Replication of neurovirulent equine herpesvirus type 1 (EHV-1) in CD172a+ monocytic cells

Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) is responsible for respiratory disorders, abortion and myeloencephalopathy (EHM) in horses. Two pathotypes of EHV-1 strains are circulating in the field: neurovirulent (N) and non-neurovirulent (NN). For both strains, CD172a⁺ monocytic cells are one of the main carrier cells of EHV-1 during primary infection, allowing the virus to invade the horse’s body. Recently, we showed that EHV-1 NN strains showed a restricted and delayed replication in CD172a⁺ cells. Here we characterize the in vitro replication kinetics of two EHV-1 N strains in CD172a⁺ cells and investigate if the replication of these strains is similarly silenced as shown for EHV-1 NN strains. We found that EHV-1 N replication was restricted to 7–8% in CD172a⁺ cells compared to 100% in control RK-13 cells. EHV-1 N replication was not delayed in CD172a⁺ cells but virus production was significant lower (10^3.0 TCID₅₀/10⁵ inoculated cells) than in RK-13 cells (10^8.5 TCID₅₀/10⁵ inoculated cells). Approximately 0.04% of CD172a⁺ cells produced and transmitted infectious EHV-1 to neighbour cells compared to 65% of RK-13 cells. Unlike what we observed for the NN strain, pretreatment of CD172a⁺ cells with histone deacetylases inhibitors (HDACi) did not influence the replication of EHV-1 N strains in these cells. Overall, these results show that the EHV-1 replication of N strains in CD172a⁺ cells differs from that observed for NN strains, which may contribute to their different pathogeneses in vivo.     

草莓miR156靶基因SPL9的克隆与表达分析

 【目的】从草莓中克隆SPL(SQUAMOSA promoter binding protein-like)转录因子基因SPL9,并分析其在草莓植株不同生长时期的表达水平及与miR156的表达关系,探讨SPL9在草莓植株生长发育中的作用。【方法】根据苹果SPL基因家族的保守序列设计简并引物,以草莓叶片为试材,利用RT-PCR克隆草莓SPL9基因片段,在此基础上利用RACE方法克隆SPL9的cDNA全长。利用实时定量RT-PCR技术分析草莓叶片中SPL9及miR156的表达水平。【结果】从草莓（Fragaria×ananassa）品种‘全明星’中克隆出SPL9基因的cDNA全长序列,命名为FaSPL9。其CDS长度为1 143 bp,编码381个氨基酸,与拟南芥AtSPL9、葡萄VvSPL9、枳PtSPL9、苹果MdSPL9以及玉米ZmSPL9的氨基酸序列同源性分别为：40.30%、64.57%、56.09%、70.33%,38.35%。FaSPL9有着高度保守的SBP结构域和一个双向核定位信号KRXXXRRRK。FaSPL9基因序列中包含miR156的靶位点,实时定量RT-PCR结果表明,在草莓植株的不同生长时期FaSPL9的表达量不同,且与miR156呈现相反的表达模式。【结论】从草莓中分离出FaSPL9基因,其作为miR156的靶基因,推测FaSPL9对草莓植株的生长发育具有重要的调控作用。     

水稻光温敏核不育系LY172S的选育

[目的]为籼型光温敏核不育系LY172S在水稻育种中的进一步应用奠定基础.[方法]介绍LY172S选育过程、特征特性、育性表现、抗病性、米质、可繁性与繁殖技术要点、配组情况.[结果]LY172S是以1892S为母本,以协青早B为父本杂交选育而成的籼型光温敏核不育系,不育性稳定、起点温度低、异交结实率高、米质好、配合力强.2012年安排了华中农业大学植物科学技术学院组织的人工光温育性鉴定,2012年8月通过安徽省品种审定委员会组织的专家鉴定.[结论]LY172S在今后的水稻育种中有广阔的应用前景.     

利用CRISPR技术鉴定拟南芥miR171a的功能

miRNA是一段长约21 nt的RNA小分子,能够影响多种植物生理生化功能。CRISPR/Cas9是近年发展的可以靶向编辑DNA序列的技术,已广泛应用于多种植物。miR171a是一类保守的miRNA家族,参与对植物生长发育和逆境胁迫的调控。利用CRISPR/Cas9技术鉴定拟南芥miR171a的功能,结果表明基因编辑拟南芥株系中的miR171a表达量降低,靶基因SCL22表达量上调。干旱处理后基因编辑拟南芥株系中的脯氨酸含量上升幅度小于野生型。基因编辑拟南芥株系的叶绿素含量有不同程度的降低,株高和生长势增强。干旱胁迫结果显示对miR171的抑制使得拟南芥抗旱能力减弱,表明利用CRISPR技术鉴定miRNA的功能是有效的。     

文心兰miR168分子进化特性及其对软腐病侵染的响应模式

【目的】探究文心兰miR168的分子进化特性,揭示文心兰miR168a及其候选靶基因响应软腐病菌侵染的表达模式。【方法】以文心兰miRNA文库、转录组数据库及miRbase数据库获取的植物miR168前体和成熟体序列为研究对象,利用生物信息学方法对其进行系统进化树构建、保守性分析、前体二级结构分析及靶基因预测;通过PCR技术克隆文心兰miR168a前体,采用qRT-PCR技术分析miR168a及其候选靶基因在文心兰不同组织（根、叶、假鳞茎）和感染软腐病（0,12,24,36和48 h）不同时间的表达模式。【结果】植物miR168序列保守性较高,来源于miR168前体的5p臂保守性高于3p臂,miR168前体分歧较大,茎序列的保守性高于环序列;从文心兰中克隆得到93 bp miR168a前体序列,包含21 nt miR168a成熟体序列。进化分析表明,物种亲缘关系对其前体和成熟体序列的形成影响较小;二级结构显示,文心兰miR168a前体能形成典型的发卡结构,其成熟体位于前体的5p臂;随着软腐病侵染时间延长,文心兰miR168a与其候选靶标RNA剪切复合体核心蛋白（AGO1）、RPM1互作蛋白（RIN4）、羧酸酯酶（CXE8）的表达趋势基本呈负相关,而与其候选靶标RNA解旋酶（PRH47A）、泛素羧基末端水解酶（UCH）的表达趋势呈正相关,说明可能存在其他miR168家族成员或miRNAs同时调控。【结论】文心兰miR168与其他植物miR168进化上兼具保守性和特异性,miR168a上调表达可能会增强文心兰的抗病性。     

MiR‐330‐5p negatively regulates ovine preadipocyte differentiation by targeting branched‐chain aminotransferase 2

The differentiation of preadipocytes into adipose tissues is tightly regulated by various factors including microRNAs and cytokines. This article aims to study the effect of miR‐330‐5p on expression of BCAT2 in ovine preadipocytes. Ovine preadipocytes were isolated, and we found that the miR‐330‐5p expression decreased gradually during the early differentiation of ovine preadipocytes, while BCAT2 expression increased. BCAT2 was identified as a direct target of miR‐330‐5p, ectopic expression of miR‐330‐5p could change the expression of both BCAT2 mRNA and protein. Silencing BCAT2 had the same inhibition effects as overexpressing miR‐330‐5p on the preadipocyte differentiation, but overexpressing BCAT2 had the converse effects. Taken together, we demonstrated that miR‐330‐5p is a negative regulator of differentiation by targeting BCAT2, and clarified the role of BCAT2 and miR‐330‐5p during preadipocyte differentiation.     

植物miR172家族成员进化与分子特性分析

为了解植物miR172家族成员的进化与分子特性,对mi Rbase数据库中37个物种的161个miR172前体序列和196个miR172成熟体序列进行进化规律分析,并对植物miR172家族的保守基序、二级结构和靶基因进行预测分析。结果表明:miR172家族成员分布的37个物种都是被子植物,被子植物很可能是miR172家族进化来源的祖先。进化分析表明,植物miR172家族成员序列相似性是其聚类的首要影响因素,其次才是物种差异的影响。植物miR172家族成员成熟体序列分析表明,5p臂上形成的成熟体序列特异性较大,3p臂上形成的成熟体序列保守性较高。二级结构分析发现,植物miR172家族成员具有典型的茎环二级结构,且茎序列的保守性较环序列高。植物miR172前体序列包含1个UNCG环。靶基因预测分析发现,同一物种不同miR172成员的靶基因可能不同;不同物种miR172的靶基因也可能不同,AP2或AP2-like出现频率最高,其次还有arginine decarboxylase 1、Pathogenesis-related、MYB84等靶基因,表明其靶基因功能的多样性。