鸡importin β1基因真核表达载体的构建及亚细胞定位

根据GenBank已发表的鸡importinβ1基因序列,设计合成一对特异性引物从重组克隆质粒pCR2.1-importin β1中扩增鸡importinβ1基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1构建重组真核表达载体pEGFP-importin β1。利用脂质体转染法将pEGFP-importin β1转染DF-1细胞,24h后分别检测重组蛋白EGFP-importin β1在细胞中的表达及亚细胞定位情况。结果表明,成功构建了鸡importin β1基因的重组真核表达载体pEGFP-importin β1;将其转染DF-1细胞后得到与预期大小相符的EGFP-importin β1重组蛋白条带,荧光显微镜观察显示重组蛋白主要定位在细胞核。研究结果为进一步开展鸡importin β1蛋白与相关家禽病毒蛋白的相互作用研究奠定了工作基础。     

猪日粮中铜的适宜添加量

猪日粮中添加高水平铜,可提高日增重,降低饲料消耗率。但添加多少合适,说法不一。美国NRC标准推荐生长猪的有效高铜量为100～250毫克/公斤饲料。1979年湖北省枣阳县粮食局试验:育肥猪日粮补加500ppm硫酸铜,日增重可达750～780克。Barder报     

饲喂不同水平棉籽饼对育肥猪的影响

我省江汉平原,盛产棉花,棉籽饼资源极为丰富。为了探讨棉籽饼合理利用的途径,适应棉区发展养猪的需要,我们用不同水平的棉籽饼对育肥猪的增重速度,饲料利用率及酮体品质的影响,进行了试验。现简介如下:     

GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用

旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。     

聚醋酸乙烯酯乳液的改性研究

从聚醋酸乙烯酯的分子结构、性质及其乳液的最低成膜温度出发，以丙烯酸类单体为改性单体，采用均匀设计法来设计合成共聚型乳白胶的配方，对乳液的胶合性能进行检测，对胶合强度进行回归分析，从而得到具有一定使用价值的工艺配方。研究结果表明：当聚乙烯醇的浓度为8．5％、醋酸乙烯与改性单体的比例为75：25、官能性单体的比例为2％、引发剂的比例为2．5％、乳化剂的比例为4％时，其玻璃化温度Tg=2．94℃，干态剪切强度达13MPa以上，木破率达90％以上，湿态剪切强度达4MPa以上，而且胶层的韧性和耐水性得到明显改善。