奶牛MTT比色法的最佳条件探讨

为建立奶牛淋巴细胞增殖反应MTT比色法,对试验条件进行了研究。应用L16(45)正交试验,对影响MTT比色法的四个主要因素,包括ConA浓度、细胞浓度、培养液小牛血清浓度及培养时间进行了比较和探索。试验表明几个因素对其增殖反应都有显著影响(P<0.05),且最佳反应条件为:15μg/mL的ConA、1×106/mL细胞浓度、10%小牛血清及60h的培养时间;影响增殖反应的先后顺序为细胞浓度、ConA浓度、培养时间及血清浓度。     

利用菜青虫细胞检测几种有机溶剂和有机磷农药的毒力

用MTT法研究了5种有机溶剂对菜青虫细胞生长的影响及3种有机磷农药对细胞的毒力。并用微量点滴法测定了3种农药对菜青虫3龄幼虫的毒力。结果表明,5种有机溶剂除二甲苯外,其余4种二甲亚砜、乙醇、丙酮、乙酸乙酯对菜青虫细胞低浓度处理时均无很大毒性。1％浓度处理16小时后细胞存活率仍分别可达99.8％、98％、97.2％、91％。分别用菜青虫细胞测得3种有机磷农药的LC_(50)为:甲基对硫磷,106μs/ml;克线磷,147μg/ml;水胺硫磷,183μg/ml。用微量点滴法测得3种有机磷农药对菜青虫3龄幼虫的LD_(50)分别为:甲基对硫磷,0.458μg/头,克线磷,45.012μg/头;水胺硫磷,0.505μg/头。     

鸡白细胞介素-6活性MTT检测方法的建立

采用白细胞介素-6依赖细胞株B9建立了鸡白细胞介素-6活性的MTT检测方法。每孔培养细胞数在2.5×103~4×104范围内D值与细胞数显示有良好的线性关系,MTT的最佳保留时间为4 h,最低检测限为0.1 U/mL。应用该方法检测了健康艾维茵肉鸡25例,血清chIL-6活性为(4.33±0.75)U/mL,而25例葡萄球菌病患鸡血清chIL-6的活性为(14.05±6.87)U/mL,与健康肉鸡比较差异极显著(P<0.01),为该方法进一步临床应用奠定了基础。     

mLIF、bFGF和SCF对鸡精原干细胞体外增殖的影响

采用MTT法分别检测mLIF、bFGF和SCF 3种细胞因子在单独添加和联合使用时对体外培养条件下的SSCs增殖的影响。结果表明:①3种细胞因子分别单独添加时,各实验组增殖效应与对照组比较差异显著(P<0.05);②3种因子联合使用时,低剂量组合共同促进SSCs的增殖,高剂量组合则抑制SSCs的增殖;③SCF、bFGF和mLIF的适宜剂量分别为10～20、10～20和10～15 ng/mL。     

应用噻唑蓝法初步研究兔外周血单个核细胞转化的条件

应用噻唑蓝法研究了ＰＨＡ－Ｐ引起兔外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）转化的最适条件,培养时间为４８ｈ,ＰＢＭＣ密度为５×１０１２／Ｌ,ＰＨＡ－Ｐ的终浓度为０．５ｍｇ％。并测定了在此最适条件下的吸光值（ＯＤ）,为０．２７６±０．１４２。     

黄芪多糖对雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能的影响

将１０８只１日龄伊莎系蛋用公雏均分为３组：一组为对照,其余２组在３日龄时,于背侧颈部皮下分别注射０．２、０．４ｍＬ黄芪多糖注射液（０．０１ｇ／ｍＬ）１次,再分别于７、２１、３５、４９日龄时采用ＭＴＴ比色法及微量全血培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测外周血Ｔ淋巴细胞转化率的动态变化。结果表明,黄芪多糖对２１、３５日龄雏鸡Ｔ淋巴细胞转化功能有增强作用,且与剂量有相关性,而对７、４９日龄雏鸡的作用不明显。ＭＴＴ比色法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法的检测结果无显著差异（Ｐ＜０．０５）。     

锌对几种淋巴类细胞生长和功能影响的研究

本文研究比较了锌和螯合剂ＥＤＴＡ对淋巴类细胞株ＰＤｃ－Ｂ－１、Ｊｕｒｋａｔ、ＢｏＬｃＬ、６Ｃ９和奶牛ＰＢＭＣ增殖及功能的影响。除奶牛ＰＢＭＣ之外，锌对各株细胞的增殖和功能均无促进作用，在浓度为１０￣１００μｍｏｌ／Ｌ时有明显抑制甚至毒性作用。ＥＤＴＡ对各株细胞的增殖只有抑制作用，在同一浓度时对杂交瘤细胞增殖和抗体分泌的抑制作用基本一致，而对ＰＢＭＣ增殖和Ｉｇ分泌程度不同的抑制作用，是因为不同功能的     

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞，通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力，进而对血清质量作出评价。结果表明，自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率＞0.96)，并且3次试验结果比较差异不显著(P＞0.05)，具有较好的重复性；而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。     

Cloning of two Atlantic salmon growth hormone receptor isoforms and <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis> ligand-binding response

Two isoforms of the full-length cDNA of the growth hormone receptor (GHR) of the Atlantic salmon (Salmo salar; ss) were cloned by a PCR approach using RACE. Respectively, the cDNA sequences of ssGHR isoforms 1 and 2 are 2654 and 2608 nucleotides long, with 1782 and 1773 nucleotide ORFs. The resulting coded proteins are 594 and 590 aa long, with 19 and 20 aa signal peptides. The two isoforms share 86% protein and 87% cDNA sequence similarity. Isoform 1 is most similar to other salmonid GHR isoforms 1 while isoform 2 is most similar to salmonid GHR isoforms 2 (93–95%). Similarity with other teleost species was lower (37–44%). The bioactivity of the cloned ssGHR was tested by transfecting the ssGHR isoform 1 cDNA into CHO-K1 hamster cells, incubating with recombinant salmon GH (sGH) or native ovine prolactin (oPRL), and measuring cell proliferation by the MTT assay. The ssGHR-transfected cells significantly increased proliferation when stimulated by sGH at all concentrations. oPRL stimulated ssGHR-transfected cells at higher concentrations due to receptor cross reaction. ssGHR isoforms 1 and 2 contain a single transmembrane domain and the typical conserved motifs found in other teleost GHRs, including four paired cysteine residues and five potential N-glycosylation sites in the extracellular domain, Box I and Box II, as well as seven potential tyrosine phosphorylation sites in the intracellular domain. However, in salmonids, these motifs differ from those of other teleosts, and could be responsible for differentiated hormone binding, signal transduction and response.     

大型毒菌发酵液提取物对前列腺癌细胞增殖的作用

通过MTT试验,评定大型毒菌发酵液提取物的直接细胞毒活性。结果表明：3个菌株发酵液提取物两种浓度组对PC-3细胞均有很好的抑制作用,与对照相比抑制效果差异显著（P〈0.05）;不同药物、不同浓度组作用时间点均以120 h抑制率最高;不同浓度组作用120 h,以高浓度组抑制率最高。菌株CM4高浓度组给药120h对PC-3细胞的抑制活性最高,抑制率为90.23%;其次为CM4低浓度组,给药120h抑制率为86.37%。菌株CM4大型毒菌发酵液提取物对人前列腺癌细胞PC-3有明显的抗肿瘤作用。