硒蛋白X基因克隆、定点突变、原核表达及多克隆抗体制备

本试验旨在克隆鉴定猪硒蛋白X(Sel X)基因,将其定点突变后进行原核表达,获得重组蛋白,并制备猪Sel X多克隆抗体,为以猪为模型Sel X功能研究奠定基础。利用c DNA末端快速克隆(3'-RACE)技术从猪肝脏总RNA扩增出含开放阅读框(ORF)至poly(A)共1 215 bp的Sel X基因c DNA片段,其348 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有88%和91%序列同源性,猪Sel X基因提交NCBI Gen Bank数据库,序列号为EF113597。ORF编码氨基酸残基中硒代半胱氨酸(Sec)位于C-端第95个残基,其编码密码子TGA经定点突变为半胱氨酸(Cys)的TGT后,将其插入载体p ET30,转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导2 h获得融合表达产物,经His-tag亲和层析后,获得分子质量为18.0 ku的纯化蛋白。将纯化获得的Sel X基因突变体融合蛋白(Sel Xm)免疫兔子,得到效价高达1∶20 000的多克隆抗体,免疫印迹(Western-blot)结果显示该抗体能特异性识别纯化的Sel Xm和猪肝脏中相应Sel X。本试验成功克隆并鉴定了猪Sel X基因,并制备了其多克隆抗体。     

Kruppel样因子15对脂肪沉积和肌纤维类型的影响及其可能机制

Kruppel样因子15(KLF15)是一种新发现的Kruppel样因子家族(KLFs)成员,为一种真核锌指蛋白转录因子。KLF15在动物体内呈现多组织表达特性,该基因过表达能促进动物脂肪沉积,且能影响肉质性状候选基因和Ⅰ型肌纤维基因的表达。因此,深入研究KLF15对脂肪沉积和肌纤维类型的影响及其可能机制,将为改善动物肉品质提供新的思路。本文综述了KLF15的发现、结构特征、表达规律及其与脂肪沉积和Ⅰ型肌纤维之间的关系。     

牛源多杀性巴氏杆菌主要荚膜群和脂多糖基因型两组三重PCR检测方法

为掌握国内牛源多杀性巴氏杆菌流行的主要荚膜群及脂多糖基因型,建立了检测多杀性巴氏杆菌(Pm)及其A、B荚膜群的三重PCR(PmAB-3PCR)以及检测3个脂多糖基因型的三重PCR(LPS-3PCR)方法,检验了其特异性和敏感性,用感染Pm小鼠的组织和人工污染Pm的牛鼻拭子样品进行了临床模拟检验,并对30株P m进行了PCR检测和传统血清学分型比较。结果显示:PmAB-3PCR特异性好,PmAB-3PCR和LPS-3PCR的DNA检测限分别为10~100 pg和1 ng,二者对菌液的检测限分别为200~2000 CFU和2000~20000 CFU。模拟临床样品PmAB-3PCR检测结果与细菌分离结果100%一致。PmAB-3PCR与琼扩试验的符合率为84%,二者检出的阳性率分别为88%和72%,差异不显著(P>0.05);LPS-3PCR与琼扩试验的符合率为60%,检出的阳性率分别为90%和50%,差异显著(P<0.05)。结果表明,建立的两组三重PCR方法准确高效且重复性好,可取代常规血清学方法用于国内牛巴氏杆菌病的诊断、流调和疫苗株筛选。     

亮氨酸调节动物骨骼肌蛋白质分解的研究进展

随着对亮氨酸调节试验动物(如鼠)生理功能研究的深入,学者们发现,亮氨酸对于骨骼肌蛋白质沉积的影响不仅是其可以提高骨骼肌蛋白质的合成,还由于其可以减少骨骼肌蛋白质的分解,而这一过程中,亮氨酸对于骨骼肌细胞内蛋白质降解的多条途径都存在抑制作用。本文综述了亮氨酸对动物(如鼠)骨骼肌及其细胞内蛋白质分解的调节作用,并分析讨论了这一过程当中亮氨酸的相关作用机制。     

亮氨酸调节哺乳动物骨骼肌蛋白质合成的研究进展

本文综述了亮氨酸处理对哺乳动物(主要是鼠和猪)骨骼肌及其细胞蛋白质合成的影响规律,并分析讨论了这一过程中亮氨酸的作用机制.近年来,大量的体内和体外试验研究表明,长期或短期高剂量的亮氨酸处理能够刺激哺乳动物骨骼肌内蛋白质的合成,而这不仅仅是由于亮氨酸可以为骨骼肌蛋白质合成提供能量和基质,还由于其可以调节骨骼肌细胞内与蛋白...     

磷酸酪氨酸互作结构域 １基因对肉质性状的调控

磷酸酪氨酸互作结构域１（ｐｈｏｓｐｈｏｔｙｒｏｓｉｎｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１，ＰＩＤ１）基因是最近发现的与脂肪代谢相关的新基因。在不同动物的不同组织中均能检测到 ＰＩＤ１基因的表达。ＰＩＤ１基因表达过量能促进前体脂肪细胞的增殖，影响肉质性状相关候选基因［如过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅激活因子 １α（ＰＧＣ-１α）和解偶联蛋白（ＵＣＰ）基因］的表达。因此，深入探讨 ＰＩＤ１基因在畜禽肉品质上的调控作用及其影响机制，将为改善畜禽肉品质提供新的思路。本文概述了 ＰＩＤ１基因的发现和表达规律、ＰＩＤ１蛋白的结构、ＰＩＤ１基因与肉质性状候选基因的关系及其在畜禽肉质调控中的可能作用。     

湿地松良种壮苗培育实用技术

本文对湿地松良种和圃地选择、沙床催芽、芽苗移栽、苗期管理等一系列技术措施进行了详尽的阐述,为培育湿地松良种壮苗提供了科学的依据。     

体外模拟消化环境对鱼油氧化的影响研究

本文采用硫代巴比妥酸反应物法(TBARS),分别测定新鲜鱼油、轻度氧化鱼油及新鲜乳化鱼油在体外模拟消化前后的过氧化值,以探究人体消化环境对鱼油品质的影响。结果表明:消化过程均能促进3种鱼油的氧化,且肠消化液对鱼油氧化的影响更显著,新鲜乳化鱼油的氧化程度最高。建议人们在摄食鱼油时,应同时摄入富含抗氧化营养素的食品,以保证鱼油的功效,降低鱼油氧化对人体的危害。     

基于SWOT分析的政和白茶产业发展战略探讨

福建省政和县是我国白茶主产区之一，所产白茶以其独有的优异品质在出口市场上占有重要的地位，白茶产业已成为该县的支柱产业之一，是农民收入的重要来源：然而，目前政和白茶产业发展尚处于初步成长阶段，本文从政和白茶产业发展现状着手，基于SWOT分析框架，探讨政和白茶产业发展战略。