| GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用 |
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| 引用本文： | 胡焱,段志强,嵇辛勤,赵佳福,邓珊珊,李世静,熊建民.GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用[J].畜牧兽医学报,2019(1):126-133. |
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| 作者姓名： | 胡焱 段志强 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 |
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| 作者单位： | 贵州大学动物科学学院;贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室;贵阳市花溪区农业局 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31502074;31760732);贵州省科技计划项目(黔科合平台人才[2017]5788号);贵州省农业攻关项目(黔科合支撑[2016]2588号);贵州省科学技术基金(黔科合J字[2015]2054号) |
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| 摘 要： | 旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 GSTpull-down 蛋白相互作用 |
Characterization of the Interaction between Newcastle Disease Virus Matrix Protein and Chicken Importin β1 Protein by GST Pull-down Assay |
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| HU Yan,DUAN Zhiqiang,JI Xinqin,ZHAO Jiafu,DENG Shanshan,LI Shijing,XIONG Jianmin.Characterization of the Interaction between Newcastle Disease Virus Matrix Protein and Chicken Importin β1 Protein by GST Pull-down Assay[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2019(1):126-133. |
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| Authors: | HU Yan DUAN Zhiqiang JI Xinqin ZHAO Jiafu DENG Shanshan LI Shijing XIONG Jianmin |
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| Institution: | (College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang 550025,China;Key Laboratory of Animal Genetics,Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region,Ministry of Education,Guizhou University,Guiyang 550025,China;Bureau of Agriculture,Huaxi District,Guiyang 550025,China) |
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| Abstract: | HU Yan;DUAN Zhiqiang;JI Xinqin;ZHAO Jiafu;DENG Shanshan;LI Shijing;XIONG Jianmin(College of Animal Science,Guizhou University,Guiyang 550025,China;Key Laboratory of Animal Genetics,Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region,Ministry of Education,Guizhou University,Guiyang 550025,China;Bureau of Agriculture,Huaxi District,Guiyang 550025,China) |
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| Keywords: | Newcastle disease virus matrix protein importinβ1 protein GST pull-down protein-protein interaction |
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