利用酵母双杂交系统筛选本氏烟中与RGSV P5互作的蛋白 |
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引用本文: | 熊桂红,胡昱颛,吴祖建.利用酵母双杂交系统筛选本氏烟中与RGSV P5互作的蛋白[J].江西农业大学学报,2023(2):404-412. |
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作者姓名: | 熊桂红 胡昱颛 吴祖建 |
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作者单位: | 1. 江西农业大学农学院/江西省薯芋生物学重点实验室;2. 福建农林大学植物病毒研究所 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(31960533,31870150);;江西省自然科学基金(20192BAB214004)~~; |
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摘 要: | 【目的】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSV P5是该病毒的沉默抑制子,在抵抗寄主RNA沉默中发挥重要作用。筛选、鉴定与水稻草状矮缩病毒(RGSV)沉默抑制子P5互作的寄主蛋白,为揭示水稻草状矮化病毒致病的分子机制提供理论基础,为该病毒病的防治提供有效策略。【方法】利用酵母双杂交技术筛选与水稻草状矮化病毒P5互作的寄主蛋白。提取感染水稻草状矮化病毒的水稻叶片的总RNA。依据P5基因的CDS序列设计特异性引物。利用RT-PCR技术获得P5基因,将P5基因构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7上,利用双酶切鉴定诱饵质粒。将诱饵载体pGBKT7、pGBKT7-P5、重组质粒pGBKT7-P5/pGADT7分别转化到酵母感受态细胞Y2H Gold中,通过观察其在缺陷培养基SD/-Trp、SD/-LeuTrp/上的生长情况及在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上的显色情况检测诱饵质粒的毒性和自激活活性。将烟草酵母cDNA文库质粒转化到含诱饵载体pGBKT7-P5的酵母感受态细胞中,先后用不同缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp、SD/...
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关 键 词: | 水稻草状矮化病毒 P5蛋白 酵母双杂交 蛋白互作 |
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