| 秦川牛ADIG基因重组腺病毒过表达载体的构建与病毒包装 |
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| 引用本文： | 张 琼,姜碧杰,成 功,等.秦川牛ADIG基因重组腺病毒过表达载体的构建与病毒包装[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(8):33-38. |
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| 作者姓名： | 张 琼 姜碧杰 成 功 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院,西北农林科技大学 动物科技学院,西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 国家转基因重大专项（2013ZX08007 002）；“十二五”国家“863”计划项目(2013AA102505)；国家现代农业（肉牛牦牛）产业体系专项（CARS-38）；国家自然科学基金项目（31272411）；陕西省科技统筹创新工程计划项目（2014KTZB02-02） |
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| 摘 要： | 【目的】构建秦川牛ADIG基因的重组腺病毒载体,包装并扩繁病毒,为下一步研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子作用机制和相关信号通路奠定基础。【方法】根据NCBI收录的家牛ADIG基因(NM_001113720.1)mRNA序列设计引物,以秦川牛组织样提取的总RNA反转录而成的cDNA为模板,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接到pMD19-T Simple载体并测序。质粒提取纯化后通过BglⅡ与SalⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack/CMV-ADIG。将pAdTrack/CMV-ADIG质粒用PmeⅠ酶切线性化,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,构建重组腺病毒质粒pAD-ADIG,并用PacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化大肠杆菌Top10进行扩繁。用PacⅠ酶切线性化pAD-ADIG载体并回收质粒大片段,转染293A细胞进行病毒包装,然后完成病毒扩繁和病毒滴度的测定。【结果】PCR扩增获得了399bp ADIG基因CDS区;成功构建了重组穿梭质粒pAdTrack/CMVADIG和重组腺病毒质粒pAD-ADIG。经检测,ADIG重组腺病毒包装成功,扩繁后得到了高滴度的腺病毒(1×108PFU/mL)。【结论】成功构建了秦川牛ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAD-ADIG,完成了病毒包装和扩繁。
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| 关 键 词： | ADIG 腺病毒 同源重组 秦川牛 |
| 收稿时间： | 2014/1/17 0:00:00 |
Construction of recombinant adenovirus vector and viral packaging of ADIG gene in Qinchuan cattle |
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| ZHANG Qiong,JIANG Bi-jie and CHENG Gong,et al.Construction of recombinant adenovirus vector and viral packaging of ADIG gene in Qinchuan cattle[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(8):33-38. |
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| Authors: | ZHANG Qiong JIANG Bi-jie and CHENG Gong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ADIG adenovirus vector homologous recombination Qinchuan cattle |
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