| 霜霉菌侵染后葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库构建 |
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| 引用本文： | 刘露露,曲俊杰,郭泽西,孙大运,潘凤英,尹玲.霜霉菌侵染后葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库构建[J].南方农业学报,2020,51(4):829-835. |
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| 作者姓名： | 刘露露 曲俊杰 郭泽西 孙大运 潘凤英 尹玲 |
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| 作者单位： | 广西农业科学院/广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007 |
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| 摘 要： | 目的]构建霜霉菌侵染后葡萄叶片的酵母双杂交cDNA文库,筛选致病因子在寄主葡萄体内的互作靶标,为葡萄霜霉病菌致病的分子机理研究提供材料基础.方法]以一年生欧亚种葡萄西拉盆栽苗为试验材料,提取并等量混合霜霉菌侵染后0、12、18、24和36 h的葡萄叶片总RNA,利用基于Gateway技术的CloneMiner II cDNA文库构建试剂盒:首先将cDNA与pDONR222载体进行BP重组反应连接,连接产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建初级文库;然后初级文库质粒与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,重组反应产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建次级文库;再随机挑取次级文库转化Y187酵母菌株构建酵母双杂交cDNA文库;最后利用ImageJ软件和PCR反应分别统计库容量和鉴定重组率.结果]构建的初级文库库容量为4.6×107 CFU,次级文库库容量为2.7×107 CFU,均达到构建cDNA文库的标准.酵母双杂交cDNA文库的插入片段主要集中在1000~2000 bp,且具有很好的多态性,文库质量较高.结论]构建的霜霉菌诱导葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库符合酵母双杂交筛选要求,可用于筛选霜霉菌致病效应蛋白在寄主体内的靶标及霜霉菌侵染寄主葡萄早期抑制寄主免疫过程中的致病机理研究.
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| 关 键 词： | 霜霉菌 葡萄 酵母双杂交 cDNA文库 |
Construction of a yeast two-hybrid cDNA library from Vitis vinifera leaves infected by downy mildew |
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| LIU Lu-lu,QU Jun-jie,GUO Ze-xi,SUN Da-yun,PAN Feng-ying,YIN Ling.Construction of a yeast two-hybrid cDNA library from Vitis vinifera leaves infected by downy mildew[J].Journal of Southern Agriculture,2020,51(4):829-835. |
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| Authors: | LIU Lu-lu QU Jun-jie GUO Ze-xi SUN Da-yun PAN Feng-ying YIN Ling |
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