| 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建 |
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| 引用本文： | 张雪寒,何孔旺,赵攀登,栾晓婷,叶青,温立斌,倪艳秀,李彬,郭容利,王小敏,周俊明,俞正玉,茅爱华,吕立新.肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建[J].江苏农业学报,2012(2):337-343. |
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| 作者姓名： | 张雪寒 何孔旺 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 倪艳秀 李彬 郭容利 王小敏 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 |
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| 作者单位： | 江苏省农业科学院兽医研究所,农业部兽用生物制品工程技术重点实验室,国家兽用生物制品工程技术研究中心 |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金项目(BK2010068);江苏省农业支撑计划-社会发展项目(BE2011771);江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(09)106] |
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| 摘 要： | 为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。
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| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因 缺失株 小鼠 黏附 |
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