表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 |
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引用本文: | 胡永新,赵永刚,张永强,刘拂晓,樊晓旭,吴晓东,王志亮.表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定[J].畜牧兽医学报,2019(8). |
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作者姓名: | 胡永新 赵永刚 张永强 刘拂晓 樊晓旭 吴晓东 王志亮 |
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作者单位: | 中国动物卫生与流行病学中心 |
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摘 要: | 本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10~9 IFU·mL~(-1);经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。
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