| 端粒酶基因的腺病毒包装条件优化及其 活性功能验证 |
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| 引用本文： | 贺小英,荆乾鸽,姜欣颖,袁婷,吴宪,佟瑞莹,王晶妍,马利兵.端粒酶基因的腺病毒包装条件优化及其 活性功能验证[J].南方农业学报,2019,50(6):1356-1361. |
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| 作者姓名： | 贺小英 荆乾鸽 姜欣颖 袁婷 吴宪 佟瑞莹 王晶妍 马利兵 |
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| 作者单位： | 内蒙古科技大学生命科学与技术学院,内蒙古包头,014010 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;内蒙古自治区自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的]构建携带人类端粒酶催化亚基基因(hTERT)的腺病毒载体并优化其包装条件,为进一步探究端粒酶与细胞重编程调控间的作用机理提供参考依据.方法]利用腺病毒载体pAdEasy-1构建携带hTERT基因的重组腺病毒载体,分别采用脂质体法和电转法及不同浓度胎牛血清在HKE293A细胞中进行包装,筛选出最佳病毒包装条件,收集重组腺病毒rAd-hTERT并体外感染小鼠胎儿成纤维细胞,验证重组腺病毒rAd-hTERT的活性功能.结果]以腺病毒载体pAdEasy-1为骨架质粒,成功构建获得携带hTERT基因的重组腺病毒载体(pAd-hTERT),其最佳病毒包装条件是采用脂质体法结合15%胎牛血清,此条件下收集获得的病毒滴度最高(1×1011 IFU/mL).以携带hTERT基因的腺病毒rAd-hTERT感染小鼠胎儿成纤维细胞72 h后,可扩增出片段大小约3450 bp的目的基因条带,即hTERT基因在小鼠胎儿成纤维细胞中成功表达.结论]采用脂质体法结合15%胎牛血清包装获得的携带hTERT基因重组腺病毒具有较高病毒滴度,感染小鼠胎儿成纤维细胞能成功表达hTERT基因,进一步证实端粒酶具有蛋白功能的生物学活性.
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| 关 键 词： | 端粒酶 腺病毒 细胞重编程 载体构建 病毒包装 功能验证 |
Packaging condition optimization and activity functional validation of adenovirus telomerase gene |
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| HE Xiao-ying,JING Qian-ge,JIANG Xin-ying,YUAN Ting,WU Xian,TONG Rui-ying,WANG Jing-yan,MA Li-bing.Packaging condition optimization and activity functional validation of adenovirus telomerase gene[J].Journal of Southern Agriculture,2019,50(6):1356-1361. |
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| Authors: | HE Xiao-ying JING Qian-ge JIANG Xin-ying YUAN Ting WU Xian TONG Rui-ying WANG Jing-yan MA Li-bing |
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