拮抗细菌菌株YJ15的分离鉴定、发酵条件优化及对越橘灰霉病的防效

从越橘(Vaccinium spp.)健康果实中分离获得65株内生细菌,采用琼脂平板扩散法筛选出1株对灰葡萄孢具有高拮抗作用的菌株YJ15,经形态特征观察、生理生化测定和16S rRNA序列分析,鉴定该菌株为暹罗芽胞杆菌(Bacillus siamensis)。在单因素试验的基础上,通过Plackett-Burman设计筛选出3个发酵重要因素(温度、pH和氮源)。利用最陡爬坡试验和响应面分析对菌株YJ15的发酵条件进行优化,获得最优发酵条件为葡萄糖20 g·L~(-1),酵母粉36.01 g·L~(-1),FeSO4 1.5 g·L~(-1),甘油1 g·L~(-1),K2HPO41.5 g·L~(-1),接种量1 mL,摇床转速150 r·min-1,温度31.35℃,pH 7.43,培养时间15 h。采用生长速率法测定菌株YJ15的发酵液对9种病原真菌均有抑制作用,抑菌率在43.42%～92.39%之间。菌株YJ15发酵液处理越橘果实后,灰霉病的发病率和病斑直径均明显小于对照,与多菌灵防效差异不显著,可用于越橘灰霉病的防治。     

梨灰霉病菌拮抗细菌Pseudomonas extremorientalis的鉴定、发酵条件优化及防效评价

灰霉病是梨贮藏期的主要病害，发病率高，为害严重。为了有效控制该病害发生，利用平皿稀释法从梨根际土壤中分离内生细菌，并采用琼脂平板扩散法进行抑菌活性初筛，筛选出1株拮抗细菌L21，基于形态特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrB序列分析，鉴定为Pseudomonas extremorientalis。采用生长速率法测定菌株L21的无菌发酵液对12种病原真菌均有抑制作用，采用Salkowski比色法测定菌株L21能够分泌吲哚-3-乙酸（IAA），采用酪蛋白培养基平板检测菌株L21可以产生胞外蛋白酶。在单因素试验的基础上，通过Plackett-Burman试验设计筛选出pH、硫酸锰和转速3个影响发酵的重要因素，利用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验设计，获得菌株L21的最佳发酵条件为蔗糖20 g/L、牛肉膏20 g/L、硫酸锰3.00 g/L、甘油1 g/L、K₂HPO₄ 1.50 g/L、接种量8%、温度34℃、pH 7.31、转速200.66 r/min和培养时间15 h。处理96 h后，菌株L21对梨灰霉病的防效为74.23%，与多菌灵的防效差异不显著。本研究表明菌株L21具有广谱抑菌活性，为植物真菌病害的生物防治提供新的生防资源。     

梨网蝽触角嗅觉相关基因分析

为阐明梨网蝽Stephanitis nashi对其寄主植物的化学感受机制,本研究采用高通量测序平台对梨网蝽成虫触角进行转录组测序,基于7大数据库对转录组数据进行基因功能注释,筛选获得梨网蝽的主要嗅觉相关基因并进行生物信息学和系统进化树分析。结果表明：共获得28 017条 unigenes,长度在1 000 bp以上的unigenes有9 921条;通过与7大数据库进行BLAST比对,梨网蝽触角转录组数据中的17 891条unigenes被成功注释;在已成功注释的unigenes中,鉴定得到12个 OBP基因和17个CSP基因,其中OBP基因所编码的蛋白有6个属于Classic家族;而CSP基因所编码的蛋白全部具有4个保守的半胱氨酸位点,符合昆虫CSP基因的结构特征。进化分析结果显示,梨网蝽6个OBP基因的氨基酸序列与其他昆虫OBP基因的氨基酸序列聚为3个分支;梨网蝽16个 CSP基因与其他昆虫CSP基因的进化树也聚为3个分支。