| 小反刍兽疫病毒N蛋白阻断ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 毛立,张纹纹,李文良,杨蕾蕾,李基棕,郝飞,刘茂军,江杰元.小反刍兽疫病毒N蛋白阻断ELISA方法的建立[J].畜牧与兽医,2019(5):114-120. |
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| 作者姓名： | 毛立 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 李基棕 郝飞 刘茂军 江杰元 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2018YFD0502006);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(15)1061) |
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| 摘 要： | 小反刍兽疫(PPR)是一种跨国传播的重大烈性传染病,主要发生于山羊和绵羊等小反刍动物,具有高发病率和死亡率。小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是抗体检测的主要靶蛋白,本研究将PPRV Nigeria 75/1毒株的N蛋白进行原核表达,重组蛋白经鉴定和纯化后免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选针对PPRV N蛋白的阳性单克隆细胞株,获得了具有阻断效果的单克隆抗体1B11株。经免疫荧光方法鉴定该单克隆抗体与PPRV Nigeria 75/1毒株发生特异性反应。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记1B11抗体作为阻断抗体,建立了检测PPRV抗体的阻断ELISA方法。经优化反应条件,抗原的最佳包被浓度为2.5μg/mL,阻断抗体的最佳浓度为1μg/mL,待检血清1∶2稀释反应1 h,底物反应时间为10 min,阴阳性检测临界值为阻断率为58.5%。特异性试验证明该方法与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)等阳性血清不发生交叉反应。通过对234份血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒符合率为91%(213/234)。由此表明,建立的阻断ELISA方法可用于PPRV临床样品的抗体水平检测,为PPRV疫苗免疫效果检验及PPRV根除提供了基础。
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 N蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA |
Establishment of a blocking ELISA method based on N protein of peste des petits ruminants virus |
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| MAO Li,ZHANG Wenwen,LI Wenliang,YANG Leilei,LI Jizong,HAO Fei,LIU Maojun,JIANG Jieyuan.Establishment of a blocking ELISA method based on N protein of peste des petits ruminants virus[J].Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2019(5):114-120. |
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| Authors: | MAO Li ZHANG Wenwen LI Wenliang YANG Leilei LI Jizong HAO Fei LIU Maojun JIANG Jieyuan |
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| Institution: | (Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,Nanjing 210014,China) |
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| Abstract: | MAO Li;ZHANG Wenwen;LI Wenliang;YANG Leilei;LI Jizong;HAO Fei;LIU Maojun;JIANG Jieyuan(Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Key Laboratory of Veterinary Biological Engineering and Technology,Ministry of Agriculture,Nanjing 210014,China) |
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| Keywords: | PPRV N protein monoclonal antibody blocking ELISA |
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