四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了分析四川地区牦牛源肺炎克雷伯氏菌耐药性并确定其耐药基因的携带情况,本试验采集了四川地区不同养殖场患呼吸道疾病牦牛肺脏、咽拭子、鼻拭子共127份病料组织,分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌,并采用微量肉汤稀释法结合PCR扩增法检测43株肺炎克雷伯氏菌的耐药性和耐药基因携带情况。结果表明:43株肺炎克雷伯氏菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶4种药物耐药率较高,为65.12%～90.70%;对阿米卡星、氟苯尼考、多黏菌素B、大观霉素4种药物的耐药率在20.93%～48.84%之间;对头孢噻呋、恩诺沙星、环丙沙星3药物的耐药率在18.60%～25.58%之间;多数筛选分离得到的菌株均呈现出多重耐药性,耐9、10种药物的菌株最多,分别占分离菌株的23.3%和20.9%。通过使用PCR扩增法检测分离菌携带的耐药基因情况,结果表明:bla_(TEM)、bla_(SHV)、sul2、sul3、floR 5种耐药基因检出率较高,检出率在62.8%～69.8%之间;ant(3″)-Ⅰa、aph(3′)-Ⅱa、aac(6′)-Ⅰb、aacC2 4种耐药基因检出率较低,检出率在7.0%～20.9%;bla_(CTX-M)、Mcr-1、qnrA、qnrS、rmtB 5种耐药基因未检出。综上所述,本试验中分离得到肺炎克雷伯氏菌具有较强的耐药性并携带有较多的耐药基因,为了更好的促进四川省牦牛养殖产业的发展,应注意避免滥用抗生素并通过药敏试验对症下药。     

沧州地区猪源肺炎克雷伯菌分离菌株、耐药性及耐药基因检测

为了分析沧州地区猪源肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因流行情况,试验采用细菌学常规的分离鉴定方法和16S rRNA PCR法,从沧州地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、肝脏、鼻拭子等病料组织123份,分离得到了45株致病性肺炎克雷伯菌。采用K-B药敏纸片法和PCR法分别检测45株致病性肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因流行情况。结果显示,45株致病性肺炎克雷伯菌分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考等9种药物耐药性较高,耐药率在55.6%以上;对其他药物耐药率在13.3%～22.2%;分离菌株呈现多重耐药现象,耐11、10种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的24.4%、28.9%;bla_(TEM)、ant(3″)-Ⅰa、aph(3′)-Ⅱa、sul2、sul3五种耐药基因检出率较高,检出率在80.0%以上;bla_(SHV)、floR、qnrA三种耐药基因检出率在37.8%～46.7%;bla_(CTX-M)、mcr-1、qnrS、rmtB四种耐药基因未检出。说明该地区分离的45株致病性肺炎克雷伯菌耐药性严重,呈现多重耐药现象,携带耐药基因复杂。     

河南驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性

为了分析驻马店地区猪源肺炎克雷伯氏菌分离菌株生物学特性,从驻马店地区不同养殖场中采集患呼吸道疾病猪肺脏、鼻拭子等病料组织74份中分离得到了43株肺炎克雷伯氏菌。采用人工感染小鼠致病性试验、PCR方法和K-B药敏纸片分别检测49株肺炎克雷伯氏菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,30株肺炎克雷伯氏菌对小鼠具有很强的致病性;43株分离菌株以K5、K20为主要流行血清型,分别占分离菌株的37.2%、27.9%;43株分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、大观霉素等7种药物耐药性较高,耐药率在51.2%以上,对其他药物的耐药率在18.6%~234.9%之间,且呈现多重耐药性,耐10、9种药物分离菌株最多,分别占分离菌株的25.6%、27.9%。本试验为该地区猪源肺炎克雷伯氏菌病的防治提供理论基础。     

猪源肺炎克雷伯氏菌耐药性及毒力基因分析

为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析。结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3%),其次是氯霉素(63.9%)。对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因。结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强。本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑。     

西藏部分地区牦牛源肺炎克雷伯菌的分离、鉴定、毒力及耐药基因分析

利用细菌分离纯化、生化鉴定、分子生物学及WHO推荐的K-B纸片法等研究方法,对从西藏不同地区采集的103份牦牛鼻拭子样品进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定,对分离鉴定的疑似菌株进一步进行16S rDNA测序及系统发育分析,荚膜血清学分型、毒力基因和耐药表型及耐药基因检测。结果显示,从西藏林芝市、那曲市分离鉴定出8株牦牛源克雷伯菌,分离率为7.76%;挑取其中2株进行测序,结果显示与重庆牛源KM096433和北京土壤源JQ003560聚为一簇,亲缘关系最近;8株西藏牦牛源克雷伯菌荚膜血清型均为K20型;此外,8株菌株均检测到3种毒力基因mrkD、fimH和wabG,检出率为100%;blaTEM、sul3、tetA和tetA耐药基因检出率分别为100%,100%,75%和75%,其余耐药基因均未检出;药敏试验结果显示,8株菌株对青霉素和氨苄西林耐药率达100%,其次是克拉霉素、四环素和多西环素耐药率达75%,而对喹诺酮类药物,如:环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星强敏感;致病性试验中对照组全部存活,处理组小鼠病死率为80%(4/5),病变主要表现为脾脏肿大。本试验对西藏地区牦牛源肺炎克雷伯菌的流行情况、毒力基因和耐药性进行分析,对牦牛源肺炎克雷伯菌的防制具有重要的指导意义。     

一株猪源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及耐药性、耐药基因的检测

为了确定发病母猪组织是否感染病原菌及调查病原菌耐药情况,试验对发病母猪组织进行细菌分离培养,经过培养观察、生化试验、16S rRNA测序确定分离菌株,对分离菌株进行药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因检测、常见血清型分型及毒力基因检测。结果表明:分离得到一株肺炎克雷伯氏菌。分离菌株的16S rRNA测序结果与NCBI上18株肺炎克雷伯氏菌参考菌株序列同源性均在99%以上。分离菌株接种在血琼脂培养基上会发生α溶血现象,且具有多重耐药性,携带四环素类tet耐药基因,氨基糖苷类aph(3′)-Ia、strA、strB耐药基因,磺胺类sul 1、sul 2耐药基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaSHV,与耐药表型结果一致。分离菌株血清型分型为K20型,含有ureA、wabG、uge毒力基因。在小鼠致病性试验中,以浓度为6.15×10~8cfu/mL的菌液进行攻毒,能够使小鼠在22 h内死亡,表明分离菌株对小鼠具有致病性。说明本试验所分离得到的猪源肺炎克雷伯氏菌具有严重的耐药性和强致病性。     

北京地区宠物犬源blaCTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征研究

为研究宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况，同时了解宠物犬携带bla_CTX-M基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征，本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌，通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株，运用PCR检测bla_CTX-M基因，药物敏感性试验测定bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型，PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示，共分离到7株bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌，3株来自宠物肛拭子，4株来自宠物鼻拭子；药敏试验结果显示，7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药，但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示，其中3株细菌相似度为100%，而另外4株细菌相似度差异较大（<30%）。全基因组结果显示，7株菌共有5个ST分型，bla_CTX-M基因分离的亚型为CTX-M-14型（n=5）和CTX-M-3型（n=2），同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出，目前宠物犬源bla_CTX-M基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低，但其多重耐药性较严重，本研究分离的耐药基因bla_CTX-M、bla_SHV亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足，需进一步关注宠物细菌耐药性，为后续防控提供依据。     

伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及毒力和耐药性分析

为探究南宁伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的毒力和耐药情况,本研究采集犬、猫粪便拭子,通过分离培养、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、khe基因、毒力基因及耐药基因等方法对细菌特性进行分析。结果显示,分离的菌株中有4株能在麦康凯培养基上形成液状菌落,轻挑拉丝且镜检为短杆状革兰氏阴性菌,疑为肺炎克雷伯氏菌。16S rRNA测序结果显示,分离菌与肺炎克雷伯氏菌同源性达99%,同时肺炎克雷伯氏菌特异性基因(khe)阳性。其中,分离株GXKP-C14、GXKP-D15对大部分临床常用抗菌药物敏感,分离株GXKP-D1则表现出高水平多重耐药,分离株GXKP-D4耐药性稍低于GXKP-D1,对临床常用药氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、四环素、多西环素、呋喃妥因、复方新诺明表现耐药,对头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多黏菌素等敏感。部分菌株携带tet(A)、QnrS、bla_(SHV)、sul2、mcr-1等耐药基因和WabG毒力基因。本研究结果为犬、猫源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及治疗提供了试验依据。同时,黏菌素耐药基因mcr-1的检出将为多黏菌素的耐药性控制和合理使用提供参考。     

伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及毒力和耐药性分析

为探究南宁伴侣动物源肺炎克雷伯氏菌的毒力和耐药情况，本研究采集犬、猫粪便拭子，通过分离培养、形态学观察、药敏试验及PCR扩增16S rRNA、khe基因、毒力基因及耐药基因等方法对细菌特性进行分析。结果显示，分离的菌株中有4株能在麦康凯培养基上形成液状菌落，轻挑拉丝且镜检为短杆状革兰氏阴性菌，疑为肺炎克雷伯氏菌。16S rRNA测序结果显示，分离菌与肺炎克雷伯氏菌同源性达99%，同时肺炎克雷伯氏菌特异性基因（khe）阳性。其中，分离株GXKP-C14、GXKP-D15对大部分临床常用抗菌药物敏感，分离株GXKP-D1则表现出高水平多重耐药，分离株GXKP-D4耐药性稍低于GXKP-D1，对临床常用药氨苄西林、哌拉西林、头孢呋辛、四环素、多西环素、呋喃妥因、复方新诺明表现耐药，对头孢吡肟、美罗培南、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多黏菌素等敏感。部分菌株携带tet（A）、QnrS、bla_SHV、sul2、mcr-1等耐药基因和WabG毒力基因。本研究结果为犬、猫源肺炎克雷伯氏菌病的检测、诊断及治疗提供了试验依据。同时，黏菌素耐药基因mcr-1的检出将为多黏菌素的耐药性控制和合理使用提供参考。     

毛皮动物源肺炎克雷伯菌部分毒力基因、耐药基因检测及药敏试验

为了了解河北秦皇岛毛皮动物(狐、貉、貂)源肺炎克雷伯菌毒力基因、耐药基因分布及药物敏感性等情况,采用常规分离纯化、生化鉴定及分子生物学的方法对病原菌进行鉴定,动物致病性试验检测其致病性,PCR方法检测其主要K血清型、毒力基因和耐药基因,K-B法对常用西药进行药物敏感性检测,琼脂平板打孔法对中药药物敏感性进行检测,试管二倍稀释法检测中药最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果显示:此次共分离到48株肺炎克雷伯菌;48株肺炎克雷伯菌均能够使小鼠发病死亡;48株肺炎克雷伯菌均检测到fimH、wabG毒力基因,检出率为100%;mrkD毒力基因检出率为87.5%;blaTEM、aadA1、gyrB、gyrA、blaSHV-1、sul1、sul2、sul3、blaROB-1、tetA和tetD耐药基因的检出率分别为100.0%、100.0%、89.6%、4.2%、39.6%、18.8%、27.1%、16.7%、12.5%、60.4%和37.5%,未检出ermF耐药基因。西药药敏试验结果显示,48株肺炎克雷伯菌临床分离菌株均对头孢拉定、复方新诺明、林可霉素、替米考星、磺胺间甲氧嘧啶耐药。中药药敏试验结果显示,48株肺炎克雷伯菌临床分离菌株对乌梅、五味子极度敏感,抑菌圈直径在20～25 mm之间,MIC和MBC为15.63～62.50 g/L。本试验调查了河北秦皇岛地区毛皮动物源肺炎克雷伯菌的流行情况,对毛皮动物源出血性肺炎的防治具有重要的指导意义,更具公共卫生学意义。     

水貂沙门氏菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为指导临床合理用药并为治疗患病水貂提供依据,本试验对山东省某水貂养殖场送检的7只疑似患有沙门氏菌病的病死水貂的肝脏和脾脏样品进行细菌分离鉴定及药物敏感性分析,通过分离纯化方法从样品中分离菌株,并采用革兰氏染色、生化鉴定和PCR方法对分离菌株进行鉴定。运用K-B药敏法检测菌株对临床常用药物的敏感性,并通过PCR方法检测菌株耐药基因及Ⅰ类整合子的携带情况。结果显示,本试验分离得到的7株菌均为革兰氏阴性、短小的杆菌;生化反应检测显示,分离菌株葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、MR试验、枸橼酸盐、硫化氢试验均表现为阳性,初步鉴定分离菌株为沙门氏菌;PCR产物测序结果进一步表明7株分离菌均为沙门氏菌;药敏试验结果显示,7株沙门氏菌对头孢曲松、左氧氟沙星、氟苯尼考和多黏菌素较敏感,对氨基糖苷类药物、四环素和氨苄西林表现为耐药;耐药基因检测结果显示,7株沙门氏菌共检测出8种耐药基因blaTEM-1、blaCTX-M-1G、aadA1、aac(3′)-Ⅳ、aac(3′)-Ⅱc、aph(4′)-Ⅰa、aph(3′)-Ⅶ和oqxAB,以及基因盒为aadA1、arr-3-aacA4和blaPSE-1的Ⅰ类整合子。综上可知,本试验在送检的7只患病水貂的肝脏和脾脏样品中分离到7株沙门氏菌,分离菌株均为耐药菌株,且主要表现为多重耐药现象;耐药基因呈多样性,且存在位于质粒上的耐药基因扩大了耐药基因的传播范围,增加了细菌的耐药性,为临床用药治疗带来困难。     

鸡源肺炎克雷伯菌的分离鉴定和耐药性分析

为探究鸡源肺炎克雷伯菌的流行性和耐药情况,本试验采集蛋鸡新鲜粪便60份(雏鸡36只/产蛋鸡24只),通过分离培养、VITEK2 Compact生化鉴定、特异性基因PCR扩增和微量肉汤稀释法对分离菌株进行了菌种鉴定、耐药表型、耐药基因以及毒力基因检测。结果显示,从粪便样本中共分离出48株肺炎克雷伯菌;分离菌株对氨苄西林、大观霉素、四环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑和复方新诺明表现出高度耐药,耐药率范围为50.00%~100.00%,对奥格门丁、庆大霉素、头孢类和喹诺酮类药物耐药程度较低,耐药率范围为14.58%~27.08%,对黏菌素和美罗培南敏感;75.02%的菌株表现为多重耐药,最高表现为8重耐药,占10.42%。耐药基因和毒力基因检测结果显示,48株肺炎克雷伯菌共检出aadA1、tetA、oqxA、oqxB、blaTEM和qnrB 等6种耐药基因,以及entB、wabG、uge和kfuBC 等4种毒力基因,本试验结果可为临床用药、动物源细菌耐药性监测和健康养殖提供数据支持。     

内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

Study on the Drug-resistance of Escherichia coli Isolated from Sheep in Inner Mongolia

In order to determine the drug resistance phenotype and prevalence of drug resistance genes in Escherichia coli (E.coli) isolated from sheep in Inner Mongolia, the minimum inhibitory concentrations (MICs) of the isolates to antibiotics commonly used in veterinary clinical were detected by micro-dilution method in vitro. The results showed that the highest resistance rates of the isolates to amoxicillin,cephalothin,sulfamethoxazole and polymyxin were up to 100.0%,respectively.To amoxicillin-clavulanic, tetracycline and ciprofloxacin were 50% to 80%. These isolates were sensitive to cefotaxime, meropenem trihydrate, neomycin, and their resistance rates were all less than 10%. Among the 108 strains of E.coli from sheep, 94.4% of them were resistant to more than 7 antimicrobial agents,15.6% of them were resistant to 13 antimicrobial agents, only one strain was sensitive to all antimicrobial agents. Six kinds of resistance genes among the 108 E.coli isolates were detected by PCR method.The results showed that detection rates of 4 kinds of drug resistance genes including bla_TEM, proP-2, sul-Ⅰ and ampG were all over 50%,the detection rate of resistance gene aph (3')-Ⅰ was up to 40%, only resistance gene aac(3)-Ⅱ detection rate was 5.5%. Thus, the sheep E.coli isolates in Inner Mongolia produced various degrees of resistance to 13 kinds of antibiotics, and their multi-drug resistances were very serious. They carried aph(3')-Ⅰ, sul-Ⅰ, ampG, bla_TEM, proP-2 and aac(3)-Ⅱ resistance genes.     

水貂志贺氏菌分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在对吉林省某水貂养殖场送检的3只具有典型腹泻症状的病死水貂的小肠和肠内容物样品进行细菌分离鉴定及耐药情况分析,为临床治疗提供参考。通过细菌分离纯化和PCR方法对分离菌株进行鉴定,对BALB/c小鼠进行菌液注射来检测菌株的致病性。采用K-B药敏法检测菌株对常用药物的敏感性,并通过PCR方法检测其耐药基因和Ⅰ类整合子的携带情况。结果显示,分离得到3株志贺氏菌,致病性检测试验显示分离菌可引起小鼠腹泻。药物敏感性试验结果显示,3株志贺氏菌对氟喹诺酮类药物、头孢类药物、氟苯尼考和多黏菌素较敏感,对氨基糖苷类、四环素、氯霉素、青霉素、氨苄西林耐药。耐药基因检测结果显示,3株志贺氏菌共检测出7种耐药基因bla_TEM-1、aadA1、aac（3'）-Ⅱc、aac（6'）-Ⅰb、aph（3'）-Ⅶ、tet（M）、cat2及携带aadA1基因盒的Ⅰ类整合子。结果表明,分离的3株志贺氏菌均具有致病性,可引起小鼠腹泻,主要表现为多重耐药现象,携带的耐药基因呈多样性,为临床治疗带来巨大影响。     

Isolation,Identification and Drug Sensitivity Analysis of Shigella from Minks

In order to provide therapeutical guidance for drug admistration, the bacteria of three sick minks suffering from typical diarrhea symptoms provided by mink farms in Jilin province were isolated and identified, and the drug sensitivity was tested. The bacteria were isolated with TSA plates, and identified using biochemical methods and PCR assay. The virulence of the isolates was determined by infecting BALB/c mice. The antimicrobial susceptibility of the isolates to antimicrobial agents was investigated using the K-B method. PCR was used to detect the resistance genes and Ⅰ integrons. A total of 3 Shigella isolates were obtained from sick minks. The virulent determination showed that all isolates could cause mice diarrhea. The drug sensitivity results showed that 3 strains were sensitive to fluoroquinolone, cephalosporin, florfenicol and polymyxin, but they were resistant to aminoglycoside, tetracycline, chloramphenicol, penicillin and ampicillin. There were seven resistance genes were detected,bla_TEM-1,aadA1, aac(3')-Ⅱc, aac(6')-Ⅰb, aph(3')-Ⅶ, tet(M), cat2 and three class Ⅰ integrons carrying aadA 1 gene cassette. All of the isolates were virulent and caused the mice diarrhea. The resistance of the 3 strains were very serious and mainly for multiple drug resistance phenomenon. The resistance genes detected in the mink were various, and could bring enormous implications for clinical treatment.     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品，采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定，用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性，采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示，从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌；大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%，多重耐药率为15.5%，其中对多黏菌素耐药率为52.2%，对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%，而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示，β-内酰胺类耐药基因中bla_TEM基因携带率为100%，其中全部为bla_TEM-1基因，bla_CTX-M基因携带率为32.4%，其中主要为bla_CTX-M-15基因，没有检测到bla_SHV、bla_OXA基因；多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%；喹诺酮类耐药基因中aac（6'）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%，qnrB基因携带率为20.8%，没有检测到qnrA和qnrC耐药基因；对8种毒力基因检测分析结果显示，仅Hly毒力基因没有被检出，Ecs3703、Irp2基因的检出率较高，分别为90.1%和63.4%，71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子，检出率为15.5%，11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构，最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明，山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重，携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌，Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用，可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及特征分析

为探究广西地区猪源奇异变形杆菌的毒力和耐药情况,本研究从不同规模养殖场收集病死猪病料98份,通过分离培养、形态学观察、染色镜检、16S rRNA测序对分离菌进行鉴定;采用微量肉汤稀释法进行药敏试验;PCR检测毒力基因、耐药基因和整合子及其可变区;可变区扩增产物克隆至pMD^TM19-T载体进行测序。鉴定结果显示,22株细菌在TSA培养基上弥漫性生长,在SS培养基上形成中心黑色边缘白色的单菌落,镜检为革兰氏阴性短杆菌,变形杆菌属特异性基因（TUF）阳性。16S rRNA测序结果显示,21株分离菌与奇异变形杆菌同源性达99%,1株分离菌与彭氏变形杆菌同源性达99%。药敏结果显示,21株奇异变形杆菌对四环素、多西环素、氨苄西林、磺胺甲噁唑耐药率均为100%,对头孢氨苄、头孢呋辛、头孢噻肟、亚胺培南、卡那霉素耐药率在57.1%以上,所有分离株均为多重耐药菌。PCR结果显示,21株分离菌毒力基因atfA、hpmA、ireA、mrpA、pmfA、rsb、ureC、zapA、ptA检出率均为100%,ucaA检出率为95.2%;ESBLs菌株为bla_TEM型、bla_CTX型或bla_TEM型和bla_CTX型,AmpC菌株均为bla_DHA型,携带ESBLs或AmpC基因的菌株比例为57.1%、14.3%,同时携带ESBLs和AmpC基因的菌株比例为14.3%;qnrA、qnrB、qnrS和aac（6’）-Ⅰb-cr检出率分别为9.5%、0、4.8%和80.1%。21株分离菌Ⅰ类整合子（intⅠ1）阳性率61.9%,检测到9种基因盒阵列（aadA2-linF、estX、dfrA32-ereA-aadA2、drfA5、drfA12-orfF-aadA2、arr3-aac （6’）Ⅰb-cr5、aac （6’）Ⅰb-cr5-bla_OXA-1-catB3-aar3、drfA1-orfC和aadA2）;Ⅱ类整合子（intⅠ2）阳性率76.2%,检测到1种基因盒阵列（drfA1-sat1-aadA1）。本研究结果表明,广西地区猪源奇异变形杆菌毒力高且耐药严重,为后期针对奇异变形杆菌的防治和研究提供数据支持。     

鱼源维氏气单胞菌的耐药性研究

为检测7株鱼源维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的耐药基因和耐药表型的分布情况,试验采用PCR法检测分离株中氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅱa、aac(6')-Ⅰb、ant(3")-Ⅰa和aph(3')-Ⅱa),磺胺类耐药基因(Sul1、Sul2和Sul3)和四环素类耐药基因(tetA、tetC和tetM),运用Kirby-Bauer纸片扩散法检测7株鱼源维氏气单胞菌分离株对22种常用抗生素的敏感性。结果表明,可检出耐药基因aac(3)-Ⅱa(71.4%)、aac(6')-Ⅰb(85.7%)、Sul2(85.7%)和tetA(28.5%);未检出ant(3")-Ⅰa、aph(3')-Ⅱa、Sul1、Sul3、tetC和tetM基因。7株维氏气单胞菌对磷霉素(100%)、多黏霉素B(100%)、痢特灵(85.7%)、奥复星(71.4%)较敏感;对氨苄西林(100%)、乙酰螺旋霉素(100%)、复方新诺明(85.7%)、磺胺异恶唑(85.7%)、四环素(85.7%)等耐药。这说明耐药基因和耐药表型之间存在一定的相关性。