白血病抑制因子（LIF）及其受体在月经 周期猕猴卵巢内的表达

应用免疫细胞化学方法对白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）、白血病抑制因子受体（leukemia inhibitory factor receptor, LIFR）和gp130在月经周期猕猴卵巢内的表达进行了研究。结果表明：LIF、LIFR和gp130在猕猴卵巢内的表达量随月经周期的不同而变化，LIF及其受体在增殖期卵巢内的表达量高于分泌期的卵巢。LIF及其受体在原始卵泡、腔前卵泡和有腔卵泡的卵细胞内表达量均较高，在颗粒细胞、卵泡膜、卵巢生殖上皮和卵巢基质中有少量表达，而在闭锁卵泡、退化的黄体和卵巢髓质中未见表达。LIF及其受体在猕猴卵巢内的表达可能受卵巢分泌的类固醇激素所调控，LIF可能通过自分泌或旁分泌的方式在猕猴卵泡发育及排卵等过程中起重要作用。     

梭梭属不同种源种子品质初评

梭梭属(Haloxylon Bge.)的两个种,主要分布在新疆准噶尔盆地,是优良防风固沙和薪炭树种,被列为国家重点保护植物。国内对两种梭梭的利用和研究,从50年代末就已经开始进行,至今已做了大量的工作,但对其种子特性的研究报道甚少。为了更深入了解梭梭两种植物的种子特性,我们于1987年选用吐鲁番沙漠研究站引种成功的两种梭梭(H.ammodendron、H.Persicum)的种子同原分布区莫索湾沙漠研究站采的种子,对其品质进行了对比试验分析,为梭梭属引种工作中的种源选择及种子保存提供依据。现将结果报道如下。     

亚洲璃眼蜱唾液腺-新基因（GP29）的原核表达及产物鉴定

将吸血诱导的亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因GP29的开放性阅读框插入pGEX-4T-1，转化BL21，表达出一相对质量为53ku的蛋白，其大小与预计结果一致。蛋白质的肽质量图谱和“1381．7511”肽段序列两方面的结果证明，SDS-PAGE胶板上相对质量为53ku的蛋白就是由目的基因表达的GST融合蛋白。该蛋白与Swiss PROT库中的任何蛋白均有较大差别，可能是一个新功能分子。     

猪泛素基因与PRRSV GP5基因融合表达质粒的构建及其免疫效果

构建了泛素（ubiquitin，Ub）基因与密码子优化的PRRSVGP5蛋白（optiGP5）基因融合表达质粒pIR—Ub—optiGP5。间接免疫荧光和Western—blot分析表明，重组质粒转染293T细胞后能够瞬时表达。将pIR—optiGP5和pIR—Ub—optiGP5两种质粒DNA肌肉注射免疫BALB／c小鼠后，分别检测小鼠血清中抗GP5抗体、T淋巴细胞的增殖能力以及CTL活性。结果显示，pIR—optiGP5质粒免疫组在二免后可以检测到荧光抗体，而pIR—Ub—optiGP5质粒免疫组一直未检测到抗GP5抗体，但该免疫组的T淋巴细胞增殖指数及针对GP5的特异性CTL反应数值明显高于pIR—optiGP5质粒免疫组。这表明泛素与GP5的融合表达可增强细胞免疫反应。     

重组GP5AB蛋白间接ELISA检测PRRSV抗体方法的研究

利用GST-GP5AB重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的间接ELISA方法。抗原最适包被浓度为2μg/mL,最佳封闭液为0.15%BSA,37℃封闭2 h后,再4℃封闭24 h,血清最适稀释度为1∶200,其作用时间为60m in,酶标抗体最适稀释度为1∶20 000,最适作用时间为90 m in,37℃显色10 m in,S/P≥0.284为阳性,S/P≤0.26为阴性,介于二者之间为可疑的判定标准。该抗原与猪其他4种临床症状类似的疾病的阳性血清反应呈阴性。批内和批间重复性试验结果,变异系数均小于7%,表明本方法具有较好的特异性和重复性。应用本方法初步检测了一些疫苗免疫仔猪血清样品,并与重组N蛋白和PRRSV抗原同时进行比较,结果显示3种抗原检测的结果基本一致。     

海洋低温蛋白酶生产菌YS-9412-130原生质体的制备与再生

以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象，从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明，在相同条件下，第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86．9％、70．3％、66．8％、63．4％、60．2％，再生率分别为10．5％、18．6％、17．9％、18．2％、17．8％；取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体，原生质体的形成率分别为72．1％、70．4％、60．5％，再生率为13．4％、18．9％、10．4％；溶菌酶浓度为2．5mg／mL、5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL，酶解60min，原生质体的形成率分别为40．6％、70．8％、81．8％、95．6％，原生质体的再生率为19．0％、19．2％、19．0％、10．6％；使用10mg／mL溶菌酶酶解YS-9412-130菌30min、60min、90min、120min，原生质体的形成率分别为30．8％、81．3％、81．7％、82．9％，原生质体的再生率分别为19．2％、19．3％、16．9％、11．2％；在细菌培养液中添加终质量浓度为5mg／mL、10mg／mL、20mg／mL和40mg／mL的甘氨酸，培养该菌16h后制备原生质体，原生质体的形成率分别为81．0％、81．1％、90．3％、90．8％、90．6％，再生率为19．1％、19．0％、19．3％、12．0％、9．0％；EDTA对原生质体的形成稍有促进作用，但作用超过30min会影响原生质体的再生；分别以0．6mol／L Kcl、0．3mol／L KCl＋0．3mol／L蔗糖、0．6mol／L蔗糖作为稳定剂，原生质体的再生率分别为10．9％、19．6％、25．9％。结论认为，YS-9412-130原生质体制备的最佳条件为选用第2代YS-9412-130菌，在培养基中添加终质度浓度为10mg／mL的甘氨酸培养16h后，再将菌体置于含有0．05mol／LEDTA的高渗溶液中30℃预处理30min，用10mg／mL溶菌酶，30℃酶解60min，再用0．6mol／L蔗糖作为原生质体再生培养稳定剂，比较适合于YS-9412-130原生质体的制备与再生。这一试验结果将为通过原生质体技术对YS-9412-130菌进行遗传改良提供重要参数。     

Mutation genetics of salt tolerance in barley: An assessment of Golden Promise and other semi-dwarf mutants

A review of research at the Scottish Crop Research Institute (SCRI) on the effects of semi-dwarfing genes on salt tolerance in barley is given. Work began in1993 with the fortuitous and unexpected result that the cultivar ‘Golden Promise’ showed considerable tolerance to salt. Golden Promise is a gamma-ray induced semi-dwarf mutant of the cultivar ‘Maythorpe’. The parent and mutant cultivars are presumed to be isogenic, but show significant differences in their responses to salt stress. The positive and pleiotropic effects of the mutant gene, commonly known as GPert were found to be effective in a number of genetic backgrounds. Earlier, in 1991 Frackowiak showed that the GPert mutation was allelic to the ari-e mutants in barley. The ari-emutants were salt tested and found to show the same positive responses to salt stress as Golden Promise. This supported the allelism tests, and consequently the GPert symbol was changed to ari-e.GP. The semi-dwarf mutant sdw1 (also known as denso) and the erectoides semi-dwarf mutant,ert-k ³² were also tested for their effects on tolerance to salt, but did not show any positive effects. Salt tolerance was therefore not a general phenomenon of semi-dwarf stature but specific to mutations at the Ari-e locus in these lines. Genetic markers (RAPDs, AFLPs and SSRs) have been used for fingerprinting, genetic mapping, and QTL analysis. The markers have helped 1) confirm the isogenic relationship between Maythorpe and Golden Promise, 2)clarify the confusion over the pedigree of Golden Promise, and 3) genetically map the ari-e.GPlocus and examine its pleiotropic effects. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

Vaccination of Plasmid DNA Encoding Somatostatin Gene Fused with GP5 Gene of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Induces Anti-GP5 Antibodies and Promotes Growth Performance in Immunized Pigs

Somatostatin （SS） is a hormone that inhibits the secretion of growth hormone. Immunization against SS can promote the growth of animals. This paper described the effects of DNA immunization on the growth and antibody response in mice and pigs immunized with a plasmid DNA encoding SS fused with GP5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV）. A fragment of 180 bp encoding partial SS gene was amplified by PCR from the genomic DNA of peripheral blood mononuclear cells of pigs, and cloned as a fusion gene with PRRSV GP5 in plasmid pISGRTK3. Three times of immunization with the resulting plasmid pISG-SS/GP5 induced anti-GP5 antibodies in BALB/c mice and pigs, as demonstrated by GP5-specific ELISA and immunoblotting. Compared with pigs immunized with empty vector pISGRTK3, the growth performance of pigs immunized with pISG-SS/GP5 was increased by 11.1% on the 13th week after the last vaccination. The results indicated the plasmid DNA encoding SS and PRRSV GP5 fusion gene elicited anti-GP5 antibodies and improved the growth performance of immunized pigs.     

超干燥保存的烟草种子活力变化规律研究

 在烟草种子超干燥保存技术研究的基础上,对1993～1994年采收并经过超干燥处理的4份烟草种子分别在原干燥器内继续保存2年和4年后进行的种子活力跟踪试验。并对种子发芽势、发芽率和发芽指数等指标作方差分析和多重比较。结果为:2年后不同干燥剂间种子的发芽势、发芽率和发芽指数差异显著,其中,各处理的种子活力排列为:硅胶＞硅胶＋生石灰＞生石灰;2∶1＞1∶1＞3∶1＞4∶1;牛津3号＞其它品种。4年后,烟草种子的发芽指数硅胶＞硅胶＋生石灰＞生石灰。万良烟＞其它品种,比例间无显著差异。对种子的含水量、发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数相关矩阵进行分析,结果为含水量与发芽指数和活力指数之间,发芽势与发芽指数之间,发芽指数与活力指数之间差异显著,种子含水量对种子活力贡献最大,其次为发芽率、发芽势、发芽指数。几项指标间的关系可用多元方程:Y=0.496 507＋0.136 777 X₁＋0.000 567X₂－0.007 197 X₃－0.000 201 X₄表示。方程可信度达93.12%.该试验为长期、安全保存烟草种子和延长超干燥烟草种子保存寿命提供理论依据及配套措施。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)的单克隆抗体,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)GP5重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和NS0浆细胞瘤细胞进行融合,经间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆化获得3株能稳定分泌抗PRRSV GP5蛋白单克隆抗体的(mAb)杂交瘤细胞株,命名为4B7、2C5和2E4。间接免疫荧光(IFA)和免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)结果显示,3株mAb均与感染PRRSV BJ 4株的Marc 145细胞特异性反应,表明其可识别天然病毒蛋白。mAb的Ig亚类均为IgG1,细胞培养上清和腹水的ELISA效价分别为1∶256和1∶51 200,Western blot分析表明,mAb均特异性识别PRRSV GP5蛋白。