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本研究旨在探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先,用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii(Cyt-Tra)]、Ii CLIP (class Ⅱ-associated invariant chain peptide)-三聚体区[Ii(CLIP-TRIM)]和Ii突变体[Ii(M81-87aa)、Ii(M91-99aa)和Ii(M81-99aa)]分别插入pET-32a和pEGFP-C1构建相应的原核和真核重组质粒。其次,将构建的含有绿色荧光蛋白的重组质粒与实验室保存的含有红色荧光Rab5a和Rab7b的重组质粒共转染至人胚胎肾细胞系293 T,观察它们的共定位。将构建的原核重组质粒进行表达和纯化,最后用拉下法和免疫印迹检测Ii与Rab5a和Rab7b的结合域。结果表明,成功构建Ii结构域及Ii突变体的重组质粒。Ii(Cyt-Tra)及Ii突变体均能与Rab5a和Rab7b在细胞内共定位,而Ii(CLIP-TRIM)与空载体却不能。Ii的胞浆区和跨膜区是与Rab5a和Rab7b结合的功能结构域,而不是CLIP与三聚体区。综上所述,鸡Ii与Rab5a和Rab7b共定位和结合的区域是其胞浆区和跨膜区,而不是内质网腔区。这些结果提示Rab分子参与了Ii在胞内细胞器的转运机制,为进一步研究Ii及其载体在细胞内的转运机制和功能提供了新的途径。 相似文献
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《山东省农业管理干部学院学报》2019,(6):99-100
对于现阶段的刑事侦查来讲,痕迹检验应当构成其中不可或缺的侦查流程。具体来讲,痕迹检验应当针对于整个犯罪现场,侦查人员在查找特定犯罪痕迹的前提下对其予以相应的提取处理,然后将其运用于判断整个案件必需的线索与证据。因此可见,刑事侦查的全过程不能够缺少痕迹检验,其具备显著的价值与意义。 相似文献
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酚二磺酸法测定土壤硝态氮具有较高的灵敏度,但是操作繁琐,容易引起误差的因素较多。通过改变氨水加入顺序、更换蒸发器皿和加热方式,减小误差,简化操作,测定结果更准确、可靠。 相似文献
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