果发现,其至少携带5种耐药基因(bla_(NDM),bla_(TEM-1),sul1,sul2,floR),耐药机制较复杂。研究结果表明,养殖场周边的苍蝇可作为NDM耐药基因的重要载体,可能促进了养殖场、环境及相关人群中NDM-CRE的传播,对养殖产业的健康发展和公共卫生安全具有较大的威胁,有必要对其进行消除。     

1株雏鸡致病性肺炎克雷伯菌分离鉴定与系统进化发育分析

为了确定引起雏鸡死亡的病原菌,从发病致死的雏鸡体内分离1株病菌,采用细菌常规的分离鉴定、16S rRNA基因测序、致病性试验、K-B药敏纸片法等分别对分离菌株进行鉴定、致病性及耐药性检测。结果显示,分离株鉴定为致病性肺炎克雷伯菌;其16S rRNA基因序列与GenBank登录的12株肺炎克雷伯菌参考株同源性在98%～99%之间,与肺炎克雷伯菌参考株KP262416.1聚于一支,与KJ803938.1聚于一大支,且与2株参考株存在密切的遗传进化关系;该菌株对头孢曲松、头孢克肟、恩诺沙星等4种药物敏感;对环丙沙星、新霉素、丁胺卡那霉素等6种药物中敏;对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等6种药物耐药。     

犬源旱獭埃希氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为了对采集自天津农学院附属动物医院确诊为子宫蓄脓的10岁母犬子宫脓汁进行病原菌鉴定,试验采用分离培养方法进行病原菌的分离,同时对分离到的菌株进行生化试验、药敏试验、16S rRNA测序鉴定。结果表明:分离菌菌落呈黏液型,染色镜检为革兰氏阴性菌,生化试验结果同埃希氏菌属,PCR扩增16S rRNA基因测序与旱獭埃希氏菌同源性最高,确定分离菌为旱獭埃希氏菌(Escherichia marmotae)。该分离菌对头孢噻吩、氨曲南、头孢呋辛、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林耐药;对头孢唑啉中度敏感;对氨苄西林、头孢西丁、氧氟沙星、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、麦迪霉素高度敏感。说明本试验分离的犬源旱獭埃希氏菌的耐药性比较强,应引起重视。     

石河子地区某规模化奶牛场肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

为了阐明引起石河子地区某规模化奶牛场犊牛呼吸道症状的主要细菌性病原体及其生物学特性，本研究采集2~6月龄犊牛鼻拭子与肛拭子各39份，通过细菌分离培养、形态学观察、生化分析、PCR扩增16S rRNA基因和溶血酵素（khe）基因、药敏试验和小鼠致病性试验等方法对分离菌株的生物学特性进行分析。结果显示，分离菌株中有3株在MIAC平板上形成紫红色带有沉淀环的菌落（鼻拭子1株，肛拭子2株），且镜检为革兰氏阴性短杆菌，疑为肺炎克雷伯菌。全自动微生物分析系统显示，分离株与肺炎克雷伯菌相似性均为96%；PCR扩增16S rRNA基因测序结果显示，分离株与GenBank数据库中肺炎克雷伯菌核苷酸相似性在96.5%~99.8%之间，肺炎克雷伯菌特异性基因khe阳性且相似性达99%以上；药敏结果显示，分离菌株对青霉素类、头孢菌素类、一代和二代氨基糖苷类、四环素类、一代大环内酯类、磺胺类、多烯类、林可酰胺类抗菌药呈现出不同程度的耐药；对三代氨基糖苷类、二代大环内酯类、氯霉素类、多肽类、喹诺酮类抗菌药敏感，且呈现不同程度的多重耐药性；致病性试验结果表明，分离菌株均可不同程度导致小鼠死亡且以鼻拭子分离株致病性较强。本研究成功分离鉴定石河子地区规模化奶牛场引起犊牛呼吸道症状的肺炎克雷伯菌3株，并阐明分离菌的部分生物学特性，为新疆地区牛源肺炎克雷伯菌病的检测、诊断及临床治疗提供技术支撑。