H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

【目的】构建H9N2禽流感病毒（AIV）纳米抗体（Nbs）酵母双杂交文库，为后期筛选H9N2 AIV Nbs奠定基础。【方法】以H9亚型禽流感疫苗（F株）免疫双峰驼，当血凝抑制（HI）抗体滴度大于1∶2⁴时，颈静脉采集血液，分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA，用反转录试剂盒合成第一链cDNA，再以此为模板，通过巢式PCR扩增Nbs基因片段。将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞，转化产物涂布SD/-Leu平板，30 ℃倒置培养约4 d，收集平板上的全部菌落，构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库，并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定。【结果】经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后，双峰驼HI抗体滴度可达1∶2⁹；通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因。对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明，其库容为2.4×10⁸，滴度为4.2×10⁹ CFU/mL，插入重组率为95.6%；随机挑取10个克隆测序，结果显示均符合Nbs序列特征，且为独立克隆，表明文库多样性良好。【结论】成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库，且文库各项指标均达到了要求。