| 桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化 |
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| 引用本文： | 吴朝兴,蒋媛,王露蓉,顾彩彩,牛俊奇,孙波,李杨瑞,杨丽涛.桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化[J].南方农业学报,2016(4):524-529. |
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| 作者姓名： | 吴朝兴 蒋媛 王露蓉 顾彩彩 牛俊奇 孙波 李杨瑞 杨丽涛 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学农学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530005;2. 玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林,537000;3. 广西大学农学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁530005;广西农业科学院甘蔗研究所/中国农业科学院甘蔗研究中心/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007 |
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| 基金项目： | 国家“863”计划项目(2013AA102604)，广西八桂学者和特聘专家专项基金项目(厅发[2013]3号) |
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| 摘 要： | 【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亚基基因(rbc L和rbc S)的编码域序列(CDS)设计特异性引物,PCR扩增rbc L和rbc S基因的CDS,然后连接至原核表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒后转入原核细胞(大肠杆菌Rosetta)中诱导表达,用镍亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,并比较分析桂糖11号与其他甘蔗品种在rbc L和rbc S基因的CDS及编码蛋白序列方面的差异。【结果】rbc L和rbc S基因的CDS长度分别为1431和510 bp,其中桂糖11号rbc L基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登录号AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登录号KU214867)的一致,桂糖11号rbc S基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登录号JN591757)的存在7个碱基差异,但仅有2个氨基酸发生错义突变。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵体形式存在原核细胞中,用镍离子亲和层析纯化及超滤浓缩后其浓度均在1.0 mg/m L以上。【结论】从桂糖11号成功克隆Rubisco大亚基和小亚基基因的CDS,大亚基基因的CDS比小亚基的保守性更高,且均可在原核细胞中高度表达,经纯化浓缩获得的高纯度融合蛋白可用于制备Rubisco单克隆抗体。
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| 关 键 词： | 甘蔗 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco) 克隆 原核表达 融合蛋白 纯化 |
Cloning,prokaryotic expression and purification of Rubisco gene from sugarcane cultivar Guitang 11 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sugarcane ribulose-1 5-bisphosphosphate carboxylase/oxygenase (rubisco) clone prokaryotic expression fusion protein purification |
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