2种桑树病原真菌多重PCR检测方法的建立

目的 褐斑病与轮纹病是桑树Morus alba 的2种常见真菌性病害,危害严重,给生产上带来极大损失。本研究旨在快速准确地诊断2种病害的主要病原菌新褐斑壳丰孢Neophloeospora maculans与膝节霉Gonatophragmium triuniae。方法 基于多重PCR原理,针对2种病原菌的核糖体内转录间隔区(Internal transcribed spacer, ITS)序列设计多重PCR的特异性引物,优化多重PCR反应的条件,并通过对45份不同地区桑树褐斑病与轮纹病样本进行检测以验证所建立的多重PCR的可行性。结果 建立的多重PCR检测体系具有良好的可操作性,特异性良好,2种病原菌的DNA检测灵敏度分别达0.1 和1.0 pg/μL,通过对不同地区的田间收集的多份桑树病样进行检测,可以明显区分出不同地区2种病害病原菌的种类。结论 所建立的多重PCR技术可用于桑树褐斑病与轮纹病病原菌的快速检测,可为桑树真菌性病害的防控建立基础。     

森林资源评估计算机数据处理系统的实现

森林资源评估是衡量林木经济价值和营林成效的重要手段。使用计算机对森林资源评估数据进行处理,不仅可以提高精度,减少人为计算差错,而且极大提高工作效率。本文就森林资源评估数据处理系统流程及其中关键模块——资源评估程序功能实现及流程作简要介绍,并对评估精度相关的技术性问题进行探讨,提出解决途径。     

桑褐斑病病原菌的分离鉴定及高通量测序分析

桑褐斑病是一种发生较为普遍的真菌性病害。从陕西安康蚕桑主产区收集桑褐斑病病样,结合科赫氏法则,采用形态学及分子生物学的方法对桑褐斑病病原菌进行分离鉴定;使用高通量测序技术,确定桑褐斑病病原菌的主要类群;通过水合氯醛透明反应观察桑褐斑病病原菌在宿主桑树叶片中的定植状态。结果表明,侵染陕西安康桑树的桑褐斑病病原菌为桑新褐斑壳丰孢Neophloeospora maculans;病原菌在PDA培养基上呈白色,生长速度缓慢,分生孢子为透明圆柱形,两端逐渐变细,有隔膜;菌丝主要寄生在桑叶的气孔与叶脉周边;病原菌rDNA序列全长5 512 bp, GC含量51.16%。上述结果确定了侵染陕西安康蚕桑主产区桑褐斑病病原菌的种类,为桑褐斑病的防治提供了理论依据。     

广州桑园桑树根结线虫的形态学与分子鉴定

桑树根结线虫病是华南蚕区危害严重的土传病害之一.针对华南蚕区桑园根结线虫危害普遍发生的现状,对采自华南蚕区的桑园桑根结线虫病样进行了病原线虫的分离与形态学观察,并对其rDNA、CO Ⅰ基因分别进行了测序和系统发育分析,同时在基于桑根结线虫特异分子检测基础上进行了线粒体全基因组的测序比较.结果 表明,广州桑园桑根结线虫病样分离的根结线虫具有典型的象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)的形态特征;其rDNA与CO Ⅰ基因序列与已报道的象耳豆根结线虫序列一致性均高达99％以上;rDNA与CO Ⅰ的进化树分析发现其与象耳豆根结线虫同源序列均聚在同一枝;PCR的特异性检测结果表明,只有象耳豆根结线虫的特异性引物扩增,获得236 bp的目的 条带;线粒体全基因组序列全长为17080 bp(GenBank收录号:MW186714),与GenBank唯一报道的象耳豆根结线虫M.enterolobii(KP202351.1)一致性达99.7％.基于上述的生物学观察和分子生物学研究结果,认为广州桑园的桑根结线虫病病原为象耳豆根结线虫M.enterolobii,这为桑树桑根结线虫病的发生和防控提供了实验参考.     

桑细菌性枯萎病病原菌的分离鉴定与全基因组序列分析

为明确华南蚕区桑树细菌性枯萎病主要病原菌的种类,本研究从广西、广东等地桑园采集了多份桑树细菌性枯萎病病样,采用分离培养、形态学鉴定和分子生物学鉴定的方法,对病原菌进行了分离鉴定,并通过药敏试验分析病原菌的耐药性。结果表明,结合柯赫氏法则,将分离到的桑枯萎病病原菌鉴定为产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca,编号AKKL-001(菌种保藏号GDMCC No.1.1602)。该病原菌属革兰氏阴性菌,基因组全长6 149 586 bp,含有5 792个基因,GC含量55.80%;药敏试验结果表明,病原菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻吩、链霉素、麦迪霉素等抗生素具有耐受性。本研究报道了桑细菌性枯萎病病样上分离的产酸克雷伯氏菌,为桑细菌性枯萎病病原菌的研究提供理论依据,全基因组测序的结果为桑细菌性枯萎病的相关致病机制研究奠定了基础。     

茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测方法的建立

【目的】桑树青枯病是由茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种危害严重的细菌性病害，建立一种快速、灵敏的茄科雷尔氏菌检测方法，对桑树青枯病的有效控制有重要意义。【方法】本研究以茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因（Pectate lyase gene）为靶标，基于等温多自配引发扩增技术（Isothermal multiple self-matching-initiated amplification,IMSA）的引物设计原理，结合环介导等温扩增技术（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）的反应体系，建立一种快速有效检测茄科雷尔氏菌的IMSA-LAMP法，并对该方法的最佳反应参数进行了筛选。【结果】基于果胶裂解酶基因建立的IMSA-LAMP检测方法在64.5℃条件下，45 min内可完成对阳性样品的特异检测，对茄科雷尔氏菌的模板DNA检测灵敏度达200 fg/μL （对应菌为1×10²CFU/mL）；对生产上收集的疑似桑树青枯病病样的检出率为87.5%。【结论】IMSA-LAMP检测方法具有良好的实用...