绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测绵羊家畜衣原体血清抗体的间接ELISA方法，本试验构建pET-28b-ompA重组表达质粒，经诱导表达和纯化后，对重组主要外膜蛋白(MOMP)进行Western blot鉴定；以MOMP为包被抗原，通过反应条件筛选建立绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法，分析其敏感性、特异性、重复性和符合性，并进行临床样品检测。结果显示，MOMP以包涵体形式表达，经Western blot鉴定重组蛋白具有良好的反应原性。优化反应条件为：抗原包被浓度为1 mg/L,37℃静置孵育1 h;血清抗体稀释倍数为1∶100,37℃反应1 h;酶标二抗稀释倍数为1∶5 000,37℃孵育1 h;底物显色条件为37℃避光5 min。利用52份绵羊血清确定ELISA方法的阳性判定临界值为P/N=2.156。该方法的敏感性、特异性和重复性较高。用该方法与间接血凝试验对86份血清进行检测，两者符合率为73.2%。用该方法对临床采集的205份绵羊血清样品进行检测，阳性率为34.1%。结果表明，本试验建立的绵羊家畜衣原体血清抗体间接ELISA检测方法具有较高的特异性和敏感性，可应用于临床检测。