鸡安卡拉病的流行病学调查与诊疗分析

鸡安卡拉病也叫心包积水-肝炎病,是1987年在巴基斯坦安卡拉地区出现的疾病,也是近几年在我国新出现的疾病。该病是由腺病毒Ⅲ亚型引起的鸡传染性疾病,初步认为本病的病原为腺病毒。患鸡肝细胞内有嗜碱性核内包含体,并且肝匀浆经无菌处理后,可以复制出相同的病症。在电子显微镜下,可从病鸡肝中观察到呈二十面体的病毒,并分离出血清型不同的多株腺病毒。     

我国禽腺病毒流行现状及防控要点

禽腺病毒在2015年开始在我国暴发流行,起初是以FAdV-4流行,从2018年后FAdV-4和FAdV-8都开始流行,目前主要感染肉鸡、蛋鸡和种鸡,近两年在水禽上发生率较低,目前禽腺病毒疫病对我国家禽养殖业带来严重的危害,给家禽养殖业造成严重的损失.本文通过对禽腺病毒Ⅰ群目前血清型流行情况,预防与治疗等相关情况进行综合阐述,为今后在临床上更好预防和治疗禽腺病毒疫病提供理论基础.     

鸡源抗血清4型Ⅰ群禽腺病毒单链抗体文库构建及筛选

为构建鸡源抗血清4型Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-4)单链抗体(scFv)文库并筛选出具有高亲和力的单链抗体。本研究从FAdV-4免疫鸡的外周血淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增出鸡抗体的VH和VL基因,通过Linker接头将VH和VL基因连接成scFv,将scFv基因连接至噬菌粒载体pComb3XSS中,构建单链抗体文库,通过噬菌体展示技术筛选抗FAdV-4单链抗体,并采用Phage ELISA方法检测抗体的亲和力。结果成功构建鸡源抗FAdV-4单链抗体文库,库容量为9.5×10~(10) PFU/mL,通过4轮"吸附-洗脱-富集"筛选,最终鉴定出1株与FAdV-4具有较高的亲和活性的单链抗体。该研究结果为进一步研究FAdV-4抗体奠定了基础。     

基于Fiber1基因分型的安卡拉病毒感染病例实验室检测

为确诊贵州省某养鸡场发生疑似安卡拉病毒感染的病例,实验基于安卡拉病毒Fiber1基因设计合成引物,对病料样本进行病原核酸检测和核酸测序与序列分析。结果:(1)从病例的肝脏样本中扩增出大小约1 296 bp的Fiber1基因目的片段,与预期结果相符。(2)序列测定与分析显示,扩增的Fiber1基因序列与国内分离株序列同源性高,亲缘关系近。(3)系统进化分析显示,感染病例中的安卡拉病毒流行株(命名为:GZ-LPS)与K31、MX-SHP9、ON1和河北、江苏等地的FAdV-4分离株处于同一进化分支,而与其他血清型禽腺病毒株处于不同进化分支。结论:此次疫情经实验室诊断,确定为禽腺病毒Ⅰ群C种血清4型的安卡拉病毒感染所致。     

传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建

【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)G基因,构建其重组腺病毒载体,为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因,将G基因插入到腺病毒穿梭载体中,再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组,构建重组腺病毒质粒,通过PCR扩增及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装,获得带有目的基因的重组腺病毒,通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒,用Western-blot法检测糖蛋白的表达,并测定重组腺病毒的TCID_(50)。【结果】成功克隆出IHNVG基因,其长度为1 533bp。成功构建了IHNV G蛋白重组腺病毒载体。GFP监测显示,重组腺病毒转染成功。重组腺病毒能在HEK-293细胞中表达出分子质量约58ku的产物,与预期相符,其TCID_(50)达到1.0×10~(10.4)mL~(-1)。【结论】成功构建了带有IHNVG基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒能高效表达,滴度较高。     

禽腺病毒4型XZ株增殖与纯化方法的建立

2015年7月以来,禽腺病毒4型在中国的大部分地区暴发流行,并造成重大损失。为进一步对该病毒进行研究,采用两种方法对所分离的XZ株进行体外增殖培养,并利用透射电镜观察到完整的病毒粒子,同时采用超滤浓缩和凝胶层析的方法对病毒进行纯化。结果显示,成功建立了稳定的禽腺病毒4型XZ株增殖体系,以及温和、高效的病毒纯化工艺,且纯化病毒感染性强,具有很好的免疫原性。     

Dvl1及其突变体腺病毒载体的构建与在MSCs中表达鉴定

Dvl1及其结构缺失突变体ΔDIX（dsh and axin）和ΔDEP（dsh,Egl-10 and pleckstrin）腺病毒载体的构建并验证其在MSCs（mesenchymal stem cells）中的表达情况。将目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭载体上,并经PmeⅠ线性化后在BJ5183细菌中与pAdEasy-1骨架质粒同源重组,获得重组腺病毒载体,在QBI-293A细胞中包装及扩增,实时荧光定量PCR和Western bolt验证Dvl1在MSCs中的表达情况。经PCR、PacⅠ单酶切鉴定及测序分析,成功构建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,目的基因序列与GenBank报道一致,并选出150 MOI为最适感染MSCs的感染复数,成功构建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒载体,并获得高滴度的病毒子,qPCR和Western blot证实Dvl1在MSCs中高表达并增加了β-catenin在细胞中的累积,为进一步研究Dvl1在MSCs迁移过程的作用奠定了基础。     

犬传染性肝炎

<正>犬传染性肝炎是由犬传染性肝炎腺病毒引起的犬科动物的一种急性,高度接触性败血性的传染病。1流行病学本病的主要传染源是患病犬和带毒犬,病犬的分泌物及排泄物都含有大量的病毒,易感犬通过直接或间接接触而感染,本病的发生不分品种和年龄,不满一年的幼犬易感性更高,死亡率也更高。康复犬通过尿液可长期向外带毒。2临床症状本病自然发病潜伏期为6~9d,病犬精神沉郁,食欲不振,喜欢喝水,心跳加快,呼吸加快,体温升高,呕吐,腹泻,还     

猪腺病毒3型Hexon蛋白多克隆抗体制备与免疫活性鉴定

本研究旨在制备猪腺病毒3型(PADV-3)Hexon蛋白多克隆抗体。试验构建重组原核表达载体pET28a-Hexon,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行Western blotting鉴定,目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫家兔制备Hexon蛋白多克隆抗体。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性与抗体滴度。结果显示,Hexon蛋白原核表达以包涵体形式存在,分子质量约为105ku;真核细胞表达的Hexon蛋白均定位于HEK293细胞质内,细胞核内无分布;IPMA测定所制备的多克隆抗体滴度为1∶1 600,该抗体与体外培养的PADV-3及稳定表达Hexon蛋白的细胞均呈特异性反应。结果表明本试验制备的PADV-3型Hexon蛋白多克隆抗体免疫活性和特异性良好。     

中西药结合治疗犬传染性肝炎

<正>犬传染性肝炎是由犬腺病毒Ⅰ型引起的一种急性败血性接触性传染病,其主要发生于犬,表现为肝炎和眼部疾患。临床上以马鞍型热,严重血凝不全,肝区疼痛,角膜混浊等为特征的疾病。1发病情况黑龙江省铁力市某林业局张某的养犬场,饲养肉犬68只,有繁殖母犬24只,其中牧羊犬6只,公犬8只,其余是仔犬。于2012年2月初的一天,张某在市场上买了4只幼犬,当时感到价格很便宜,买回后在圈的一