| 甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建 |
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| 引用本文： | 汪淼,李双喜,桂意云,秦翠鲜,陈忠良,廖青,李杨瑞,黄东亮.甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建[J].广西农业科学,2014(4):532-539. |
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| 作者姓名： | 汪淼 李双喜 桂意云 秦翠鲜 陈忠良 廖青 李杨瑞 黄东亮 |
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| 作者单位： | [1]广西农业科学院甘蔗研究所/广西甘蔗遗传改良重点实验室/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室,南宁530007 [2]中国农业科学院甘蔗研究中心,南宁530007 [3]广西农业科学院农业资源与环境研究所,南宁530007 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31160301）;“十二五”农村领域国家科技计划项目（2013AA102604-1）;广西自然科学基金项目（2011GXNSFF018002）;广西农业科学院基本科研业务专项项目（桂农科2012JM06,桂农科2012YZ11,桂农科2013YM41） |
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| 摘 要： | 目的]克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础.方法]通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA.扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHANNIBAL构建该片段的hpRNA结构,然后用NotⅠ将整个hpRNA结构切下,克隆到双元植物表达载体pART27上,构建该基因的hpRNA表达载体.结果]通过同源克隆和RACE技术获得SofSPSDⅢ基因全长cDNA序列,该基因全长3252 bp,5 ＇端UTR长度59 bp,3 ＇端UTR长度292 bp,开放阅读框（ORF）长度2895 bp,带有真核生物典型的poly（A）尾巴（GenBank登录号：HQ117935）.该基因编码蛋白含有964个氨基酸,理论分子量108.03kDa,等电点pI=6.66;SofSPSDⅢ与SoSPS2、SbSPS和TaSPS9的氨基酸序列同源性分别为99.0％、98.9％和90.0％.构建获得SofSPSDⅢ基因的hpRNA载体pART-DⅢ-Ri.结论]成功克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建基hpRNA载体,可为下一步沉默该基因、进而解析该基因的生物学功能奠定基础.
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| 关 键 词： | 甘蔗 蔗糖磷酸合成酶 SofSPSDⅢ 克隆 发夹RNA 载体构建 |
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