胚胎干细胞及种系嵌合体的研究进展

胚胎干细胞是着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞经体外分化抑制培养建立的多能性细胞系 ,具有与胚胎细胞相似的形态特征和分化潜能 ,体外培养时保持未分化状态 ,可以传代增殖。改变维持胚胎干细胞不分化的培养条件 ,胚胎干细胞可自发分化成多细胞结构。在一定诱导下 ,胚胎干细胞可向多个方向分化 ,并生成多种功能细胞。胚胎干细胞注入到胚泡期胚胎或与桑椹期胚胎聚合 ,可以参与包括性腺在内的各种组织的嵌合体的形成。胚胎干细胞在细胞分化与调控 ,胚胎发育 ,遗传病 ,肿瘤 ,免疫和组织或器官移植等研究中显示着广泛的应用前景。而种系嵌合体的获得是实现 ES细胞途径的决定步骤 ,低的种系嵌合率则是制约 ES细胞应用的关键。提高供体 PGCs在受体生殖腺中的比例 ,缩短 ES细胞的体外培养时间 ,以及注入早期发育阶段的受体胚胎等都能提高种系嵌合率。文章从多个方面综述了胚胎干细胞的最新研究成果 ,并着重以禽类 ES细胞为例论述了种系嵌合体的检测方法 ,种系嵌合率的影响因素以及提高种系嵌合率的方法     

猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素的研究

从五指山猪(WSZP)近交系第8～13代培育群中，先后选用21头5～10月龄青年母猪，分别于授精后25～30d采集胎儿106个，进行原始生殖嵴(PGCs)细胞分离、培养等建系技术研究。以DMEM F10(1:1)为基础培养液，按添加或不添加生长因子，将培养液分为A、B、C3种，并以STO细胞作饲养层，在38℃、5.0％CO2和湿润的气相中进行培养建系。结果获得胚胎生殖嵴细胞(EG)细胞系6个细胞株，其中1个EG细胞株传至11代、2个传至5代、1个传至4代、2个传至3代冻存。并进行了AKP染色、体外分化、冷冻-解冻复苏和嵌合体制作等鉴定研究。研究发现：不同胚龄对EG细胞建系具有一定影响，不同培养液对EG细胞建系效果不同，STO细胞饲养层的质量是建株、传代、冷冻-解冻复苏的关键因素之一。EG细胞系的初步建立，为今后筛选进入种系的EG细胞系、实施体外基因操作提供了可能。     

哺乳动物嵌合体制作及分析进展

嵌合体技术对研究哺乳动物早期胚胎的发育,探索细胞分化规律,掌握基因的表达调控规律,建立遗传疾病动物模型等具有重要意义。本文分别就近几年来嵌合体动物的制作方法及分析手段作一简要概述。     

毛白杨嵌合体的研究：Ⅰ.嵌合体的认证及生物学研究

对自河北省宁晋县获得的一个特殊毛白杨无性系的初步研究表明其为一嵌合体。该嵌合体苗木的主要性状与毛白杨相似，但叶片略小，叶尖较尖以为灰绿色，表皮可纵向分为两部分，一部分平滑，另一部分有纵棱；皮孔分布均匀，菱形。     

柑桔嫁接嵌合体--澧州红脐橙

澧县地处湖南省北部，素有“鱼米之乡”之称，属中亚热带向北亚热带过渡的季风湿润气候，年平均气温16．5℃，雨量1272mm，年日照时数1771h，无霜期为265d。由于常受灾害性天气的影响，又不是脐橙的适宜生态区，澧县生产的脐橙品质和产量都不及适宜区。为选育抗寒、优质、高产的脐橙新品种，我所于1995年成立了专题研究组，对澧县脐橙进行全面普查，开展选优工作。2000年11月中旬，在一户农家改接脐橙园中发现一变异枝，后经中国农科院柑桔研究所、湖南省农科院园艺研究所、湖南农业大学等单位的专家鉴评，认为“系桔橙嫁接嵌合体，且遗传性稳定，该品种的问世对改变北亚热带及脐橙产区品种结构和优化脐橙生产具有积极推动作用。”由于该品种果形似脐橙，故暂定名为“澧州红脐橙”，简称“澧州红”。     

棉花半配生殖遗传特性的初步分析

通过半配合材料ＶＳｇ自交和杂交后代的观察分析，确定半配生殖的遗传方式，提出了应用于育种的有效途径。     

转基因鱼品系的纯化

外源基因(双链DNA)作为外显子可能整合在一条染色体上的不同DNA链上,转基因鱼的第一代为嵌合体。三杂交纯化过程方可获得转基因鱼纯合体:嵌合体与纯系个体两次回交,获得杂合子单一的杂合体;第二代杂合体自交可以获得纯合体。     

低温诱导胡子鲶四倍体

胡子鲶卵子受精后48分钟即将开始第一次卵裂时施以4℃冷水处理20分钟，孵化率30．9％，仔鱼畸形率61．3％。对存活小鱼作染色体检查初步估计约有33％四倍体、22％嵌合体（2n－4n）、其余为二倍体。四倍体染色体数4n=112、二倍体2n=56，而嵌合体并存2n和4n两种染色体组合。四倍