酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建 |
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引用本文: | 梁景耀,黄功华,刘新光,梁念慈.酵母穿梭表达质粒pGBKT7-hCK2α'的构建[J].湛江医学院学报,2004,22(4):319-322. |
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作者姓名: | 梁景耀 黄功华 刘新光 梁念慈 |
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作者单位: | 广东医学院生物化学与分子生物学研究所 广东湛江524023
(梁景耀,黄功华,刘新光),广东医学院生物化学与分子生物学研究所 广东湛江524023(梁念慈) |
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基金项目: | 教育部科学技术研究重点项目 (0 30 96),广东省自然资金项目 (0 1 1 766),广东医学院标志性成果扶持项目(XK0 0 0 2 ) |
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摘 要: | 目的:用人蛋白激酶CK2α’(hCK2α’)cDNA片段构建酵母双杂交体系中“诱饵”载体。方法;通过PCR扩增已构建成功的重组质粒pThCKA’获得人CK2α’亚基编码区cDNA,将PstⅠ/NdeⅠ双酶切的PCR产物连接到同样酶切的“诱饵”载体pGBKT7,转化感受态细胞DH5α获得转化子.琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行限制性内切酶酶切与DNA测序的方法鉴定。将DNA测序验证的pGBKT7-hCK2α’转染感受态酵母株AH109.Westernblot签定hCK2α’蛋白表达.检测表达产物对报道基因的激活作用及对酵母株AH109的毒性。结果:限制性酶切结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论值推测值相符。重组质粒pGBKT7-hCK2α’转染的酵母株AH109中能够表达hCK2α’蛋白,pGBKT7-hCK2α’无自主激活报道基因的能力及对酵母的生长无毒性。结论:pGBKT7-hCK2α’酵母双杂“诱饵”载体构建获得成功,可应用于酵母双杂交体系。
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关 键 词: | 蛋白激酶CK2 酵母双杂交 PCR |
文章编号: | 1005-4057(2004)04-0319-04 |
修稿时间: | 2003年12月23 |
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