| 幽门螺杆菌空泡毒素P58亚单位在酵母系统中的表达 |
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| 引用本文： | 黄增荣,王建华,兰春慧.幽门螺杆菌空泡毒素P58亚单位在酵母系统中的表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(5):12-16. |
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| 作者姓名： | 黄增荣 王建华 兰春慧 |
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| 作者单位： | 黄增荣,王建华,HUANG Zeng-rong,WANG Jian-hua(西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨陵,712100);兰春慧,LAN Chun-hui(第三军医大学,大坪医院野战外科研究所消化内科,重庆,400042)
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| 摘 要： | 【目的】构建幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)P58亚单位酵母双杂交诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统筛选与空泡毒素P58亚单位相互作用的蛋白奠定基础。【方法】采用PCR方法,从幽门螺杆菌s1/m1型标准毒株NCT11637基因组中扩增空泡毒素P58亚单位,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后克隆入经同样酶切处理的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,构建pGBKT7-VacA P58重组质粒,并将其转化E.coliDH5α,提取质粒经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切、测序鉴定正确后,转化入宿主酵母菌AH109,色氨酸(Trp)缺陷压力筛选,对阳性转化酵母菌扩大培养,提取总蛋白进行Western-blot鉴定,同时检测重组蛋白有无毒性、渗漏和自激活活性。【结果】成功扩增长度为1202bp的空泡毒素P58片段,重组质粒pGBKT7-VacA P58经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切可得到1202bp大小的片段,测序结果显示扩增产物序列与参考序列完全匹配。重组质粒pGBKT7-VacA P58成功地转化至酵母细胞AH109中。表达的诱饵蛋白无毒性、无渗漏及无自激活活性,Western-blot分析证实酵母菌AH109细胞正确表达了重组蛋白。【结论】成功构建了幽门螺杆菌空泡毒素P58亚单位酵母诱饵表达载体,其可在酵母菌系统中成功表达,且表达产物正确。
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| 关 键 词： | 幽门螺杆菌 酵母双杂交 空泡毒素 P58亚单位 |
| 收稿时间： | 2008/12/15 0:00:00 |
Construction and identification of the Yeast Two-Hybrid System bait expression vector of Helicobacter pylori Vacuolating cytotoxin A P58 subunit |
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| HUANG Zeng-rong,WANG Jian-hua,LAN Chun-hui.Construction and identification of the Yeast Two-Hybrid System bait expression vector of Helicobacter pylori Vacuolating cytotoxin A P58 subunit[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2009,37(5):12-16. |
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| Authors: | HUANG Zeng-rong WANG Jian-hua LAN Chun-hui |
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| Institution: | 1 College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 Department of Gastroenterology,Daping Hospital,the Third Military Medical University,Chongqing 400042,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | |
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