| 非洲猪瘟病毒截短p54蛋白的原核表达与纯化 |
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| 引用本文： | 伦玉潇,李桂梅,单虎.非洲猪瘟病毒截短p54蛋白的原核表达与纯化[J].动物医学进展,2023(2):1-7. |
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| 作者姓名： | 伦玉潇 李桂梅 单虎 |
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| 作者单位： | 1. 青岛农业大学动物医学院;2. 山东省新兽药创制协同创新中心;3. 山东省兽药诊断试剂工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 山东省重点研发计划项目(2020CXGC010801-02)； |
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| 摘 要： | 旨在高效表达可溶性的非洲猪瘟病毒(ASFV) p54蛋白。去除可能影响p54蛋白可溶性表达的前50个氨基酸(aa),根据GenBank收录的ASFV p54基因序列设计引物，从第51个aa对应的基因序列起用PCR扩增截短的p54基因，并用分子克隆方法插入到带有TF及His标签的冷休克表达载体pCold TF上，构建pCold TF-p54重组质粒。经菌液PCR及测序验证后将重组质粒转化到BL21感受态细胞中，IPTG诱导表达p54重组截短蛋白，对IPTG诱导浓度、诱导时间进行优化，并对纯化重组蛋白时所用洗脱液的咪唑浓度进行探索。Western blot鉴定p54重组截短蛋白的反应原性，并探究TF标签对于该蛋白反应原性的影响。结果表明，成功构建了pCold TF-p54重组质粒，经终浓度为1 mmol/L的IPTG于16℃诱导9 h时，p54重组截短蛋白的表达量最高，分子质量约为76 ku。经50 mmol/L咪唑洗脱液洗脱可得到较纯的p54重组截短蛋白，经人鼻病毒(Human rhinovirus, HRV)3C Protease切除TF及His标签后，再次纯化可得到无标签且高纯度的p...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 pCold TF载体 原核表达 纯化 |
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