超声聚焦微喷制备脂质体微阵列研究

设计了基于超声换能器和球面声透镜的超声聚焦微喷头及向下隔离喷射机构,实现了无喷嘴、无堵塞、非接触、低消耗、高精度的微阵列制备.为验证其生物相容性,以载有F0F1- ATP酶的分子马达脂质体为对象,制备出了形状规则、定位准确的脂质体微阵列,并对其ATP水解活性和合成活性进行了检测.实验结果表明,所制备的微阵列生物芯片在相关光化学刺激下具有良好的ATP水解与合成活性,从而证实该方法在微阵列生物芯片制备过程中能够较好地保持样品的生物活性.     

甲砜霉素脂质体制备和体外抑菌效果

采用逆相蒸发法制备甲砜霉素脂质体，以包封率为指标，通过正交试验优化处方及制备工艺；并对其进行体外抑菌试验。优化后的处方和制备工艺因素为：药脂比为1：5（W：w），磷脂与胆固醇比为4：1（W：w），PBS缓冲液pH7．4；超声7min（连续超声裂解10S，间隔1s），蒸发温度为40℃，冻融3次。甲砜霉素脂质体对致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌的体外抑菌效果较其原粉提高4～8倍；但在试验浓度下对上述3种病原菌的体外杀菌效果差异不显著。     

转移因子纳米脂质体的制备及检测

为确定转移因子纳米脂质体的最佳制备工艺,以及保质期。本研究采用逆相蒸发法制备,以包封率为优化指标,正交试验优选最佳配方。电镜下观察形态,检测包封率、渗透率。结果确定最佳制备工艺:卵磷脂/胆固醇(摩尔比)为2:1,转移因子(TF)浓度为6mg/m l,吐温-80为1m l,有机相/水相(体积比)为4:1。电镜下大部分粒径小于100nm,分布均匀,包封率高达49.5%,四个半用后的渗透率为52.4%。优选工艺制备的转移因子纳米脂质体质量符合标准,具有一定的稳定性。     

脂质体法构建广西巴马小型猪转基因体细胞及转基因克隆胚的生产

脂质体法是一种传统的向哺乳动物细胞导入外源基因的方法,然而其转染效率受多种因素影响。本研究将从脂质体和质粒DNA量、转染暴露时间以及混合孵育时间等四方面进行探索,以寻找最佳的转染体系。试验结果表明最佳转染体系为：脂质体1.25μL、DNA 0.7μg、脂质体-DNA混合孵育0 min以及转染暴露6 h。随后我们用优化过的转染体系对新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞进行转绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）操作,获得了（26.45±2.11）%的转染率,并以此为核供体经体细胞核移植技术成功构建表达GFP的广西巴马小型猪克隆胚胎,同时证实转基因克隆胚的体外发育能力比得上非转基因克隆胚。这为我们构建用于人类疾病研究的基因修饰广西巴马小型猪奠定了基础。     

磷脂酰胆碱反应体系的建立

采用2-油酸-1-棕榈酸磷脂酰胆碱为表面活性剂、低级醇为助表面活性剂、异辛烷为油相、蒸馏水为水相,以伪三元相图微乳面积大小为指标,考察磷脂酰胆碱微乳体系.结果表明,磷脂/正丙醇/异辛烷/水W/O徽乳体系、磷脂/正丁醇/异辛烷/水W/O微乳体系以及磷脂/正丙醇/异辛烷/水O/W微乳体系均为稳定的磷脂酰胆碱微乳体系.3种微乳体系和脂质体分别与鸭肉肌内磷脂酶振荡反应10h后,采用TLC联用Quantity One软件鉴定反应产物中的脂肪酸,以脂肪酸斑点分析的Trace Qty值为指标,最终确定磷脂酰胆碱反应体系.因此,以脂质体作为反应体系所产生的脂肪酸最多,即脂质体为磷脂酰胆碱最佳反应体系.为进一步研究磷脂酰胆碱的酶解机制和磷脂酶的分离纯化提供技术方法.     

脂质体介导法转染体细胞效率的优化

为建立脂质体介导的高效体细胞转染体系,采用脂质体TransfastTM包裹编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pCMV-EGFP质粒,转染5～13代山羊胎儿成纤维细胞,并用流式细胞仪检测不同DNA剂量、细胞汇合度、血清、转染时间及脂质体与DNA比例等参数对转染效率的影响。实验发现0.75μgDNA按1∶1的脂质体与DNA比例,在无血清条件下转染汇合50%细胞3h,转染效率最高可达40.7%±5%。4h转染时间、细胞汇合80%及转染体系中有血清会降低转染效率。随着DNA剂量的增加,转染效率呈剂量依赖性增高,但山羊成纤维细胞的活细胞数显著下降。实验表明TransfastTM能高效安全地介导外源基因转染山羊成纤维细胞。     

生长激素（PST）脂质体的制备

 用冰冻熔融法制备脂质体，包封率可达29％，当n（卵磷脂）∶n（胆固醇）=5∶2（摩尔比），超声时间3 min，中性环境，冰冻24 h或4 ℃贮藏3 d，其稳定性良好，包封率（29.1±0.4）%，变化不显著。     

正交试验优选隐丹参酮脂质体的制备工艺

优化隐丹参酮脂质体的最佳制备工艺条件。采用溶剂分散法制备隐丹参酮脂质体,以包封率为指标,以药脂比、膜材比、反应温度和反应时间为因素,采用L9(34)正交试验设计对制备条件进行优选,透析法测定隐丹参酮脂质体的包封率,透射电镜和激光粒度仪测定其形态和粒径。溶剂分散法制备隐丹参酮脂质体的最佳工艺为:药脂质量比1∶20,膜材质量比4∶1,反应温度30℃,反应时间6min;平均包封率为(87.31±1.45)%;粒径集中分布在(176±5.65)nm,且隐丹参酮脂质体形态和粒径均匀,重现性好。     

维生素C脂质体的制备研究

优化制备维生素C脂质体的配方,采用薄膜分散-超声乳化法制备.以包封率为考察指标,经正交优化选择,确定脂质体的最佳配方:卵磷脂/胆固醇/维生素E的摩尔比为4∶2∶0.34;维生素C的浓度为3.3 mg/mL;PBS缓冲液的pH值为7.93;成膜时所用氯仿的量为30 mL,此时包封率可达58.32%.用扫描电子显微镜观察脂质体的结构,平均粒径为310 nm.     

阿莫西林脂质体的制备及质量评价

采用薄膜分散法制备阿莫西林脂质体,以粒径和包封率为指标评价其质量.前期以正交设计优化筛选出最佳制备工艺,以最优工艺制备阿莫西林脂质体,测定其平均粒径和包封率.实验所制得的脂质体的平均粒径为114.6 nm,包封率为64.89％.结果表明,采用薄膜分散法制备阿莫西林脂质体的方法可行,阿莫西林脂质体的制备为兽药新剂型的研究与应用提供了有价值的参考.