牦牛隐性乳房炎主要病原菌及耐药和毒力基因分布情况

为探明牦牛隐性乳房炎（SCM）主要病原菌及其耐药和毒力基因的分布情况，本研究自甘肃省甘南州夏季牧场收集无乳房炎临床症状牦牛乳样，通过兰州乳房炎试验（LMT）筛选SCM乳样，从中分离病原菌并纯化培养，利用16S rDNA鉴定主要病原菌，通过纸片扩散法判定其药物敏感性，并采用PCR方法对相关耐药及毒力基因进行检测。结果显示，共筛选出牦牛SCM乳样324份，检出率14.43%；主要病原菌为葡萄球菌属、埃希氏菌属和肠球菌属，其中葡萄球菌分离株对青霉素和四环素耐药率最高，分别为59.57%和47.52%；大肠埃希氏菌分离株对四环素和氨苄西林耐药率最高，分别为43.40%和20.75%；粪肠球菌分离株对四环素和红霉素耐药率最高，分别为25.00%和16.67%；59株耐青霉素金黄色葡萄球菌中共检出MRSA 12株，其中7株携带mecA基因，5株含mecC基因；四环素外排泵基因tetK、tetA携带率最高（85.45%、56.36%），核糖体保护基因tetM携带率最低（34.55%）；毒力基因中，clfA、clfB、fib、coa基因检出率较高（87.64%、84.27%、83.15%、82.02%）。研究表明，牦牛SCM的主要病原菌为金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌，均对青霉素类和四环素类抗生素耐药性较高，其中金黄色葡萄球菌的主要毒力因子为黏附因子和凝固酶。     

甘南藏区牦牛隐性乳房炎病原菌分离及鉴定

为调查甘肃省甘南州玛曲县、夏河县牦牛隐性乳房炎流行情况,探明引起牦牛隐性乳房炎的主要病原菌,利用兰州乳房炎诊断试剂(LMT)筛选牦牛隐性乳房炎,检出率10.25%;采集非阴性乳样,对其中的病原菌分离纯化,提取细菌DNA并测序后,通过NCBI中BLAST比对,共鉴定出236株细菌,其中包含102株金黄色葡萄球菌(43.22%)、18株艾格尼丝葡萄球菌(7.6%)、13株沃氏葡萄球菌(5.50%)和29株大肠埃希氏菌(12.29%);艾格尼丝葡萄球菌为国内首次自牦牛乳中分离得到。结果表明,葡萄球菌属和埃希氏菌属可能是引起甘南藏区牦牛隐性乳房炎的主要病原菌。     

拉萨市林周县牦牛乳样理化指标及乳房炎病原菌的分离鉴定

为研究西藏拉萨市林周县牦牛乳理化指标和乳房炎主要病原菌,采集牦牛乳样品100份,开展乳理化指标和主要病原菌检测。采用CMT法筛选隐性乳房炎病例,针对筛选出隐性乳房炎阳性乳样20份进行病原菌分离鉴定,共分离出11种52株细菌,通过鉴定,其中包含4株凝固酶阴性葡萄球菌,10株金黄色葡萄球菌,2株停乳链球菌,2株乳房链球菌,1株粪链球菌,8株无乳链球菌,6株大肠埃希菌,4株真菌。乳房炎63.5%的病例是由链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌引起,结果证实,链球菌、葡萄球菌和大肠埃希菌是导致林周县牦牛乳房炎的主要病原菌。     

畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的LAMP检测及其耐药性分析

为深入了解畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的流行及耐药状况,采用建立的畜禽粪便中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的环介导等温扩增技术（LAMP）检测方法对山东省内牛粪污、猪粪、鸡粪、鸭粪中的金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌进行检测,进而对检测阳性样品进行分离,并对药敏试验中多重耐药性菌株进行耐药基因预测。结果表明,LAMP方法检测畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌与国家标准方法检测结果符合率为100%,重复性好,特异性高。从80份畜禽粪污样品中分离到的3株金黄色葡萄球菌均对青霉素耐药;34株大肠埃希氏菌对氟苯尼考、利福平的耐药比例高于50%,高于25%以上的还有氨苄西林、四环素、多西环素、磺胺异噁唑、头孢噻吩和头孢噻呋;耐药基因预测结果显示,鸡粪、鸭粪、牛粪和猪粪中的4株大肠埃希氏菌分别携带10、8、20和15种耐药基因;鸡粪中的1株金黄色葡萄球菌携带11种耐药基因。说明山东地区畜禽粪污中金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌耐药状况严峻,菌株普遍多重耐药,且携带多种耐药基因。     

青海省某奶牛场顽固性乳房炎主要病原菌的分离鉴定与耐药性研究

为了明确青海省某奶牛场顽固性乳房炎的病原菌,并制定有效的防控措施,本试验采用细菌分离、16SrDNA序列分析、细菌基因分型等方法对病牛乳样中的病原菌进行分离鉴定,并进行17种药物的敏感性试验。试验从15份乳样中分离到10株金黄色葡萄球菌、1株表皮葡萄球菌和2株化脓隐秘杆菌,其中10株金黄色葡萄球菌均为荚膜多糖5型分离株;所分离金黄色葡萄球菌对青霉素G、红霉素、头孢氨苄和呋喃妥因耐药率分别为100%、90%、10%和10%;表皮葡萄球菌对青霉素G、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶耐药,而对其他14种抗菌药物敏感;化脓隐秘杆菌对四环素和甲氧苄氨嘧啶耐药,对强力霉素和复方新诺明中度敏感,对其他13种抗菌药物敏感。该牛场顽固性乳房炎是多种病原菌混合感染所致,但以荚膜多糖5型金黄色葡萄球菌为主。不同的病原菌的药物敏感性不同,故而治疗困难,建议使用恩诺沙星治疗病牛并加强隐性乳房炎的筛查与防治,病情得到控制。     

青海省牦牛乳房炎致病菌分离鉴定及耐药性分析

2023年3月,青海省西宁市某牦牛养殖场部分牦牛出现乳房炎,为确定发病原因,从该场采集确诊乳房炎奶牛乳样15份,进行细菌分离、纯化致病菌及PCR鉴定,并采用纸片扩散法检测部分致病菌对抗菌药物的敏感程度。结果发现,从13份乳样中共分离获得23株细菌,分别为无乳链球菌(n=7)、金黄色葡萄球菌(n=8)、大肠埃希氏菌(n=4)、粪肠球菌(n=3)和蜡样芽胞杆菌(n=1)。对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌进行药敏试验,结果发现,3种病原菌对链霉素、环丙沙星、氧氟沙星、头孢噻呋和头孢拉定高度或中度敏感。研究结果提示,无乳链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌是该场牦牛乳房炎的主要致病菌,且头孢类抗生素和恩诺沙星等可作为首选药物用于该病的防治。     

树鼩源大肠埃希氏菌耐药性分析与毒力因子鉴定

为了解树鼩源大肠埃希氏菌遗传进化同源性、对药物的敏感性以及所携带的毒力因子种类等,对广西南宁某大学人工驯化养殖的10只树鼩肠道内容物进行大肠埃希氏菌的分离纯化、生化分析及药敏试验等,并应用PCR技术对菌株进行16S rRNA同源性分析、毒力基因及耐药基因的检测。10份树鼩肠道内容物经分离纯化共分离出9株大肠埃希氏菌。同源性分析表明分离株与鸡源、猪源、人源大肠埃希氏菌之间的亲缘性较近,存在跨种间传播风险。药敏试验表明,分离株对苯唑西林耐药率为88.8%,对氨苄西林耐药率77.8%,对四环素、多西环素耐药率均为44.4%,对头孢哌酮、头孢他啶、卡那霉素、庆大霉素等表现为高度或中度敏感。共扩增出4种耐药基因,分别为四环素类耐药基因tetA、tetB,检出率均为100%,β-内酰胺类耐药基因TEM检出率为100%,CTX-M检出率为44.4%。毒力因子仅检测出eaeA基因,检出率为100%。表明分离株与其他动物源性大肠埃希氏菌亲缘性较近,具有一定耐药性,并携带毒力基因,存在一定的致病风险。     

湖北地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定与耐药性分析

本研究旨在分离鉴定湖北地区致奶牛乳房炎的病原菌，鉴定细菌的耐药特征．为奶牛乳房炎防治提供理论依据。从湖北两个主要奶牛小区的9个不同规模的奶牛场采集牛奶样本200份，经检测．其中3份为临床乳房炎样本，49份为隐性乳房炎。两地区隐性乳房炎的检出率分别为36．4％（20／55）与20％（29／145）。两地区乳房炎牛奶的细菌种类分布也各不同。其中武汉东西湖地区停乳链球菌的分离率最高，占33.3％（8／24）．而宜昌夷陵区以金黄色葡萄球菌分离率最高，占29％（9／31），其次为无乳链球菌，占25．8％（8／31）。从乳房炎牛奶中共分离到7种细菌共55株，其中金黄色葡萄球菌11株，表皮葡萄球菌10株，无乳链球菌10株，停乳链球菌14株，乳房链球菌2株，大肠埃希氏菌4株，克雷伯氏菌4株。分别对所有分离株进行12种药物的敏感性试验，结果表明所有菌株对先锋V、氧氟沙星均高度敏感．对临床常用的青霉素、链霉素具有较高的耐药性。     

浙江省主要奶牛养殖区奶牛隐性乳房炎病原菌调查

对浙江省四个主要奶牛养殖区金华、杭州、宁波以及台州的30个奶牛场中846头泌乳牛的3178个乳区进行了奶牛隐性乳房炎病原菌调查.首先用HMT乳房炎诊断试剂检查乳区奶样,采集HMT反应为阳性(++)和强阳性(+++)的乳区奶样进行细菌分离鉴定,对分离到的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)进行药敏试验.结果表明,浙江省奶牛隐性乳房炎的头阳性率为54.3%,乳区阳性率为28.0%.主要病原菌的检出率依次为凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococci)34.0%、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)27.0%、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)12.2%、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)13.0%、乳房链球菌(Streptococcus uberis)6.2%等.药敏试验结果表明,对青霉素、氨苄青霉素敏感的金黄色葡萄球菌分离株只有20.3%,对四环素和红霉素的敏感率也较低(34.8%和47.8%).多重耐药现象比较普遍,主要是对青霉素、氨苄青霉素、四环素、红霉素同时耐药.     

奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定、血清型及耐药性研究

为调查北京、河南、天津及广西等地区奶牛乳房炎病原菌的种类和乳房炎的流行情况,在这些地区采集了临床型乳房炎奶牛新鲜奶样82份,分离到13种110株细菌,其中大肠埃希菌23株,金黄色葡萄球菌16株,链球菌38株。血清型研究表明,大肠埃希菌以O13、O17和O91为优势血清型,金黄色葡萄球菌凝固酶血清型主要集中于Ⅵ型及复合型。耐药性检测结果显示,大肠埃希菌对利福平耐药严重,对其他15种测试药耐药率低;金黄色葡萄球菌对青霉素和氨苄西林的耐药率高达81.25%以上,对其他14种测试药耐药率均低于31.30%;链球菌较上述2种细菌耐药性强,对链霉素等5种药物耐药率均高于52.60%,除万古霉素外,对其他10种药物呈不同程度耐药。3种细菌对氧氟沙星、恩诺沙星、复方新诺明和甲氧苄啶较敏感,这4种药可作为这些地区治疗奶牛乳房炎的首选药物。     

锦州某奶牛养殖场乳房炎大肠埃希菌药敏试验及耐药基因检测

为了解锦州某奶牛养殖场临床型乳房炎病原菌耐药情况。对该场进行患病乳样采集、主要病原菌分离鉴定、药物敏感性试验和耐药基因筛选。结果表明,该场乳房炎主要病原菌为大肠埃希菌,共得到乳房炎大肠埃希菌分离株36株;药物敏感性试验结果表明,分离株对磺胺类药物高度耐药、对头孢噻呋和头孢唑啉敏感;对分离株进行磺胺类药物耐药基因筛查结果表明,sul1、sul2、sul3基因的阳性率分别为76.0%、17.1%和0%,说明sul1基因为该场大肠埃希菌磺胺类药物主要耐药基因。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

山羊临床型乳房炎主要病原菌分离鉴定及药敏试验

为调查四川省资阳市某规模化羊场暴发乳房炎的主要病原菌,无菌采集患病羊乳样45份,然后进行细菌分离、纯化及PCR鉴定,同时对分离菌株进行耐药性试验。共分离、鉴定出5株大肠埃希菌、30株金黄色葡萄球菌和25株链球菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素、氨苄西林、庆大霉素、红霉素及四环素类等多种药物有耐药性。本研究为该场山羊乳房炎的防控提供了依据。     

我国部分地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定及药敏试验

为了解我国奶牛乳房炎病原菌的流行情况及其耐药性,对生鲜乳主产省区内蒙古、黑龙江、山东、上海、河北5省(市、自治区)共247批次患乳房炎病牛乳样,进行病原菌的分离鉴定和耐药性试验。结果表明,从247份乳样中分离到细菌175株,大肠埃希菌65株,占37.14%;金黄色葡萄球菌30株,占17.14%;粪肠球菌21株,占12.00%;克雷伯菌18株,占10.29%;链球菌13株,占7.43%;柠檬酸杆菌12株,占6.86%;腐生葡萄球菌5株,占2.86%;变形杆菌4株,占2.29%;黏质沙雷菌3株,占1.71%;表皮葡萄球菌2株,占1.14%;产色葡萄球菌1株,占0.57%;乡间布丘菌1株,占0.57%。耐药性试验结果显示,所分离得到革兰阳性菌对氨曲南的耐药率最高,达到了100%,其次为青霉素(80.56%)、氧氟沙星(43.06%)、头孢西丁(43.06%)及美罗培南(41.67%)耐药率均高于40%;耐药率低于10%的为万古霉素(全部敏感)、苯唑西林(全部敏感)、利奈唑胺(全部敏感)、奥格门汀(全部敏感)、复方新诺明(2.78%)、环丙沙星(6.94%)及氨苄西林(9.72%)。所分离得到革兰阴性菌对氨苄西林的耐药性最高,达到了83.50%,其次为氟苯尼考44.66%和四环素43.69%,耐药率均高于40%;耐药率低于10%的有美罗培南(全部敏感)、头孢西丁(5.83%)和氨曲南(9.71%)。该结果为奶牛乳房炎的防控和临床用药提供了参考依据。     

某奶牛场乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

为监测甘肃临洮某奶牛场奶牛乳房炎主要致病菌对临床常用治疗药物的耐药情况,指导临床合理用药。从奶牛场采集了45份临床型奶牛乳房炎病样,进行培养分离,并采用16SrDNA对分离纯化的细菌进行鉴定;对主要病原菌,采用牛津杯法测定其对乳房炎常用治疗药物的耐药情况。结果表明,从45份乳房炎奶样中,共分离出以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为主的7种乳房炎致病菌。耐药性试验表明,金黄色葡萄球菌对无抗头孢、头孢力定、青霉素G钾、强力乳净、乳痈治、乳痈快克、炎乳康、乳肿康和硫酸庆大极其敏感;大肠埃希菌对头孢力定、青霉素G钾、强力乳净、乳痈快克、炎乳康、乳肿康和硫酸庆大极其敏感。金黄色葡萄球菌对强力乳康、无抗乳炎康、乳炎康、十味乳炎清、无抗乳肿消、获特键和强力宫康Ⅱ号耐药作用较强。大肠埃希菌对强力乳康、无抗乳肿消、乳房肿炎立消、获特键和强力宫康Ⅱ号耐药作用较强。研究结果为该奶牛场乳房炎的防治提供了参考。     

辽西奶牛乳房炎优势病原菌的分离鉴定及药敏试验

采集辽西地区5个城市的临床型奶牛乳房炎奶样89份,采用形态学观察和基因分析法进行了细菌的分离鉴定,结果显示优势病原菌依次为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌。应用生物梅里埃药敏试剂盒测定所分离的乳房炎主要病原菌对常用抗生素的药物敏感性,结果表明金黄色葡萄球菌敏感率较高的药物有米诺环素、呋喃妥因、喹奴普汀、克林霉素,而耐药率较高的药物有青霉素、苯唑西林、万古霉素、红霉素;大肠杆菌敏感率较高的药物有头孢西丁、替卡西林,而耐药率较高的药物依次为阿莫西林、头孢噻吩、环丙沙星、复方新诺明;无乳链球菌对氨苄西林、万古霉素、利福平、替考拉宁敏感率高达100%,四环素、链霉素次之,而对青霉素、环丙沙星耐药率较高;依据上述结果,青霉素和环丙沙星应为临床治疗奶牛乳房炎的淘汰药物。该结果为针对辽西地区防治奶牛乳房炎采取科学合理的防治措施提供了可靠依据。     

盐源县养鸭场主要病原菌分离鉴定及其耐药性分析

为掌握养鸭场病原菌种类及其耐药情况,本实验采用传统细菌学方法进行病原菌分离鉴定和药敏试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测,结果显示：养鸭场病原菌主要是大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和鸭里默氏杆菌;主要病原菌对20种抗生素呈现多重耐药现象,在大肠埃希氏菌分离株中检出TEM和CTX-M耐药基因,在金黄色葡萄球菌分离株中检出mecA和blaZ耐药基因。这些结果为盐源县养鸭场细菌性疾病的预防与控制提供了科学依据。     

甘肃省某奶牛场肠杆菌性乳房炎主要病原菌的分离鉴定与耐药性分析

为查明甘肃省某奶牛场发生临床型奶牛乳房炎的主要病原菌并选择治疗用敏感药物,随机无菌采集了6份临床型病牛乳样和1份大罐乳样,采用划线分离、菌落形态观察、革兰染色镜检、生化鉴定及16S rDNA序列分析等方法进行细菌分离鉴定,同时采用K-B法测定主要分离菌株对抗菌药物的敏感性。结果表明,从临床型乳房炎乳样中分离鉴定出大肠埃希菌、芽胞杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌(腐生葡萄球菌)3种细菌,其中大肠埃希菌的分离率最高,为66.67%;从大罐奶样中也分离出大肠埃希菌。药敏试验结果表明,大肠埃希菌对氨苄青霉素、阿莫西林、头孢噻吩、杆菌肽、红霉素均存在不同程度的耐药,耐药率为29%~100%;对诺氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。说明此次牛场临床型乳房炎的主要病原菌是大肠埃希菌、葡萄球菌和芽胞杆菌,而且分离的大肠埃希菌具有多重耐药性。根据检测分析结果,给奶牛场提出针对性的防控措施,临床型乳房炎的发病率下降,病情得以控制。     

新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂（MSA）培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力（+++）;2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。     

腹泻兔病原菌的分离鉴定及耐药性检测

为了确定娄底地区兔腹泻的病原菌、致病性及耐药性,对采集的203份患腹泻的兔肛拭子、粪便进行病原菌分离鉴定,结果分离得到了30株大肠埃希氏菌、20株铜绿假单胞菌、17株产气荚膜梭菌、15株金黄色葡萄球菌;人工接种小鼠试验、KB药敏纸片法分别检测病原菌的致病性及耐药性,结果表明分离得到20株大肠埃希氏菌、15株铜绿假单胞菌、12株产气荚膜梭菌、10株金黄色葡萄球菌对小鼠具有致病性;分离的15株致病性铜绿假单胞菌对阿莫西林、氨曲南、庆大霉素等7种药物耐药率在46.7%以上,分离的12株致病性产气荚膜梭菌对环丙沙星、磺胺嘧啶、氟苯尼考等8种药物耐药率在41.7%以上,分离的10株致病性金黄色葡萄球菌对磺胺嘧啶、氟苯尼考、庆大霉素等7种药物耐药率在80.0%以上,分离的20株大肠埃希氏菌对磺胺嘧啶、多黏菌素、强力霉素等7种药物耐药率在45.0%以上,4种病原菌对其他药物具有不同的耐药性。