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| 苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白cry2Ad2原核表达及其不同长度片段产物的杀虫活性 | |
| 引用本文： | 谢雅晶,冯纪年,张存政,王耘,赵龙龙,刘贤进.苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白cry2Ad2原核表达及其不同长度片段产物的杀虫活性[J].江苏农业学报,2011,27(6). |
| 作者姓名： | 谢雅晶 冯纪年 张存政 王耘 赵龙龙 刘贤进 |
| 作者单位： | 1. 江苏省食品质量安全重点实验室,省部共建国家重点实验室培育基地,农业部食品安全监控重点开放实验室,江苏省农业科学院,江苏南京210014 2. 西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌,712100 3. 南京农业大学植物保护学院,江苏南京,210095 4. 扬州大学生物科学与技术学院,江苏扬州,225009 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，江苏省农业科技自主创新基金项目 |
| 摘 要： | 该研究采用NCBI蛋白分析软件对Cry2Ad2蛋白序列进行分析,采用PCR克隆获得3种不同长度的cry2Ad2及全长cry2A d2基因片段,并将这些基因片段克隆到pET-26b载体上,构建重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3,再导人大肠杆菌BL21(DE3)中进行细胞周质诱导表达,并采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾的毒力.Cry2Ad2蛋白的序列分析结果表明:全长的Cry2Ad2蛋白包含两个保守区域domain I(第53位～第264位氨基酸)和domainⅡ(第267位～第472位氨基酸),推测保守活性片段C端末端在N-端的第472位与第633位氨基酸之间.重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3在大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳验证分别含有约70000、52000、51000和54000的表达蛋白.生物活性初步测定结果表明:表达的Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2及Cry2Ad2-3给药72h后对小菜蛾都具有杀虫活性,其中蛋白Cry2Ad2、Cry2Ad2-2与Cry2Ad2-3对小菜蛾有较强的毒性,相同剂量致死率分别为64.35％、53.27％和61.66％,统计分析表明蛋白Cry2Ad2-1与Cry2Ad2-3的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率无显著差异,(P＞0.05)；蛋白Cry2Ad2-2对小菜蛾的毒力相对较低,相同剂量致死率为39.89％,蛋白Cry2Ad2-2的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率差异显著(P＜0.05).鉴此,初步推断Cry2Ad2蛋白对小菜蛾的活性区在第49位与第463位氨基酸之间. |
| 关 键 词： | 苏云金芽孢杆菌 Cry2Ad2蛋白 活性区 小菜蛾 |
Prokaryotic expression and toxicity analysis of truncated insecticidal protein Cry2Ad2 from Bacillus thuringiensis |
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| XIE Ya-jing , FENG Ji-nian , ZHANG Cun-zheng , WANG Yun , ZHAO Long-long , LIU Xian-jin.Prokaryotic expression and toxicity analysis of truncated insecticidal protein Cry2Ad2 from Bacillus thuringiensis[J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences,2011,27(6). | |
| Authors: | XIE Ya-jing FENG Ji-nian ZHANG Cun-zheng WANG Yun ZHAO Long-long LIU Xian-jin |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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