| 表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK-突变株的构建 |
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| 引用本文： | 范伟兴,宋建兰,魏荣,陈溥言,赵宏坤.表达绿色荧光蛋白的伪狂犬病毒Bartha-K61株TK-突变株的构建[J].畜牧兽医学报,2003,34(5):476-482. |
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| 作者姓名： | 范伟兴 宋建兰 魏荣 陈溥言 赵宏坤 |
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| 作者单位： | 1. 山东农业大学动物科技学院,泰安,271018
2. 南京农业大学动物医学院,南京,210095 |
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| 基金项目： | 山东省科技厅科技攻关项目(鲁科技字991154402) |
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| 摘 要： | 提取伪狂犬病毒(PRV)Bartha—K61株基因组DNA为PCR扩增模板，并根据GenBank已发表的PRV Ka—plan株UL区UL25、UL24、UL23、UL22基因序列，选择保守序列设计了两对引物，分别扩增出位于UL23(TK)两侧(含部分TK基因)的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R)，L包括部分UL25、全部UL24、部分TK，R包括部分TK及部分UL22，L和R的拼接片段中TK基因内部缺失270个核苷酸。将L片段和R片段克隆于pBlueseript M13—载体上，获得pSKLR；再将绿色荧光蛋白载体pEGFP—C1上含GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插人pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLRG。提取pSKLRG质粒，经单酶切线性化后用脂质体与PRV Bartha—K61株共转染143TK^-细胞，在细胞培养液中有5—溴脱氧尿嘧啶(BrdU)存在的条件下筛选出表达绿色荧光蛋白的重组PRV Bartha—K61毒株：PRV rBGFP。
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| 关 键 词： | 基因表达 绿色荧光蛋白 伪狂犬病毒 Bartha—K61株 TK^-突变株 基因构建 PCR扩增模板 DNA |
| 文章编号： | 0366-6964(2003)05-0476-07 |
Construction of TK Gene-deleted PRV Bartha-K61 Strain Recombinant Expressing EGFP |
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