绿绒蒿属植物不同DNA提取方式的比较

以绿绒蒿属(Meconpsis Vig.)3种植物叶片为试材,采用研钵手动研磨和电动匀浆马达研磨器2种研磨方式处理叶片,采用改良的CTAB法、国产天根试剂盒、德国Qiagen试剂盒法3种提取方式从绿绒蒿属植物叶片中提取DNA,研究了不同提取方式对绿绒蒿属植物DNA提取效果的影响,以期为绿绒蒿属植物的分子遗传学研究奠定基础。结果表明:几种不同提取方法均能获得较为完整的DNA,研钵手动研磨的植物叶片提取的DNA无论是从质量、纯度还是得率均好于电动匀浆马达研磨器研磨。3种提取方式提取的DNA均可直接用于下游PCR反应,改良的CTAB法提取的DNA纯度和得率均很高;天根试剂盒法和Qiagen试剂盒法提取的DNA得率不高;Qiagen提取的DNA纯度和质量均比较好,但成本较高。     

绿绒蒿SSR-PCR反应体系的建立与优化

为建立适合绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)的SSR反应体系,以多刺绿绒蒿(M.horridula)为试材,应用L_(25)(5~6)进行正交试验,对影响SSR-PCR的主要因素进行优化。结果发现,Mg~(2+)对PCR反应效果影响最大,而dNTPs的影响最小。5个因素水平的变化对绿绒蒿属SSR-PCR反应体系的影响从大到小依次为Mg~(2+)Taq酶含量引物浓度DNA模板量dNTPs浓度。适宜绿绒蒿属的SSR反应体系:总体积25μL,Mg~(2+)浓度2 mmol/L,dNTPs浓度0.2 mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,DNA模板量60 ng,Taq聚合酶量1.6 U,其余用ddH_2O补充。扩增程序为94℃1.5 min;94℃20 s,最适退火温度20 s,72℃1 min,共35个循环;72℃5 min;4℃保存。利用优化后的反应体系对同属另外8种绿绒蒿(M.wallichi、M.racemosa、M.lingholm、M.prattii、M.rudis、M.napaulensis Pinky、M.paniculata、M.superba)进行PCR扩增,均获得优良的扩增产物。因此,该试验建立的反应体系适用于绿绒蒿属植物的SSR-PCR反应。     

昆明地区引种荷花遗传多样性分析

采用InDel、EST-SSR和SSR组合分子标记技术研究94份引种至昆明地区的荷花种质的遗传多样性,结果显示:筛选出的60对引物共扩增出204条条带,检测到等位基因233个。3种标记平均Shannon指数≥0.85,基因多样性指数≥0.52,多样性检出率较高。通过Mantel检测表明组合标记与各个独立标记的相关性r值均高于0.789 4。采用组合标记进行聚类分析和群体结构分析均将94份种质资源划分为5个类群,与传统分类及种源地分类存在一定关联。美洲莲与亚洲莲的遗传多样性存在明显差异,遗传组分分析结果表明不同品种的中美杂交莲也存在差异,分布于美洲莲或亚洲莲中。综上,引种至昆明地区的94份荷花资源遗传多样性丰富,组合标记在荷花种质资源的多样性检出率较高,可为后续优良品种选育提供种质资源和技术支撑。     

绿绒蒿属藏药植物ndhF和rbcL序列片段特征分析

应用叶绿体ndhF和rbcL序列对绿绒蒿属藏药植物欧贝:长叶绿绒蒿Meconopsis lancifolia、全缘叶绿绒蒿Meconopsis integrifolia、红花绿绒蒿Meconopsis punicea、尼泊尔绿绒蒿Meconopsis napaulensis;刺儿恩:总状绿绒蒿Meconopsis racemosa、多刺绿绒蒿Meconopsis horridula进行鉴别,对其序列特征差异和亲缘关系进行分析。PCR直接测序后获得六种绿绒蒿的rbcL和ndhF的部分序列。用Clustal X2.1和MEGA6.06等软件分析得到任意两种间均有变异位点和遗传距离,根据rbcL和ndhF基因部分序列数据分别建立系统树。rbcL序列分析显示,任意两种间有变异位点;ndhF序列分析显示,除总状绿绒蒿(居群1)和多刺绿绒蒿序列无明显差异外,其他任意两种间均有位点变异。根据叶绿体ndhF和rbcL基因序列数据可以很好的鉴别6种绿绒蒿属藏药植物。     

全缘叶绿绒蒿ISSR体系的建立与优化

以全缘叶绿绒蒿的DNA为模板,利用正交实验设计,研究了Mg~(2+)、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、DNA这5种PCR反应成分对反应体系的影响,以期建立并优化一个适合全缘叶绿绒蒿的ISSR反应体系,并用优化的体系对UBC公布的100条ISSR引物进行筛选。结果表明:在50μL优化后的反应体系中,含3 mmol·L~(-1) Mg~(2+)、2mmol·L~(-1)dNTPs、0.4mmol·L~(-1)引物、1.25UTaq DNA聚合酶、60ng DNA。通过梯度PCR仪检验,确定了适宜的退火温度、延伸时间和循环次数。利用该体系共筛选出16条ISSR引物,并对全缘叶绿绒蒿共10株个体材料进行扩增检验,获得了较好的扩增效果。利用该体系,可为今后ISSR标记在绿绒蒿属植物的种质鉴定和遗传多样性分析等方面的应用提供一定的试验基础。     

不同浓度赤霉素对长果绿绒蒿种子萌发特性的影响

以生长于云南丽江玉龙雪山的长果绿绒蒿(Meconopsis delavayi(Fr.)Fr.ex Prain)种子为材料,对其表型特征进行了测量,同时分别采用不同浓度(50,100,150,200,250,300mg/L)的赤霉素(GA_3)处理种子,在光照恒温恒湿箱内进行种子萌发实验,研究不同浓度的赤霉素对长果绿绒蒿种子萌发的影响。结果表明:长果绿绒蒿种子的平均长宽比为(3.25±0.08),平均千粒重为(1.33±0.06)g,种子平均含水量为(6.55±0.85)%。200~300mg/L GA_3处理可提高长果绿绒蒿种子发芽率、发芽势、发芽指数,缩短平均发芽时间,加快种子发芽速度,增强种子的发芽能力,且不同浓度赤霉素处理间差异显著(p<0.05),说明一定浓度的GA_3处理对长果绿绒蒿种子的萌发具有显著的影响。